广东省名医工程研究项目(2004-29)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 相关作者：赵红宇张雪洋章锦才赵华胡飞更多>>
- 相关机构：广东省口腔医院郑州大学郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：河南省杰出青年科学基金广东省名医工程研究项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 辛伐他汀对人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的影响
- 2008年
- 赵华赵红宇张雪洋王春先张旭肖燕何巍胡飞章锦才
- 关键词：人牙周膜细胞辛伐他汀CELLSALP活性
- 人釉原蛋白基因在大肠杆菌中的融合表达被引量：1
- 2008年
- 目的建立人釉原蛋白(AMG)成熟肽基因在大肠杆菌中融合表达和纯化的技术路线。方法利用已构建并经鉴定的重组质粒pGEX-4T-1/AMG转化大肠杆菌BL21,分别对诱导时间、异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)浓度和诱导温度进行优化,在最佳诱导表达条件下,分别对菌液上清、周质、胞质和包涵体中的目的蛋白表达进行分析,在可溶性蛋白中发现大量目的蛋白,随后利用GSTrapFF亲和层析柱进行人AMG融合蛋白的过柱纯化。结果pGEX-4T-1/AMG重组质粒的双酶切凝胶电泳鉴定结果和测序鉴定结果和预期一致。最佳诱导时间为14.5h、最佳诱导剂浓度为1.0mmol/L、最佳诱导温度为20℃,在此条件下目的蛋白的表达量达到峰值。在最佳诱导条件下,胞质蛋白和包涵体中都有大量的目的蛋白。提取大量胞质蛋白,经GSTrapFF亲和层析柱纯化,收集纯化液,进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,显示成功纯化了AMG融合蛋白,在提取液洗涤2次后,可获得高纯度的融合蛋白。结论利用pGEX-4T-1/AMG原核表达体系成功获得纯化的人AMG融合蛋白。
- 张雪洋赵华赵红宇王春先章锦才
- 关键词：人釉原蛋白融合蛋白纯化
- Emdogain对人牙周膜细胞增殖、分化及合成Ⅰ型胶原能力的影响被引量：5
- 2007年
- 目的:观察Emdogain对人牙周膜细胞(HPLC)增殖、分化及合成Ⅰ型胶原能力的影响,进一步探讨Emdogain促进牙周组织再生的机制。方法:体外培养人牙周膜细胞,在培养液中加入不同浓度的Emdogain,然后用MTT法、碱性磷酸酶试剂盒、羟脯氨酸试剂盒检测人牙周膜细胞的增殖、分化及合成Ⅰ型胶原能力。结果:EMD在100、50、25 mg/L各浓度时对HPLC细胞有明显的促增殖作用,且50 mg/L作用最强;25、50、100 mg/L浓度可增加HPLC细胞的ALP活性,且以50 mg/L浓度作用效果最佳,而200 mg/L浓度组在实验期间不能提高HPLC细胞的ALP的活性;25、50、100、200 mg/L4个浓度梯度EMD可增强HPLC形成Ⅰ型胶原的能力。结论:Emdogain对人牙周膜细胞的生物学活性有明显的促进作用,提示这可能是Emdogain促进牙周组织再生的重要机制。
- 赵华张雪洋张旭肖燕何巍胡飞赵红宇章锦才
- 关键词：EMDOGAIN牙周膜细胞碱性磷酸酶羟脯氨酸
- 人釉原蛋白编码区基因原核表达载体的构建被引量：2
- 2007年
- 目的:构建人釉原蛋白(amelogenin,AMG)成熟肽编码区基因的原核表达载体。方法:运用TA克隆技术,将AMG基因片断插入质粒pMD 18-T,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,T4 DNA连接酶连接目的基因AMG与原核表达质粒pGEX-4T-1,最终获得重组原核表达载体pGEX-4T-1/AMG。结果:对重组质粒pMD 18-T/AMG和pGEX-4T-1/AMG进行酶切和测序鉴定,酶切电泳图和测序结果与预期结果一致。结论:成功构建了人釉原蛋白(AMG)成熟肽编码区基因的原核表达载体。
- 张雪洋赵华胡飞赵红宇章锦才
- 关键词：人釉原蛋白原核
