上海市科学技术发展基金(04JC14033)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：杜冰周忠良钱旻汪磊吴淼更多>>
- 相关机构：华东师范大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金上海市教育发展基金会“曙光计划”项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 肝癌特异性黏附肽的鉴定和分析被引量：2
- 2006年
- 利用体内噬菌体随机肽库技术筛选出肝癌特异性噬菌体肽A54,随后用化学合成法在体外合成该多肽,并标记荧光素和生物素,在组织和细胞水平对该肽进行了体内外肝癌特异性的鉴定及其抗原定位。将生物素(Biotin)标记的A54肽通过尾缘静脉注射入荷瘤裸鼠体内,通过免疫组化方法,检测A54肽与肝癌组织特异性结合的情况;并用免疫荧光细胞化学技术,对荧光素(FAM)标记A54肽进行了细胞水平的肝肿瘤特异性鉴定及抗原定位。体内外检测结果表明,A54肽仍保留了特异性识别肝癌组织的特性,且结合于肝癌细胞的膜表面。实验证明,化学合成的多肽,在体内仍然具有靶向肝癌细胞膜表面的作用,这进一步证明了筛选出来的目标噬菌体克隆其特异性靶向作用确实是由其表面插入的小分子多肽所介导的,为肝癌特异性导向药物载体的研究提供了科学依据。
- 吴淼杜冰汪磊周忠良钱旻于静
- 关键词：免疫组化抗原定位
- 人肝癌细胞移植瘤cDNA表达文库的构建及鉴定被引量：1
- 2007年
- 汪磊杜冰吴淼周忠良钱旻
- 关键词：CDNA表达文库细胞移植血清蛋白甲胎蛋白
- 新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL的构建表达与活性鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL的原核表达载体,诱导表达后检测其生物活性。方法:PCR扩增绿脓杆菌外毒素APE40KDEL基因插入到pET32a(+),然后与合成的含有肠激酶酶切位点和肝癌特异性结合肽A54的核酸序列连接,构建重组表达载体pET32a(+)-A54-PE40KDEL,其经鉴定后转化E.coliBL21表达。超声破菌,上清液经Ni+亲和层析纯化,肠激酶酶切,再次Ni+离子亲和层析后得到免疫毒素A54-PE40KDEL。MTT和间接免疫荧光技术检测其对不同细胞株的细胞毒性及靶向性。结果:重组质粒序列正确,经Westernblot证实表达产物含Mr约58000的目的蛋白。A54-PE40KDEL能够与肝癌细胞特异性结合,且对肝癌细胞的毒性作用与对照相比有极显著性差异(P<0.01)。结论:成功构建了A54-PE40KDEL原核表达载体;获得的新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL在体外与肝癌细胞具有一定结合特异性及杀伤活性,为肝癌导向治疗提供了一条可行的途径。
- 虞丽平韩红辉石凌超杜冰张小平周忠良钱旻
- 关键词：免疫毒素肝癌绿脓杆菌外毒素A特异性结合肽
