国家自然科学基金(30371385)
- 作品数：12 被引量：47H指数：3
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- 小鼠骨髓CD90+、CD34+、CD117+和Sca-1+细胞的肝干细胞潜能比较被引量：3
- 2006年
- 目的比较的小鼠CD90+Lin-、C34+Lin-、CD117+Lin-和Sca-1+Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能。方法供体为纯系BALB/C雄性小鼠,应用免疫磁珠分选法获取CD90+Lin-、CD34+Lin-、CD117+Lin-和Sca-1+Lin-骨髓细胞。受体为35Gy全肝照射处理后的同龄同系BALB/C雌性小鼠,A、B、C、D组小鼠分别接受CD90+Lin-、CD34+Lin-、CD117+Lin-、Sca-1+Lin-骨髓细胞移植。移植后30天活杀小鼠,取肝进行Y染色体原位分子杂交与白蛋白免疫组织化学联合检测。结果各组小鼠肝组织中都可以检测到Y染色体和白蛋白均呈阳性的双阳性细胞,C组的双阳性细胞数量显著多于其它各组。结论CD90+Lin-、CD34+Lin-、CD117+Lin-、Sca-1+Lin-骨髓细胞都具有肝干细胞潜能,其中CD117+Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能最大、形成肝细胞的能力量强。
- 廖彩仙唐浩周杰苏俊张春兴张守华
- 关键词：小鼠骨髓细胞骨髓源性肝干细胞
- 构建适合骨髓衍生肝干细胞移植的小鼠酒精性肝纤维化模型被引量：2
- 2007年
- 目的:建立适合骨髓衍生肝干细胞移植的小鼠酒精性肝纤维化模型,为移植骨髓衍生肝干细胞对酒精性肝损伤修复的研究提供进一步探讨的价值。方法:实验于2006-02/06在南方医科大学实验动物中心完成。取Balb/c雌性小鼠100只,SPF级,5～6周龄,体质量15～18g,随机区组法分为造模组92只,对照组8只。用白酒灌胃法建立小鼠酒精性肝纤维化模型。造模组于灌胃的第4,8,12,16周末分别随机选取6只小鼠,眼球采血后,颈椎脱臼处死,取出肝脏,以100g/L的甲醛固定,石蜡包埋切片,苏木精-伊红染色和苦味酸-酸性复红染色,光镜观察病理变化。血标本用于测定生化及肝纤维化指标。对照组以等量的蒸馏水灌胃,于实验的第16周末处死,处理同造模组。组间比较采用单因素方差分析。结果:纳入Balb/c雌性小鼠100只,实验中造模组共23只小鼠死亡,多为急性和亚急性死亡。对照组全部成活。①灌胃初期,造模组小鼠出现精神萎靡等现象,实验开始4周后上述症状减轻,对照组小鼠则食欲正常,无嗜睡现象。②在实验刚开始1周时小鼠体质量(15.67±0.98)g,与实验开始时(16.38±0.58)g相比呈明显负增长(P<0.05)。第4,8,12,16周称质量时,造模组小鼠体质量[(16.17±0.91),(17.23±1.39),(18.27±0.85),(19.31±0.95)g]均明显低于对照组[(18.31±0.57),(19.52±0.85),(20.56±0.86),(21.41±0.95)g],(P<0.05)。③对照组小鼠肝脏表面光滑细润、色红等。造模组小鼠肝脏色泽较正常肝脏暗淡,表面充血,肝脏呈增大趋势。造模组小鼠的肝重比(肝脏湿重/小鼠体质量×100%)均大于对照组。④造模组4周时可见轻度酒精性脂肪肝病理改变,12周时酒精性肝炎改变加重并出现了纤维组织增生,16周时肝纤维化已明显形成。⑤不同时间点与对照组相比,血清中天冬氨酸氨基转氨酶、丙氨酸氨基转氨酶、天冬氨酸氨基转氨酶/丙氨酸氨基转氨酶、三酰甘油均呈升高的
- 苏俊廖彩仙周杰唐浩张守华张春兴
- 关键词：肝纤维化病理学
- 骨髓衍生肝干细胞的可塑性及应用前景被引量：1
- 2007年
- 目的:骨髓干细胞具有向其他细胞或组织分化的的能力,这种可塑现象同样存在于肝脏组织中。文章综述骨髓衍生肝干细胞的来源和发生,并探讨其可塑性在肝病领域的研究进展和临床应用前景。资料来源:应用计算机检索PUBMED1990-01/2006-06期间的相关文章,检索词为"stem cell,hepatic",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库CNKI1990-01/2006-06期间的相关文章,检索词为"肝,干细胞",并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与肝干细胞相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到231篇相关文献,31篇文献符合纳入标准,排除的200篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的31篇文献中,分别涉及骨髓衍生肝干细胞横向分化的可塑性依据、分离和鉴定、向肝迁移分化的机制与调控因素、在肝病领域的应用前景。资料综合:近几年研究证实,在骨髓细胞中确实存在肝前体细胞,它们不仅可以在肝内定居,而且可以分化形成肝细胞和胆管细胞,这种细胞通常在文献中称为骨髓衍生肝干细胞。CD34(+),C1qR(+),CD133(+),C-kit(+),Thy1(+),Sca-1(+)等骨髓造血干细胞群中都含有骨髓衍生肝干细胞亚群,但对该细胞群中特有的表面分子组合及体外扩增等特性还未见报道。近来在放射性小鼠肝损伤修复领域发现,c-kit+Lin-(CD117)细胞即为骨髓衍生肝干细胞。找出了骨髓衍生肝干细胞群中特有的表面分子组合,这样就可以直接从骨髓细胞中分离纯化骨髓衍生肝干细胞,然后移植入肝病患者体内,不仅能够恢复因病变而减少的肝细胞数量,也可以修复因病变的肝组织结构,达到与肝移植相同的目的且不存在排斥反应。结论:目前对于晚期肝病如肝硬化等的最佳治疗方法是肝脏移植,但由于供体的缺少�
- 张守华廖彩仙
- 关键词：肝细胞干细胞骨髓肝病
- 骨髓衍生肝干细胞亚群Thy-1.2^+lin^-细胞的免疫磁珠分选被引量：2
- 2008年
- 张春兴廖彩仙张守华苏俊周杰
- 关键词：免疫磁珠纯化
- 免疫磁珠分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit^+lin^-被引量：4
- 2007年
- 目的:利用免疫磁性细胞分选系统分离纯化骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-。方法:实验于2006-07/08在南方医科大学实验动物中心完成。6～8周龄的SPF级纯系BALB/C雄性小鼠10只,体质量18～20g。收集小鼠股骨骨髓细胞,利用免疫磁性细胞分选系统,通过两步法分选纯化c-Kit+lin-:将获取的lin-细胞悬液8℃条件下1500r/min离心10min,弃上清,按80μL/107加入Buffer重悬细胞。按20μL/107加生物素抗体磁珠,混匀,4℃冰箱孵育15min,按1mL/107加入Buffer洗细胞1次,8℃条件下1500r/min离心10min,弃上清,按500μL/108加入Buffer重悬细胞。Buffer500μL润MS柱,悬液过柱后,Buffer500μL/次洗柱3次,柱子脱离磁场,加1mLBuffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit+lin-细胞,收集到c-kit+lin-细胞,细胞计数。取2.0×106个细胞分成10等份,流式细胞仪分析c-Kit+lin-细胞纯度,计算回收率,评估纯化效率,苔盼兰染色检测纯化前后的细胞活力。计算活细胞的百分率。细胞纯度和细胞回收率的计算:细胞纯度=分离产物中的阳性细胞数/分离细胞的总细胞数×100%,细胞回收率=分离产物中的阳性细胞数/起始标本阳性细胞总数×100%。结果:10只小鼠均进入结果分析。利用免疫磁性细胞分选系统分选出的骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-细胞纯度和回收率分别为(77.98±2.34)%,75.40%,纯化前后细胞活力不受影响。结论:免疫磁性细胞分选系统能有效分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-,纯度和回收率高,且不影响细胞活力。
- 张春兴廖彩仙张守华苏俊周杰朱槿肖菊花
- 关键词：骨髓免疫磁珠
- 白细胞介素3对c-kit^+Lin^-细胞的增殖作用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨在无血清无基质的条件下,白细胞介素3(IL-3)和因子组合的不同浓度对扩增c-kit+Lin-细胞的影响。方法采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit+Lin-细胞,在干细胞因子(SCF)、肝细胞生长因子(HGF)、FLt-3配基(FL)、促血小板生成素(TPO)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的IL-3培养7d,检测细胞总数、c-kit+Lin-细胞扩增倍数及细胞凋亡率。结果未加IL-3(A组),10ng/mlIL-3(B组),20ng/mlIL-3(C组)和40ng/mlIL-3组(D组)均可显著扩增c-kit+Lin-细胞,扩增倍数7～19倍不等。随剂量加大,虽然细胞总数上升,但是超过一定浓度后c-kit+Lin--细胞扩增反而不明显。D组细胞总数扩增245.41倍,但c-kit+Lin-细胞扩增仅为15.80倍,明显低于C组(扩增c-kit+Lin-细胞为18.75倍)(P<0.05)。但D组细胞凋亡率最低,仅为4.66%。结论IL-3能协同SCF+HGF+FL+TPO+LIF有效的扩增c-kit+Lin-细胞,其表型并不受影响;但过高剂量反而促使干细胞分化。
- 张春兴廖彩仙张守华苏俊赖勇强周杰
- 关键词：肝细胞生长因子干细胞因子
- 小鼠c-Kit^+lin-骨髓细胞移植生成肝细胞的实验研究被引量：26
- 2006年
- 目的评价小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能,为骨髓源性肝干细胞的临床运用提供可行性实验依据。方法供体为纯系BALB/C雄性小鼠,c-Kit+Lin-骨髓细胞采用免疫磁珠分选法分离细胞。受体为行35Gy全肝照射处理后的同龄同系BALB/C雌性小鼠,立即移植供体c-Kit+lin-骨髓细胞。接受c-Kit+lin-骨髓细胞移植1月后,活杀取肝做常规病理学检查、Y染色体的原位杂交检查、甲胎蛋白与白蛋白的免疫组化检测。结果移植1月后小鼠肝脏的组织结构已恢复正常,肝组织细胞中存在原位杂交和免疫组化均呈阳性反应的双阳性细胞。结论小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞具有肝干细胞潜能,移植后可以在肝内定居并分化形成肝细胞。可做为肝病细胞移植疗法的种子细胞。
- 唐浩廖彩仙周杰金浩生谭远飞苏俊张春兴张守华
- 关键词：小鼠骨髓细胞
- 肝细胞生长因子对c-kit^+Lin^-细胞的增殖作用被引量：1
- 2007年
- 目的探讨在无血清无基质的条件下,肝细胞生长因子(HGF)和因子组合对扩增c-kit+Lin-细胞的影响。方法采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit+Lin-细胞,研究在干细胞因子(SCF),FLt-3配基(FL),促血小板生成素(TPO)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的HGF培养7d,检测细胞总数,c-kit+Lin-细胞扩增倍数及细胞凋亡率。结果各因子组均可显著扩增c-kit+Lin-细胞,扩增倍数2￣8倍不等。其中,10ng/mlHGF组扩增c-kit+Lin-细胞效果最为显著,为8.00倍,细胞总数扩增45.43倍,细胞凋亡率为17.42%。但随剂量加大,虽然细胞总数上升,c-kit+Lin-细胞扩增反而下降。40ng/ml组细胞总数扩增80.50倍,c-kit+Lin-细胞扩增效果不明显,仅为2.87倍,细胞凋亡率最低,为5.91%。结论10ng/ml的HGF能协同SCF+FL+TPO+LIF扩增c-kit+Lin-细胞,使细胞凋亡率降低,其表型并不受影响,但过高剂量会诱导其分化。
- 张守华廖彩仙张春兴苏俊赖勇强周杰
- 关键词：肝细胞生长因子肝干细胞细胞扩增
- 促血小板生成素对骨髓c-Kit^+Lin^-细胞体外扩增的影响
- 2007年
- 目的探讨在无血清条件下,血小板生成素(TPO)对c-Kit+Lin-细胞增殖的影响。方法经免疫磁珠分离小鼠骨髓c-Kit+Lin-细胞,研究在干细胞因子(SCF)、FLt-3配基(FL)和白血病抑制因子(LIF)组合中添加不同浓度的TPO,7 d后检测细胞总数,c-Kit+Lin-细胞扩增倍数,并采用Annexin-V检测各组细胞凋亡率。结果各组均能显著扩增c-Kit+Lin-细胞,扩增倍数为4~7倍不等。当SCF+FL+LIF中加入50μg/L TPO时,c-Kit+Lin-细胞及细胞总数扩增为7.07倍和40.19倍,比未加时明显增多,而凋亡率无明显差异。但随剂量加大,c-Kit+Lin-细胞扩增下降,细胞凋亡率上升,200μg/L TPO组凋亡率为33.49%,c-Kit+Lin-细胞扩增倍数仅为4.11倍。结论TPO可协同SCF+FL+LIF使c-Kit+Lin-细胞增殖,但过高剂量会诱导其分化和凋亡,以50μg/L浓度扩增效果最佳。
- 张守华廖彩仙张春兴苏俊赖勇强周杰
- 关键词：血小板生成素肝干细胞扩增
- 不同细胞因子组合对c-kit^+Lin^-细胞的体外扩增研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨在无血清无基质条件下,不同细胞因子组合对c-kit+Lin-细胞增殖效应以及最佳扩增时间。方法采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit+Lin-细胞,将干细胞因子(stem cell factor,SCF),FLt-3配基(FLt-3 ligand,FL),血小板生成素(thrombopoietin,TPO),白细胞介素-3(interleukin,IL-3),肝细胞生长因子(hepatocyte graoth factor,HGF)等细胞因子进行不同组合,体外扩增干细胞14d,于不同时间检测细胞总数和c-kit+Lin-细胞数及比例,并在第10天通过细胞凋亡早期膜变化标记FIFT-Annexin-V,检测细胞凋亡率。结果各组细胞因子均能显著扩增c-kit+Lin-细胞,扩增倍数3～19倍不等。在SCF+FL+TPO中加入IL-3或HGF,其效果更明显,c-kit+Lin-细胞在第6天分别扩增4.71和5.15倍,当同时加入时,两者有协同作用。其中SCF+FL+TPO+IL-3+HGF在第10天扩增程度最为显著,并且凋亡率最低为6.59%。结论在体外短期培养过程中上SCF+FL+TPO+IL-3+HGF组合能产生大量的c-kit+Lin-细胞,并且最佳培养时期为第10天,为肝干细胞提供种子细胞。
- 张守华廖彩仙张春兴苏俊赖勇强周杰
- 关键词：无血清培养肝干细胞扩增
