四川省科技厅科技支撑计划项目(2010SZ0280)
- 作品数：4 被引量：17H指数：3
- 相关作者：屈艺母得志李德渊李晋辉张莉更多>>
- 相关机构：四川大学教育部更多>>
- 发文基金：四川省科技厅科技支撑计划项目国家自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 原代神经元转染方法被引量：3
- 2013年
- 体外培养的原代神经元形态和功能与在体神经元相似,在神经系统疾病研究中能提供准确的生物学信息,是研究神经系统疾病的重要工具。转染技术的发展,为研究原代培养神经元基因和蛋白质功能提供了技术支持。本文总结了近年来原代神经元转染方法的研究进展,比较了不同转染方法如磷酸钙沉淀法、脂质体介导转染、电穿孔法、病毒介导转染等的优缺点,为选择最佳的神经元基因转染技术提供有价值的参考。
- 刘俊燕赵凤艳屈艺母得志
- 关键词：脂质体法电穿孔法病毒转染
- 整合素β8在星形胶质细胞氧糖剥夺后对TGF-β1的活化影响被引量：5
- 2014年
- 目的探讨在氧糖剥夺(OGD)后,星形胶质细胞中整合素β8(β8)的表达对转化生长因子-β1(TGF-β1)活化的影响。方法体外培养星形胶质细胞,OGD模拟缺氧缺血。免疫细胞化学法检测β8蛋白在星形胶质细胞中的表达及分布,Western blot定量检测OGD处理后复氧12 h、1 d及2 d时β8蛋白表达的变化。建立星形胶质细胞与荧光素酶报道细胞(TMLC)共培养体系,利用RNA干扰技术抑制星形胶质细胞β8表达,观察β8对TGF-β1活化的影响。结果β8主要分布于星形胶质细胞的胞浆和树突;星形胶质细胞中β8蛋白表达在复氧后12 h即有增加,1 d时达高峰;星形胶质细胞与TMLC共培养体系在复氧后各时间点TGF-β1活性增高趋势与星形胶质细胞β8表达趋势相似,抑制β8表达后,TGF-β1活性在各时间点均显著降低。结论新生鼠在缺血缺氧时,星形胶质细胞高表达的β8对中枢神经系统中TGF-β1的活化起重要调控作用。
- 李晋辉李德渊陈大鹏母得志屈艺
- 关键词：星形胶质细胞整合素转化生长因子新生大鼠
- 磷酸酶PTEN在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡中的作用被引量：4
- 2014年
- 目的观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)时,大脑皮层第10号染色体上磷酸酶及张力蛋白同源缺失的基因(PTEN)蛋白、磷酸化(p)-PTEN蛋白、促凋亡蛋白Bim mRNA及蛋白表达变化,探讨抑制PTEN活性对新生大鼠缺氧缺血(HI)神经元凋亡的保护作用机制。方法将128只10日龄SD大鼠随机分为4组:缺氧缺血组、假手术组、PTEN脂质磷酸酶抑制剂双过氧化钒(bisperoxovanadium,bpv)干预组和生理盐水溶剂组。缺氧缺血组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎,氮氧混合气(92%N2、8%O2)中缺氧2.5h;假手术组不结扎颈总动脉,不作缺氧处理。bpv干预组和溶剂对照组予腹腔内注射bpv和生理盐水,30min后做缺氧缺血处理。各组分别于建模后0.5h及24h处死动物取大脑皮层,应用Western blot检测PTEN、p-PTEN及Bim的蛋白含量。实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)定量检测Bim mRNA表达水平,应用TUNEL染色法检测凋亡细胞。结果缺氧缺血组于HI后0.5h及24h,PTEN蛋白无明显变化,p-PTEN蛋白表达降低。HI后0.5h,Bim mRNA及蛋白表达增加,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05),HI后24h,Bim mRNA及蛋白恢复至基线水平。bpv干预组PTEN蛋白无明显变化,p-PTEN蛋白表达增加,Bim mRNA及蛋白表达降低,与生理盐水组和缺氧缺血组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。bpv干预组于HI后24h,TUNEL染色阳性细胞数较生理盐水组和缺氧缺血组减少,凋亡指数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时,PTEN发生去磷酸化,活性增高,抑制PTEN活性可下调前凋亡蛋白Bim mRNA及蛋白表达,减少神经细胞凋亡。
- 李德渊屈艺李晋辉张莉熊涛母得志
- 关键词：PTEN凋亡神经元新生大鼠
- 核转录因子FOXO3a在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡中的作用被引量：5
- 2013年
- 目的探讨核转录因子FOXO3a在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经元凋亡中的作用及机制。方法 160只10日龄SD大鼠随机分为缺氧缺血(HI)组和假手术组,HI组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎后缺氧2.5 h;假手术组不结扎颈总动脉,不作缺氧处理。两组在HI后0.5 h、2 h、4 h、8 h和24 h各处死16只大鼠取大脑皮层。应用Western blot定量检测FOXO3a总蛋白、胞核FOXO3a蛋白、胞浆FOXO3a蛋白及Bim蛋白表达。应用TUNEL染色法检测凋亡细胞。结果与假手术组比较,HI组胞核FOXO3a蛋白于HI后0.5 h表达开始增高,随HI时间延长表达逐渐增高,24 h达高峰(P<0.01);胞浆FOXO3a蛋白水平在HI后各时间点均低于假手术组(P<0.01);Bim蛋白在HI后0.5 h表达升高,2 h达高峰,4 h开始降低,至8 h开始恢复至基线水平。TUNEL染色结果显示HI后4 h,凋亡细胞开始增多,24 h达高峰,各时间点凋亡指数均高于假手术组(均P<0.01)。结论新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时FOXO3a自胞浆转位入胞核,诱导靶基因前凋亡蛋白Bim表达,Bim表达上调可能与神经元凋亡有关。
- 李德渊屈艺李晋辉张莉熊涛母得志
- 关键词：FOXO3A凋亡神经元新生大鼠
