国家自然科学基金(30471804)
- 作品数：11 被引量：16H指数：2
- 相关作者：王博蔚李荷莲韩丽英刘志辉叶明珠更多>>
- 相关机构：吉林大学第二医院吉林大学口腔医院厦门大学更多>>
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- 多药耐药基因转染对人胎盘源性间充质干细胞生物学特性影响研究被引量：1
- 2009年
- 目的将多药耐药基因（mdr1）通过逆转录病毒载体导入人胎盘源性间充质干细胞（P.MSCs），评价耐药基因导人对P．MSCs干细胞特性的影响。方法采用胰酶消化法自人足月胎盘组织中分离培养间充质干细胞（MSCs），将含有mdr1基因和绿色荧光蛋白（GFP）报告基因的重组逆转录病毒载体转染P—MSCs；应用流式细胞术检测转染后P—MSCs表型特征，四唑盐比色法和碘化丙啶标记测定其增殖活性和细胞周期，透射电镜下观察转染P—MSCs超微结构变化，条件培养液诱导法分析转染后P．MSCs向脂肪细胞、成骨细胞定向分化能力。结果转染P—MSCs表达干细胞表面标志，如CD29，CD44和CD73，细胞倍增时间为23．9h，生长周期仍符合于细胞增殖的特点，超微结构观察转染P．MSCs表面微绒毛增加，细胞内线粒体丰富，粗面内质网轻度扩张，且在特异诱导条件下具有向成脂、成骨定向分化潜能。结论mdr1基因体外转染人P—MSCs对其干细胞特性无显著影响，这可为P—MSCs在大剂量肿瘤化疗中的应用提供实验参考。
- 韩丽英叶明珠李荷莲王博蔚王强
- 关键词：转染胎盘干细胞
- 多药耐药基因MDR1转染胎盘源间充质干细胞的研究被引量：1
- 2008年
- 目的将全长外源多药耐药基因转入间充质干细胞使其外源基因得以表达。方法从胎盘组织中分离培养间充质干细胞,构建携带全长外源多药耐药基因的逆转录病毒,将此逆转录病毒转染间充质干细胞,绿色荧光显微镜检测外源基因的表达,western blot检测MDR1基因表达产物。结果绿色荧光显微镜可观测到转染后间充质干细胞有绿色荧光蛋白的表达,western blot检测到全长多药耐药基因编码的p-糖蛋白的表达。结论mdr1逆转录病毒载体可有效转染人胎盘源MSC,转染的外源基因可充分表达。
- 王博蔚刘志辉郑万平孙连英
- 关键词：间充质干细胞多药耐药基因转染
- 人早期胚胎源性间充质干细胞的体外分离培养及其生物学特性被引量：2
- 2007年
- 目的：建立人早期胚胎源性间充质干细胞（MSCs）的体外分离培养方法,并对其生物学特性加以鉴定。方法：将胚龄5-6周的胚胎组织经0.25%胰蛋白酶消化7-10min后获得分离细胞悬液,MSCs培养基纯化贴壁细胞,流式细胞术检测细胞表型特征,MTT法和碘化丙啶（PI）标记测定细胞增殖活性和细胞周期,条件培养液诱导法鉴定其多向分化潜能。结果：采用组织消化法从人早期胚胎组织中分离获得MSCs,表面标志CD29、CD44、CD73、CD105、CD166呈阳性表达,CD34、CD45和HLA-DR为阴性表达;细胞倍增时间为23h;细胞在成脂诱导条件下可见脂滴形成,成骨诱导2周后细胞碱性磷酸酶染色显示类骨结节区呈棕黑色（活性明显增强）,茜素红染色可见钙盐沉积。结论：人早期胚胎源性MSCs与成体MSCs表型一致,具有成脂和成骨分化潜能。
- 叶明珠刘爱民韩丽英李荷莲董玉洁
- 关键词：胚胎间充质干细胞诱导分化脂细胞
- 人胎盘源间充质干细胞多向分化潜能的实验研究被引量：6
- 2009年
- 目的探讨从废弃胎盘中获取的HPMSCS是否具有多向分化潜能。方法从废弃的胎盘组织中分离培养胎盘源间充质干细胞,并对其生物学性状进行鉴定。对鉴定后的胎盘源间充质干细胞在体外通过特定诱导环境下使之向成脂肪细胞、成骨细胞分化,检测其多向分化潜能。结果HPMSCS在培养基中持续培养后,在特定诱导环境下,成功使其向成脂肪细胞转化,培养2周时,可见融合成团的脂滴充满整个细胞;成功使其向成骨细胞转化,培养4周以上可见明显钙化结节,vonKossa染色可将骨结节中沉积的钙染成黑色,碱性磷酸酶染色呈强阳性反应达到95%以上。结论通过密度梯度离心法从废弃胎盘中获取的间充质干细胞具有多向分化潜能。
- 刘春丽刘志辉王博蔚朱镇周延民
- 关键词：多向分化
- 胎盘源性间充质干细胞多药耐药基因的转染与鉴定
- 2012年
- 目的探讨重组逆转录病毒载体介导mdrl基因转染胎盘源性间充质干细胞（P-MSC）以应用于基因治疗的可行性、安全性。方法Percoll密度梯度离心法自人胎盘组织中分离培养间充质干细胞（MSC），利用重复感染方法将含有mdrl基因的逆转录病毒载体导人P-MSC，经逆转录多聚酶链式反应（RT．PCR）检测mdrlmRNA表达，荧光细胞分选法（FACS）检测目的基因表达，同时对mdrl—MSC的干细胞特性进行鉴定及分析。结果转染细胞中显示mdrlmRNA表达；转染P-MSC表达P．gp的阳性细胞百分率为（27．6±5．1）％，明显高于非转染组的（0．4-t-O．1）％，两组比较差异有统计学意义（t=14．291，P〈0．01）；转染MSC在G0／G1期所占比例为95．40％，符合干细胞增殖特点。超微结构揭示其具有典型的低分化干细胞超微结构特点，且在特异诱导条件下具有向成脂、成骨定向分化潜能。结论由重组逆转录病毒介导mdrl基因体外转染胎盘源性MSC可获得高效的P—gP表达，且转染细胞可依然保持其干细胞特性。
- 韩丽英李亚萍叶明珠王博蔚王强赵淑华李荷莲
- 关键词：干细胞胎盘转染基因
- 胎盘源间充质干细胞的分子生物学特性被引量：3
- 2013年
- 胎盘来源的间充质干细胞（placenta derived mesenchymal stem cell,PMSC）是近几年来受到学者普遍关注的一种新的成体干细胞。胎盘,这一在胎儿娩出后被＂废弃＂的人体器官,不仅来源丰富、取材方便、产妇知情同意后无伦理限制,而且具有造血支持及免疫抑制等诸多优点,
- 王敬龙金巨楼杜冰毛智王树平刘志辉
- 关键词：胎盘源间充质干细胞分子生物学特性成体干细胞CELL人体器官免疫抑制
- 多药耐药基因导入人胎盘源性间充质干细胞对其化疗耐药性影响的体外研究
- 2007年
- 目的将含有多药耐药基因(mdr1)的逆转录病毒载体转染人胎盘源性间充质干细胞(MSC),评价mdr1基因在MSC中的表达及耐药基因导入对MSC耐受化疗药物作用的影响。方法2005年3月至2006年5月采用percoll密度梯度离心法自吉林大学二院妇产科健康分娩供者胎盘组织中分离MSC;脂质体转染法将含mdr1基因的重组质粒导入293T包装细胞,获得的病毒上清感染MSC,RT-PCR法、流式细胞术和免疫荧光染色检测mdr1基因在MSC中的表达;罗丹明(Rh123)排泌试验检测外源基因编码产物P-糖蛋白(P-g170)功能;MTT法测定转染前后MSC对化疗药物耐受性的改变。结果mdr1基因导入MSC后稳定转染效率达80.3%,RT-PCR证实mdr1基因可于转染MSC中有效表达,转染后MSC表达P-g170的阳性细胞百分率为31.6%,对照组为0.2%;Rh123排泌试验证实P-g170具有功能活性。基因转染后MSC对多种化疗药物的耐药性明显强于未转染MSC。结论mdr1基因体外转染人胎盘源性MSC可获得高效、稳定的功能性蛋白表达,且可明显提高MSC对多种化疗药物的耐受性。
- 叶明珠韩丽英李荷莲张海英
- 关键词：多药耐药转染胎盘干细胞
- 胎儿肝脏与骨髓间充质干细胞的分离鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:建立胎儿肝脏与骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离培养方法,并对两种来源细胞的生物学特性加以鉴定。方法:取胎龄4或5月水囊引产胎儿肝脏和骨髓,用1．073 g·mL-1的percoll密度梯度离心分离低密度细胞,MSCs培养基纯化贴壁细胞,用流式细胞术检测其表面标志,成脂肪及成骨诱导鉴定多向分化潜能, 对比两种来源的MSCs增殖及生长特征。结果:胎儿肝脏及胎儿骨髓MSCs CD29、CD44、CD73(SH-3,4)、 CD105(SH-2)、CD166、HLA-ABC阳性,CD35、CD45、HLA-DR阴性,均能成脂肪及成骨诱导分化,随 MSCs数量增加,其对外周血T淋巴细胞转化的抑制作用增强。结论:胎儿肝脏和骨髓中可成功分离MSCs。
- 王博蔚刘志辉刘爱民韩丽英李荷莲
- 关键词：间充质干细胞胎儿肝脏骨髓细胞分离
- Retroviral-mediated transfer and functional expression of multidrug resistance gene in human placenta mesenchymal stem cells被引量：2
- 2008年
- 背景大多数妇科的恶意对化疗敏感。Myelosuppression 是许多化学疗法的药的主要剂量相关的毒性。人的 multidrug 抵抗(mdrl ) 基因为它授与药抵抗的能力是众所周知的。这研究试图探索表示的可行性和 mdrl 基因 transduction 的抵抗进人的胎盘由 retrovirus vector.Methods 人 P-MSCs 的间充质的干细胞(P-MSCs ) 从消化胰岛素的学期胎盘被孤立，并且他们的 immunophenotypes 和区别潜力被评估。人的 P-MSCs 是由包含 mdrl 基因和绿色的重建的 retroviral 向量的 transduced 荧光灯蛋白质(GFP ) 记者基因。mdrl 基因的集成和表示被 GFP 的表示间接地观察，并且激活荧光的房间 sorter 被用来评估 mdrl 基因编码的渗透 glycoprotein (P-gp ) 的功能的活动。刺激测试在 vitro 被做显示出孤立的、有教养、膨胀的 P-MSCs 表示了的 transfected cells.Results 的多种的药抵抗干细胞标记象 CD29， CD44 和 CD73 那样，和在适当条件下面的显示出的 osteogenic 和 adipogenic 区别潜力。在 non-transfected P-MSCs 房间的 P-gp 的表示是(0.4 ???
- HAN Li-yingYE Ming-zhuLI Ya-pingWANG Bo-weiWANG QiangZHAO Shu-huaLI He-lian
- 关键词：药物抗性胎盘抗性基因
- 多药耐药基因转染人骨髓间充质干细胞及对其化疗保护作用的实验研究
- 2007年
- 目的探讨逆转录病毒介导多药耐药基因(mdr1)体外转染人骨髓间充质干细胞(MSCs)能否提高其对化疗药物的耐受性。方法采用percoll密度梯度离心法自骨髓中分离MSC并进行纯化和扩增;脂质体转染法将携带有mdr1基因的逆转录病毒载体导入293T包装细胞,获得的病毒上清感染MSC,流式细胞术测定mdr1基因编码产物P-糖蛋白(P-g170)的表达水平;罗丹明(Rh123)排泌试验检测P-g170的功能活性;MTT法测定转染MSC对化疗药物耐受性。结果mdr1基因导入骨髓MSC后稳定表达P-g170的阳性细胞百分率为33.9%,对照组为0.7%;Rh123排泌试验证实P-g170具有功能活性;转染MSC对多种化疗药物的耐受性明显强于未转染MSC。结论mdr1基因体外转染人骨髓MSC可明显提高MSC对多种化疗药物的耐受性,为有效提高大剂量化疗在肿瘤治疗中的应用提供了有力依据。
- 叶明珠韩丽英岳鑫李荷莲
- 关键词：多药耐药基因转染骨髓干细胞
