国家自然科学基金(21077132)
- 作品数：2 被引量：14H指数：1
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- Pseudomonas putida ND6中萘降解调控基因nahR突变株的构建及萘降解调控机制初探
- 2013年
- 【目的】构建Pseudomonas putida ND6中双拷贝萘降解调控基因nahR突变株,初步探讨ND6菌株的萘降解调控模式。【方法】扩增nahR基因的上下游同源片段及卡那霉素抗性基因Km;利用重叠延伸PCR技术将这三个片段连接起来,然后将其克隆到自杀性载体pEX18Tc,得到同源重组载体pEX18Tc-RKm;采用热激法将同源重组载体pEX18Tc-RKm转化到供体菌Escherichia coli S17-1,再利用接合转移的方法将供体菌中的载体转到受体细菌ND6菌株,通过同源重组敲除nahR基因,对突变菌株进行nahR基因调控分析。【结果】成功获得了nahR基因突变株。以萘为唯一碳源的无机盐培养基中,突变株生长明显比野生型延迟;以水杨酸钠为唯一碳源的无机盐培养基中,突变株与野生株生长曲线并无明显差异。以葡萄糖为唯一碳源培养时,野生型ND6中的nahR基因有一定量的本底表达量,加入诱导物水杨酸钠后,其表达水平没有明显的变化。【结论】本研究为深入研究ND6菌株萘降解操纵子调控机制奠定了基础。通过对突变株和野生型的比较研究,我们发现ND6菌株中的萘降解上游操纵子受到NahR蛋白的调控,而下游操纵子不受NahR蛋白的调控,且nahR基因为组成型表达。
- 朱琳李珊珊胡骁杨建佳王振英赵化冰
- 关键词：PSEUDOMONASPUTIDA突变株
- 沙门菌MALDI-TOF-MS标准菌库的建立及应用研究被引量：14
- 2014年
- 目的利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)构建标准沙门菌株数据库。方法利用MALDI-TOF-MS对21株标准沙门菌进行质谱数据采集,建立标准菌株数据库。相关菌株质谱数据通过菌株在相同培养环境不同培养时间下所得质谱数据进行优化。通过血清型鉴定方法筛选出200株野生沙门菌,并利用自建数据库和现有数据库对200株野生沙门菌进行MALDI-TOF-MS检测,对自建数据库进行评价。结果 Bruker原有数据库、自建数据库及合并数据库对200株野生沙门菌鉴定,阳性率分别为87.5%、97.0%、97.5%。21株标准沙门菌株数据库按亲缘关系远近可分为3大类。主成分分析发现不同菌种之间质谱数据有一定的差异,个别菌种在不同培养条件下培养,质谱数据变化不明显。结论本研究建立的标准菌库对野生沙门菌的鉴定准确性高,适用于实际检测。研究结果丰富了已有的数据库,同时也为其他细菌菌库的建立提供了很好的借鉴。
- 胡骁林肖惠佟巍张丽张国辉赵化冰
- 关键词：沙门菌
