山东省自主创新成果转化重大专项项目(2008ZHZX1A1101)
- 作品数：10 被引量：46H指数：3
- 相关作者：肖一红周恩民曾勇庆田夫林姜世金更多>>
- 相关机构：山东农业大学西北农林科技大学山东省动物疫病预防与控制中心更多>>
- 发文基金：山东省自主创新成果转化重大专项项目国家自然科学基金山东省教育厅科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PRRSV GP5蛋白抗独特型单链抗体的构建表达及鉴定被引量：1
- 2011年
- 为制备只包含抗体可变区片段(Fv)的MAb2-5G2单链抗体(scFv),本研究从分泌MAb2-5G2的杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录制备cDNA作为模板扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因。以VH-linker-VL的形式通过重叠PCR制备scFv基因,构建重组表达质粒pEasy-scFv,并在大肠杆菌中获得正确表达。通过western blot和间接免疫荧光鉴定表明scFv蛋白能够被兔抗MAb2-5G2的抗体(Ab3)识别,复性后的scFv蛋白能够特异性结合Marc-145细胞。该研究结果为进一步明确MAb2-5G2结合Marc-145细胞功能区域奠定了物质基础。
- 于颖王刚宋腾飞孔宁马晓春姚永红肖一红周恩民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征抗独特型抗体单链抗体
- 蓝耳病抗独特型单链抗体的构建及表达
- ＜正＞PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒,冠状病毒科动脉炎病毒属,含有6个结构蛋白。其中表面蛋白（GP5）和基质蛋白（Matrix）可能是诱导中和抗体的主要病毒抗原。本课题组的前期研究发现感染了PRRSV的猪血清中有...
- 于颖王刚王伟伟周恩民
- 文献传递
- 促甲状腺素释放激素对母猪泌乳等繁殖性能及仔猪生长性能影响的研究被引量：3
- 2009年
- 为了研究促甲状腺素释放激素(TRH)对母猪泌乳等繁殖性能及仔猪生长性能的影响,选用经产大白分娩母猪40头,随机分为试验组和对照组各20头,试验组分娩哺乳母猪产后1d、5d,每头各注射2mLTRH注射液。研究结果表明:①产后注射TRH的试验组分娩哺乳母猪比对照组母猪的泌乳力平均提高了3.01%(P<0.05),试验组哺乳仔猪的断乳个体重和断乳窝重分别比对照组提高了2.42%和3.01%(P<0.05)。②试验组母猪在哺乳期的采食量比对照组母猪提高了2.30%(P<0.05),产后注射TRH对母猪断乳体况以及母猪断乳后再繁殖性能等具有一定的改善作用,断乳后10d、20d内母猪的发情率均提高5个百分点。③试验组仔猪在哺乳期间的平均窝增重和日增重比对照组分别提高5.95%和6.49%(P<0.05),而两组的仔猪采食量无显著差异(P>0.05),说明增重速度的提高是由母猪泌乳性能的改善所致。④产后注射TRH使分娩哺乳母猪三联症的发病率降低5个百分点,并对降低仔猪腹泻(腹泻指数降低7.06%,P<0.05)、改善其健康状况具有明显的效果。
- 杨伦杨献鹏曾勇庆张伟韩苏任相全孟宪健张琦
- 关键词：促甲状腺素释放激素泌乳力繁殖性能
- 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链B羧基端多肽单克隆抗体的制备及鉴定
- 2011年
- 为了得到能够特异性识别非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链B(NMHCⅡ-B)的单克隆抗体,根据Marc-145细胞上NMHCⅡ-B羧基端的蛋白质序列,合成多肽,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法筛选阳性克隆;制备腹水并纯化;用间接ELISA和间接免疫荧光试验检测纯化抗体的特异性。结果显示,获得2株能稳定传代并分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系;单克隆抗体的特异性鉴定显示,2株细胞系所产生的抗体能够特异性地与NMHCⅡ-B羧基端蛋白反应而且能与Marc-145细胞产生特异性的结合。这2株单抗的制备及鉴定为研究易感细胞上NMHCⅡ-B与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的关系奠定了基础。
- 张璐刘宁宁吴海珍高继明肖一红周恩民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体
- PRRSV持续性感染猪群抗体动态观察及对猪瘟疫苗免疫的影响被引量：11
- 2011年
- 为了解在PRRSV持续性感染猪群中的抗体动态,对蓝耳病阳性猪场育肥猪、经产母猪、后备母猪及仔猪每周采血1次,分离血清,用RT-PCR方法检测PRRSV,ELISA试剂盒检测抗PRRSV抗体并检测猪瘟疫苗免疫后的抗体水平。结果表明,在猪群康复后PRRS抗体水平呈下降趋势,并逐渐趋向于稳定,当整个猪群再次表现临床症状时,抗体逐渐上升至一定水平,但抗原检出率较低;猪瘟疫苗免疫后抗体水平上升依然很快,免疫效果较好。
- 王美君陈静孙圣福马慧玲田夫林姜世金
- 关键词：PRRSVCSFV
- PRRSV Nsp2高变区基因的表达及免疫学特性鉴定被引量：3
- 2011年
- 本研究分别扩增从"高热病"猪体内分离株(TA-12)及美洲经典株ATTC-VR2332 PRRSV Nsp2基因的高变区,亚克隆至表达载体pET-28a中,转化至E.coliBL21中,在IPTG的诱导下进行表达。用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行鉴定。表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠,对其免疫原性进行研究。建立了以纯化的重组蛋白作为包被抗原的间接ELISA,确定了临界值,用建立的ELISA方法并对400份猪血清进行了检测和应用。结果表明,成功的表达了分离株TA-12及ATTC-VR2332 Nsp2基因的高变区。表达蛋白纯化分别免疫小鼠后,获得多克隆抗体,其抗体效价均为1∶100000。优化的ELISA条件为:包被缓冲液为磷酸盐缓冲液,800 ng/孔,血清样品稀释浓度为1∶100。临界值为0.4。血清检测结果表明以两种蛋白为包被抗原均为阳性的血清最多,占到总数的58.5%,前者阳性后者阴性的血清阳性率28%,前者阴性后者阳性的血清阳性率8.75%,二者均为阴性的占到4.75%。为建立区别两种毒株的鉴别诊断间接ELISA试剂盒奠定基础。
- 马利宏肖一红吕军华王伟伟董施伟周恩民
- 关键词：PRRSVNSP2免疫学ELISA
- 饲粮添加大蒜对肥育猪肌肉抗氧化性能及肉质特性的影响被引量：15
- 2010年
- 为了研究饲粮中添加新鲜大蒜对生长肥育猪肌肉抗氧化性能及肉质特性的影响,选用长大二元去势小公猪24头,随机分为2组,每组12头,大蒜组饲粮是在基础饲粮中额外添加5%鲜大蒜,两组猪由25kg饲喂至100kg体重结束,每组随机屠宰6头。研究结果表明:①猪宰后肌肉随贮存时间的延长(1～5d),肌肉超氧化物歧化酶(SOD)活性逐渐下降,丙二醛(MDA)含量逐渐上升,各保存期肌肉SOD活性始终是大蒜组高于对照组,MDA含量则是大蒜组低于对照组,大蒜组平均SOD活性比对照组高8.99%(P<0.05),平均MDA含量比对照组低30.51%(P<0.01);大蒜组与对照组肌肉过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性的变化差异不显著。②在肉质特性方面,与对照组相比,大蒜组肌肉肉色、大理石纹、系水率、拿破率、干物质、肌内脂肪和粗蛋白质含量高于对照组,而肌肉的滴水损失、烹饪损失、剪切值则显著低于对照组。结果说明,饲粮中添加大蒜,能够明显提高猪宰后肌肉的抗氧化性能,降低肌肉中过氧化产物的形成,并能明显改善肉的颜色和嫩度,提高肌肉的保水性能以及干物质、肌内脂肪和粗蛋白质含量,从而改善肉品的食用营养品质特性。
- 陈伟李华曾勇庆武英杨其德柴庆华夏光顺黄学亮
- 关键词：大蒜抗氧化性能肉质特性
- 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用被引量：3
- 2011年
- 为研究非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHCⅡ-A)羧基端在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞中的作用,本实验通过提取Marc-145细胞总RNA,RT-PCR方法扩增NMHCⅡ-A羧基端930 bp基因PRA,并进行核苷酸序列测定。将该基因连接到pEGFP-N1载体中,采用双酶切和PCR方法对重组质粒pEGFP-N1-PRA进行鉴定。将pEGFP-N1-PRA转染至Marc-145细胞后感染PRRSV,测定TCID50值及间接免疫荧光(IFA)检测PRA对PRRSV感染Marc-145细胞的影响。TCID50及IFA结果显示,与未转染的Marc-145细胞相比,转染pEGFP-N1-PRA的Marc-145细胞的PRRSV感染能力降低50%。本研究初步证明了PRA编码蛋白在PRRSV感染细胞中的作用,为PRRSV感染机制的研究提供了一定的依据。
- 刘宁宁张璐吕军华高继明吴海珍肖一红周恩民
- 关键词：克隆测序
- H1亚型猪流感病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及其应用被引量：3
- 2011年
- 为建立H1亚型猪流感病毒抗体检测方法,扩增了H1N1亚型猪流感病毒流行株的血凝素基因HA1部分,构建原核表达载体pET30a-HA1,并转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白。对重组蛋白包涵体进行变性、复性和Ni-NTA亲和层析纯化。以纯化后的蛋白作包被抗原,建立间接ELISA检测方法。利用该检测方法检测了2008？2009年采集的猪血清785份,阳性率为15.54%,不同省份的阳性率存在差异（8%~47%）。以IDEXX相关试剂盒检测结果作为参照,该方法的诊断特异性达到91%,诊断敏感性达到95%。
- 高蕾刘思当肖一红刘为民刘文军孙蕾
- 关键词：血凝素间接ELISA
- PRRSV新型细胞受体R-5功能表位的初步鉴定
- 猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由PRRS病毒（PRRSV）引起的,以高死亡率为特征、严重危害世界养猪业的病毒病。自发生以来,给...
- 刘宁宁刘岳王伟伟周恩民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒受体多肽
- 文献传递
