国家自然科学基金(30371388)
- 作品数：6 被引量：20H指数：2
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- 源于体外培养胰岛中表达Ngn3的细胞是胰腺内分泌前体细胞的新证据被引量：13
- 2005年
- 目的 评估表达Ngn3的细胞对成体胰岛维护和更新的作用及其意义。方法 用 6～ 8周龄的C5 7BL/ 6小鼠分离胰岛。胆总管内插管成功后 ,切除胰腺组织并用浓度为 2 5mg/ml胶原蛋白酶V灌注消化。手工拣取胰岛后 ,置于 6 0mm培养皿内 ,每个培养皿内含 10～ 12个胰岛 ,用RPMI 16 4 0 (12 5mmol/LHEPES ,5 2mmol/L葡萄糖和 2 %胎牛血清 )培养液培养。用A6抗体 ,胰岛素抗体 ,胰高血糖素抗体 ,Nestin抗体 ,Ngn3抗体和 5′ 溴 2 脱氧尿嘧啶 (5 bromo 2′ deoxy uridine,BrdU)抗体进行胰岛细胞免疫荧光染色。结果 在增殖的胰岛细胞中 ,只有不到 15 %的细胞表达Ngn3,其中约有 30 %以上的细胞同时表达A6。在培养的胰岛细胞中存在表达Ngn3的细胞 ,这一结果与其他在胚胎发育和成体胰岛中的研究结果一致。本研究发现培养的胰岛细胞中存在同时表达A6和Ngn3的细胞。A6被认为是可分化为胆管上皮细胞的肝脏前体细胞的标记物。胰岛内表达A6的细胞可能来源于成体胰管 ,并迁移至胰岛内。细胞表达A6的同时表达Ngn3,表明这些细胞在胰岛内可分化为内分泌细胞。结论 培养的胰岛细胞中发现共同表达Ngn3和A6的细胞 ,表明胰岛内的 4种内分泌细胞可能来源于成体胰岛中的同一内分泌细胞系。
- 宋陆军秦新裕牛伟新沈坤堂刘凤林K.A.AndreoniD.A.GerberJ.H.FairL.RiceA.PleasantJ.Wang
- 关键词：胰岛细胞前体细胞胰腺成体干细胞内分泌细胞
- 特异性转录因子在正常小鼠和糖尿病小鼠胰岛内的表达及其意义
- 2008年
- 目的探讨正常小鼠与糖尿病小鼠胰腺组织病理学特征的异同及其意义。方法正常C57BL／6小鼠作为对照组（n=4），腹腔内注射链脲霉素（STZ）的C57BL／6小鼠作为STZ组（n=8），非肥胖性糖尿病（NOD）小鼠作为NOD组（n=2）。观察各组小鼠胰腺组织苏木素-伊红（HE）染色特点；应用免疫荧光技术观察特异性标记物在各组小鼠胰腺组织中的表达情况。结果STZ、NOD组小鼠与对照组小鼠比较，HE染色：胰岛数目明显减少；免疫荧光染色：胰岛中Insulin^＋细胞与Glucagon^＋细胞数量比例倒置，Nkx2．2和Nkx6．1的表达均减少，STZ组小鼠胰岛中有少量Ngn3^＋细胞及Insulin^＋Glucagon^＋细胞。结论糖尿病小鼠血糖升高可能是由于B细胞和仅细胞数量的比例倒置所致；成体小鼠胰腺中有干细胞样特性的细胞存在；Nkx2．2需要其他转录因子的参与才能使胰岛内分泌前体细胞生成成熟B细胞。
- 宋陆军沈睿高晓东王洪山牛伟新秦新裕
- 关键词：糖尿病胰岛干细胞
- 小鼠成体肝脏干细胞体外培养模型的建立被引量：2
- 2008年
- 目的观察正常成体小鼠肝细胞的增殖能力和分化潜能，分离成体小鼠肝脏内可能存在的干细胞或祖细胞，建立细胞培养模型。方法应用改良的Seglen二步法灌注和离心分离肝脏细胞，用含血清的改良DMEM培养基进行培养，持续观察超过60d。应用免疫荧光技术对肝细胞及其形成的克隆进行Albumin、AFP和CK19染色。结果部分肝脏细胞培养第2～3天后活化，迅速增殖并形成细胞克隆，培养30d后克隆内出现类似成熟的肝细胞，细胞克隆持续扩增超过60d。该类细胞培养第1天强阳性表达肝细胞标记物Albumin，培养第5天细胞克隆开始表达肝脏干细胞标记物AFP，第55天表达胆管细胞标记物CK19。结论在成体小鼠未损伤肝脏内存在一种成体肝脏祖细胞（adult hepatic progenitor cells，AHPCs），该细胞体外培养具有较强的增殖能力，可分化为肝细胞和胆管细胞，并成功建立了AHPCs的体外培养模型。
- 王洪山宋陆军沈坤堂刘隽高晓东沈睿牛伟新秦新裕
- 关键词：肝细胞移植肝脏干细胞细胞培养
- 骨髓来源细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响被引量：3
- 2008年
- 目的观察骨髓来源细胞（BMDCs）移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响。方法建立糖尿病小鼠模型并分成两组：实验组小鼠（n=8）通过尾静脉移植BMDCs；对照组小鼠（n=8）通过尾静脉注射磷酸盐缓冲液（PBS）。观察两组小鼠血糖的变化、胰岛数量、胰腺组织形态学特征及相关标记物的表达。结果与对照组比较，实验组小鼠移植后第4周血糖出现明显下降（20．7±5．2）比（27．1±1．4）mmol／L，P〈0．05，并持续下降至第6周（16．9±6．0）比（27．7±0．3）mmol／L，P〈0．01，胰岛数目显著增加（22．9±4．8）比（11．6±5．2）个，P〈0．01；实验组小鼠胰岛周围和胰岛内发现绿色荧光蛋白（GFP）阳性细胞，部分GFP阳性细胞同时表达CD34，但未发现同时表达GFP和insulin的细胞。结论BMDCs移植能促进糖尿病小鼠胰岛的修复和再生，但BMDCs在糖尿病小鼠体内不能转分化为胰岛β细胞，CD34阳性细胞在损伤胰岛修复和再生的过程中起重要作用。
- 宋陆军高晓东沈坤堂王洪山牛伟新秦新裕
- 关键词：骨髓移植糖尿病
- 胰岛的可替代资源——干细胞
- 2005年
- 张雷秦新裕
- 关键词：胰岛干细胞胰岛移植糖尿病
- 急性肝损伤小鼠体内的骨髓源性肝细胞研究被引量：2
- 2007年
- 目的观察在急性肝损伤小鼠体内是否存在骨髓来源肝细胞。方法使用CCL4诱导小鼠急性肝损伤,24 h内移植入绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓细胞,移植后不同时间采用免疫荧光方法检测肝脏中的骨髓来源肝细胞。结果骨髓移植后在8周的观察期内肝脏中始终存在骨髓来源的造血干细胞,移植后1、2、4、6、8周肝脏中存在现骨髓来源的表达AFP的未成熟肝细胞,移植后4、6、8周时肝脏中检测到骨髓来源表达ALB的成熟肝细胞。结论急性肝损伤小鼠体内存在骨髓来源肝细胞,骨髓可能是急性肝损伤后肝再生途径之一。
- 刘隽宋陆军王洪山高晓东沈睿牛伟新秦新裕
- 关键词：肝损伤骨髓移植肝细胞
