南京医科大学科技发展基金(2010NJMUZ35)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：李卫星朱一超杜军胡圳圳田寅辉更多>>
- 相关机构：泰州职业技术学院南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京医科大学科技发展基金江苏省博士后科研资助计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 稳定表达GFP-C-Daam1的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系的建立
- 2011年
- 目的:构建稳定表达GFP和GFP-C-Daam1的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,以便进一步研究Daam1对乳腺癌细胞迁移能力的影响。方法:构建表达GFP和GFP-C-Daam1的慢病毒载体,通过慢病毒感染获取稳定表达目的基因的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系。用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞系,Western blot确定重组蛋白表达,并用Boyden chamber小室实验检测细胞运动能力的改变。结果:通过慢病毒感染,建立了稳定表达GFP-C-Daam1的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,该细胞系具备更强的内在运动能力,表明目的基因的表达产物功能正常。结论:用慢病毒载体可以构建稳定表达GFP-C-Daam1的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,从而得到研究活化的Daam1的可靠细胞膜型。
- 李卫星杜军胡圳圳田寅辉刘皎婧朱一超
- 关键词：MDA-MB-231细胞基因转染细胞迁移
- GST pulldown技术检测HEK293T细胞Daam1的活性被引量：1
- 2011年
- 目的:运用GST pulldown技术建立真核细胞中Daam1活性检测的可靠方法。方法:构建GST-RhoA的原核表达载体,并使其在大肠杆菌BL21菌株中大量表达。用GST pulldown和Western blot技术分别检测HEK293T细胞中活化的Daam1及Daam1蛋白的表达。结果:在成功构建了GST-RhoA的原核表达载体,并使其在原核细胞中大量表达融合蛋白GST-RhoA后,用GST pulldown和Western blot技术证实HEK293T细胞中有活化的Daam1和Daam1总蛋白的表达。结论:本工作所建立的GST pulldown技术可以检测HEK293T细胞中Daam1的活性,从而为进一步深入研究Daam1在真核细胞中的功能提供了技术保障。
- 李卫星杜军朱一超
- 关键词：GST真核细胞
