目的探讨c-FLIP基因在血液肿瘤中的表达以及临床意义。方法以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测22例血液肿瘤骨髓中的c-FLIP m RNA表达,Western-Blot蛋白质印迹(WB)方法检测其c-FLIP蛋白的表达。病例包括急性白血病(AL)12例(其中初治11例及反复复发1例)、完全缓解(CR)后AL 2例、慢性粒细胞性白血病(CML)2例、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)2例、多发性骨髓瘤(MM)2例和骨髓增生异常综合征-难治性贫血伴原始细胞增多2型(MDS-RAEB-2)2例。结果初治和复发AL,初治CML、CLL、MDS-RAEB-2、MM患者c-FLIP m RNA和蛋白均表达异常增高。初治AL c-FLIP m RNA及43 k D蛋白的表达显著高于慢性白血病(CL)(P<0.05)。MDS-RAEB-2、MM与ALc-FLIP m RNA的表达差异均无统计学差异(P>0.05),但MDS 55 KD、43KD蛋白表达明显低于AL(P<0.05),而MM无明显差异。对照组m RNA及其蛋白均阴性表达,CR后AL m RNA阴性表达,但其蛋白均有表达,低表达于AL,尤其43 k D明显低于AL(P<0.05)。c-FLIP表达在初治AL患者与其年龄、性别、初诊白细胞数、LDH以及核型、免疫表型无关。AL患者c-FLIP m RNA及其蛋白表达与初治疗效无明显相关性(P>0.05)。结论血液肿瘤患者c-FLIP m RNA及其蛋白表达异常增高,能够反映出恶性血液病患者骨髓造血细胞的凋亡抑制情况,与恶性血液病的类型、疾病的状态以及病程中的临床疗效、预后等都密切相关。
目的探讨c-FLIP si RNA干扰c-FLIP m RNA水平对阿霉素耐药细胞K562/ADR的耐药性的影响及作用机制。方法应用si RNA干扰的方法抑制K562及K562/ADR细胞c-FLIP的表达,通过荧光定量PCR的方法检测c-FLIP m RNA表达及对多药耐药基因MDR1 m RNA水平的影响。MTT法检测c-FLIP干扰与否对K562及K562/ADR细胞增殖的影响,Annexin V/7-ADD双染研究c-FLIP干扰与否对K562及K562/ADR细胞凋亡的影响。结果与阴性si RNA转染组相比较,c-FLIP si RNA转染下调K562细胞中c-FLIP的m RNA后,K562细胞增殖受到一定程度的抑制(P<0.05),但是并未显著诱导细胞凋亡,c-FLIP干扰与否K562细胞48 h增殖率分别为(69.14±1.82)%和(60.69±2.23)%,凋亡率分别为(1.7±0.3)%和(1.8±0.2)%。与阴性si RNA转染组相比较,c-FLIP si RNA转染抑制K562/ADR细胞中c-FLIP的m RNA后,K562/ADR细胞增殖显著被抑制(P<0.05),并显著诱导了细胞凋亡增加(P<0.05),c-FLIP干扰与否K562/ADR细胞48 h增殖率分别为(-6.07±0.71)%和(-37.45±3.53)%,凋亡率分别为(5.2±0.4)%和(9.2±0.4)%。并且c-FLIP si RNA下调c-FLIP m RNA水平后,K562/ADR细胞中的多药耐药基因MDR1的m RNA表达水平也被显著下调(P<0.05)。结论 c-FLIP si RNA下调K562/ADR细胞中c-FLIP的m RNA水平抑制了多药耐药基因MDR1的表达,从而抑制了K562/ADR细胞对阿霉素的耐药性。
