北京市自然科学基金(7092013)
- 作品数：10 被引量：43H指数：5
- 相关作者：丁库克周平坤杨川杰李莉张新更多>>
- 相关机构：首都医科大学军事医学科学院辽宁省肿瘤医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 中药有效成分影响宫颈癌Hela细胞凋亡机制的研究进展被引量：17
- 2015年
- 目的随着宫颈癌发病率的逐年上升,中药在治疗宫颈癌放化疗副反应及术后并发症中的作用逐渐被重视。大量研究发现诱导宫颈癌Hela细胞凋亡可以通过影响Bcl-2基因家族、Caspase蛋白酶家族、Fas/Fasl基因系统、某些相关基因的表达等方式来实现。文章从目前国内外研究比较热门的一些中药入手,综述这些中药的有效成分在宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用。例如文中提到中药温莪术有效成分β-榄香烯是通过下调Bcl-2基因表达来促进Hela凋亡;栝楼根的有效活性成分天花粉蛋白促凋亡过程与Caspase家族有关;薏苡仁酯诱导Fas表达上调、Fasl表达下调来促进宫颈癌Hela细胞凋亡。研究中药有效成分影响宫颈癌Hela细胞凋亡机制的目的是为临床应用中药治疗宫颈癌提供科学依据和筛选抗宫颈癌新药提供思路。
- 史海敏丁库克张新
- 关键词：中药有效成分宫颈癌HELA细胞细胞凋亡机制
- 利用RNA干扰技术构建IER5-SiRNA-Hela细胞系被引量：4
- 2011年
- 目的观察小干扰RNA(siRNA)转染Hela细胞后,对IER5基因抑制效果,筛选出高效的siRNA转染质粒。方法利用siRNA设计软件,将设计好的RNA片断插入到siRNA表达质粒载体PsilencerTM 3.1-H1 hygro中,测序正确后转染至Hela细胞中。利用Real-time PCR的方法 ,测定siRNA对Hela细胞中IRE5的抑制效果。结果在mRNA水平及Western blot测试,IER5-siRNA-Hela细胞的IER5基因mRNA表达抑制效果明显。从细胞形态上讲,IER5-siRNA-Hela细胞与正常Hela细胞相比,IER5-siRNA-Hela细胞比Hela细胞体积大。结论本实验成功的获得了特异性抑制IER5基因的IER5-siRNA-Hela细胞系。
- 李莉赵焕英杨川杰鲁苇媛郝淳乔茶周平坤徐勤芝丁库克
- 关键词：REAL-TIMEPCR
- IER5基因对HeLa细胞辐射敏感性的影响被引量：8
- 2009年
- 为寻找放射敏感性基因,采用基因芯片技术筛选出辐射可诱导表达mRNA上调的基因,其中就有IER5.为探索IER5基因的生物学功能及其在宫颈癌放疗中的作用,采用RNA干扰技术构建IER5基因表达抑制的质粒载体并构建IER5-siRNA-HeLa细胞系.对该细胞系与HeLa细胞进行辐射,旨在了解IER5-siRNA-HeLa的细胞生长曲线、细胞周期等实验参数的变化,揭示了IER5基因在辐射诱导中的生物学功能.实验发现,IER5基因表达抑制可提高细胞分裂进入S期与G2-M期的比例,促进细胞分裂,促进细胞生长,提高细胞对辐射的拮抗性,同时发现IER5-siRNA-HeLa细胞在尺寸上大于HeLa细胞.研究表明,IER5基因表达抑制可促使细胞受辐射后发生S期与G2-M期的阻滞,IER5参与辐射细胞周期的调控,对临床宫颈癌放疗有一定的潜在应用价值.
- 李秀楠李莉杨川杰郝淳乔茶杨芬周平坤王佩袁增强李延玲鲁玮媛张为远丁库克
- 关键词：HELA细胞宫颈癌
- 大鼠脑微血管内皮细胞的培养被引量：7
- 2011年
- 目的:探索一种简便易行、可培养出高纯度大鼠脑微血管内皮细胞的方法。方法:1月龄SD大鼠,解剖得到大脑皮质,密度离心法获得较纯的脑微血管段后进行原代培养,传代采用差速消化和贴壁方法进行纯化。通过形态学观察及第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测对培养细胞进行鉴定。结果:密度离心法分离出的大量微血管段呈"串珠样"结构,培养24h可见短梭形、多角形细胞,8～10天基本融合。第2代细胞经免疫荧光染色,第Ⅷ因子相关抗原呈阳性,阳性率达90%。结论:原代细胞采用低分子量葡聚糖加Percoll密度离心法、传代细胞采用差速消化和差速贴壁法纯化可成功培养高纯度的脑微血管内皮细胞。
- 白慧云穆祥丁库克李莉郭洋董小黎
- 关键词：脑微血管内皮细胞细胞培养
- 早期反应基因Ier5启动子区辐射敏感的转录因子结合位点研究被引量：5
- 2012年
- 目的探讨辐射诱导早期反应基因5（Ier5）的转录调控机制。方法运用缺失体构建、定点突变、电泳迁移率实验（EMSA）及染色质免疫共沉淀（ChIP）技术，确定宫颈癌HeLa细胞中Ier5基因启动子区域、转录因子及其结合位点。结果发现Ier5基因的启动子区可能在缺失体Ier5—8所包含的范围（-408～-238bp）内。Ier5基因具有2个转录因子，分别为GCF、NFI，其中GCF的结合位点在Ier5基因启动子-388～-382bp和-274～-270bp处，NFI的结合位点在Ier5基因启动子-362～-357bp处。GCF抑制Ier5基因的表达，抑制作用随1射线吸收剂量的增加而减弱，NFI促进Ier5基因的表达。结论Ier5基因启动子最可能的区域为-408-238bp，该区域存在2个辐射敏感的转录因子GCF和NFI的结合位点。GCF对let5基因的顺式作用元件起负调节作用，而NFI起正调节作用。
- 崔巍尹玲玲董凌月李莉刘志成李延玲安威刘晓丹杨川杰周平坤丁库克
- 关键词：转录
- 早期反应基因IER5生物学功能研究
- 2009年
- 采用基因芯片技术筛选出IER5基因辐射后出现mRNA表达上调。为探索IER5基因的生物学功能及其在宫颈癌的放疗中的作用。
- 丁库克杨川杰周平坤李莉
- 关键词：HELA宫颈癌
- GCF低表达宫颈癌HeLa细胞系的构建及辐射对其调控IER5基因表达的初步探究被引量：2
- 2015年
- 目的构建GCF低表达的宫颈癌He La细胞系,在60Coγ射线照射下初步探究其细胞增殖以及调控宫颈癌放射敏感基因IER5的表达。方法经带有荧光标记的GCF低表达的质粒稳定转染He La细胞,G418筛选,蛋白印迹法、实时定量PCR法鉴定得到GCF-shRNA-He La单克隆细胞系。倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法探究不同剂量照射后的细胞增殖情况,在不同照射剂量下用蛋白印迹法检测GCF-shRNA-He La及对照细胞中IER5蛋白的表达情况。结果成功构建稳定表达的GCF-shRNA-He La单克隆细胞系,显微镜下观察GCF-shRNA-He La细胞比正常He La细胞体积小,细胞间隙较大,其中梭形细胞较多。蛋白印迹法及实时定量PCR验证了GCF-shRNA-He La的蛋白表达及mRNA转录水平均低于对照组(P<0.05)。辐射情况下实验结果显示在同一照射剂量、同一时间下GCF-shRNA-He La细胞比control对照细胞增殖缓慢(P=0.014)。不同剂量照射情况下蛋白印迹法检测He La细胞、control-shRNA-He La与GCF-shRNA-He La细胞IER5蛋白表达情况,结果同一辐照剂量下GCF沉默的细胞系中IER5的表达量比对照细胞高,4Gy照射的GCF-shRNA-HeLa的IER5表达量最高(P<0.05)。结论本实验构建了低表达GCF的He La细胞系,初步探讨GCF作为IER5基因抑制性转录因子的作用。结合临床基因靶向治疗,可寻求可以降低GCF表达的方式,通过上调IER5表达这一双效途径来加速宫颈癌细胞凋亡。
- 史海敏丁库克周平坤陈丹郭冬梅赵春丽张新
- 关键词：GCFHELA细胞细胞增殖
- 早期反应基因IER5生物学功能研究
- ＜正＞采用基因芯片技术筛选出IER5基因辐射后出现mRNA表达上调。为探索IER5基因的生物学功能及其在宫颈癌的放疗中的作用,本论文采用RNA干扰技术构建IER5
- 丁库克杨川杰周平坤李莉
- 关键词：HELA宫颈癌
- 文献传递
- 中药对宫颈癌Hela细胞放射增敏作用的实验研究进展被引量：5
- 2012年
- 放疗是宫颈癌最重要的治疗方法之一,放射增敏剂的应用可以提高放疗疗效。全文就一些中药单体对宫颈癌细胞放射增敏作用的实验研究进展及其主要作用机制作一分析。
- 丛霄霞丁库克张新
- 关键词：中药宫颈癌放射增敏剂
- 用MATLAB探索肿瘤细胞辐射效应的定量分析被引量：2
- 2010年
- 目的:研究发现Hela细胞经辐射后,其IER5的mRNA出现高表达,说明IER5基因与辐射之间存在的一定的量效关系[1-5]。为了进一步研究这一关系,开展了对IER5基因抑制及表达后,细胞经辐射反应影响的研究,其中包括对细胞凋亡现象进行的定量分析。方法:将Hela细胞与HepG2细胞接种在裸鼠皮下,进行饲养,一定时期后进行γ射线照射,取其脏器,制作成切片,经TUNEL技术染色后,在荧光显微镜下观察并拍摄细胞凋亡图片,对所拍摄的图片用MATLAB图像处理软件进行图像处理,并通过编程对大量的凋亡细胞进行自动计数。结果:对接种了Hela细胞与HepG2细胞的裸鼠经辐射后,其组织有细胞凋亡现象;对荧光显微镜下拍摄的细胞凋亡图片用MATLAB图像处理软件进行处理和编程,实现了对图片中的凋亡细胞的定量分析和自动计数。结论:接种了Hela细胞与HepG2细胞的裸鼠,经辐射后,其脑组织、肝组织切片经TUNEL染色后,在荧光显微镜下观察到细胞凋亡现象;用MATLAB数字图像处理软件可以对荧光显微镜下拍摄的细胞凋亡图片进行处理,并可以实现图片中凋亡细胞的定量分析。
- 鲁玮瑗刘志翔李莉马惠苹郑坤洋丁库克
- 关键词：细胞凋亡
