中国科学院“百人计划”(02200420062903)
- 作品数：18 被引量：78H指数：5
- 相关作者：夏新界王曼玲李落叶徐孟亮徐国云更多>>
- 相关机构：中国科学院亚热带农业生态研究所中国科学院研究生院湖南师范大学更多>>
- 发文基金：中国科学院“百人计划”湖南省重大科技专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 一个新的水稻逆境响应基因OsMsr1的表达与克隆被引量：18
- 2008年
- 为深入了解植物的逆境反应机理和发现新的水稻耐逆基因,采用Affymetrix水稻表达芯片(含51279个转录本)分析了超级稻两优培九母本培矮64S不同生长发育时期、不同组织器官全基因组在低温、干旱、高温逆境胁迫下的表达水平,筛选出众多表达水平显著升高与降低的基因。OsMsr1(Oryza sativa L.multiple stresses responsive gene 1,Gen Bank登录号为EU284112)是其中一个受高温、低温与干旱诱导、在各生长发育时期与组织器官均显著上调的基因,用实时定量PCR方法对其表达水平进行了进一步的分析,所得结果与基因芯片结果基本吻合,因此,此基因为一多逆境响应基因。用RT-PCR方法扩增获得了包含其完整ORF(open reading frame)的cDNA克隆。根据其ORF序列进行预测,此基因编码一个包含89个氨基酸残基的小分子蛋白,分子量约为10kD,pI约为5。搜索有关数据库,在水稻、玉米、小麦与拟南芥中找到有高相似性的基因,但功能未知,也未发现相同与类似的已知功能的基因保守结构域。对其可能的启动子序列分析,发现5个与逆境反应有关的顺式作用元件。因此,我们认为该基因为一新的水稻耐逆候选基因,进一步的研究正在进行。
- 徐孟亮陈荣军ROCHA Pedro李落叶王曼玲徐国云夏新界
- 关键词：水稻逆境基因芯片实时定量PCR基因克隆
- 根癌农杆菌介导的水稻两用不育系培矮64S遗传转化体系的建立被引量：4
- 2009年
- 以水稻两用不育系培矮64S成熟胚为外植体,以不同组合培养基为诱导和继代培养基,建立了适合水稻培矮64S转化的高效再生体系,并通过农杆菌EHA105介导,将大肠杆菌C1基因转入培矮64S,获得再生植株。结果表明,J0N1D3为合适的愈伤组织诱导培养基,诱导率达56.44%;通过潮霉素筛选后,获得的抗性愈伤组织分化率为73.08%,经分化,获得133株再生植株;随机挑选67株再生植株经PCR检测,其中46株检测到目的条带,阳性检出率占68.66%;对PCR阳性植株进行荧光定量实时PCR分析,结果表明C1基因能在转基因植株中表达。通过对T1代PCR分析,得到目的条带,表明C1基因能在转基因后代稳定遗传。
- 肖媛李落叶徐孟亮崔延春夏新界
- 关键词：水稻培矮64S成熟胚根癌农杆菌
- 水稻逆境响应基因OsMsr15的表达分析与克隆被引量：2
- 2012年
- 应用Affymetrix水稻表达芯片,分析了苗期和孕穗期的培矮64S水稻基因在高温、干旱和低温逆境处理条件下的表达模式,发现多个与逆境反应相关基因.其中,OsMsr15(Oryza sativa L.multiple stresses responsivegene 15)受高温、干旱和低温胁迫诱导,表达水平均显著上调.实时定量PCR分析结果与芯片数据基本吻合.序列分析表明,该基因无内含子,ORF(open reading frame)全长为717 bp,编码一个由238个氨基酸残基组成、具有典型C2H2结构域的锌指蛋白,推测相对分子质量约为2.46 kD,pI值约为8.90,蛋白分子的氨基端和羧基端分别存在一个推测的核定位信号B-box和EAR(ERF-associated amphiphilic repression)基序.对OsMsr15可能的启动子区域进行分析,发现多种与逆境诱导相关的调控元件.该基因编码的蛋白在不同物种中存在高度相似性,显示OsMsr15基因可能作为一个保守的耐逆基因,参与植物的多种耐逆反应过程.
- 张新陈荣军王曼玲宋书锋夏新界
- 关键词：水稻逆境基因芯片基因克隆
- 水稻逆境响应基因OsMsr11的克隆与分析
- 2012年
- 为了挖掘新的耐逆基因,本文在应用Affymetrix水稻表达芯片分析超级稻亲本培矮64S在不同逆境(高温、干旱、低温)胁迫下、不同发育时期叶片和穗中全基因组表达模式的基础上,对其中一个多逆境响应基因OsMsr11(Oryza sativa L.multiple stressresponsive gene 11)进行了克隆与分析。OsMsr11是一个受低温、干旱、高温多逆境诱导的基因,在孕穗期低温胁迫下表达水平显著上调。通过PCR扩增获得了包含其完整开放阅读框的cDNA序列。序列分析表明,其ORF为234 bp,编码77个氨基酸,有信号肽序列,无典型的保守基因结构域,预测其为分泌通路信号肽,分泌到细胞周质中,功能未知;OsMsr11基因不含内含子,对其启动子区域进行分析,发现含有多种与逆境响应相关的顺式作用元件。为研究其功能,采用农杆菌侵染法转化超级稻父本9311,初步分析表明:在水稻中过量表达OsMsr11,增强了转基因水稻的耐盐性,降低了对外源ABA的敏感性。
- 胡叶平崔延春徐国云王曼玲李落叶夏新界
- 关键词：水稻逆境基因芯片脱落酸
- 根癌农杆菌介导籼稻93-11遗传转化体系的建立被引量：10
- 2008年
- 为建立水稻基因功能研究技术平台并通过生物技术改良优良恢复系,选用93-11成熟胚为外植体,通过优化培养基,建立了适合转化的高效再生系统;首次通过农杆菌介导将大肠杆菌基因C1成功转化93-11,构建了根癌农杆菌介导籼稻93-11遗传转化体系.结果表明,NBA1D3为合适的愈伤诱导培养基,诱导率达87.0%;愈伤经3次继代培养转入分化培养基,分化率为47.0%.获得213株潮霉素抗性植株,随机挑选89株经PCR检测,65株检测到目的条带,阳性植株占73.0%;实时PCR检测C1基因能在转基因植株表达.
- 肖媛李落叶徐孟亮夏新界
- 关键词：成熟胚根癌农杆菌
- 水稻多逆境诱导基因OsMsr4的克隆与表达分析被引量：3
- 2009年
- 为深入了解水稻逆境反应的分子机理和发现新的耐逆相关功能基因,采用A ffym etrix水稻表达芯片分析超级稻两优培九母本培矮64S(O ryza sativaL.)不同生长发育时期、不同组织器官全基因组在低温、干旱、高温逆境胁迫下的表达水平,筛选出多个多因子诱导高表达特异基因(待另文发表)。O sM sr4是其中一个在多种逆境条件,各生长发育时期与组织器官,其表达量均显著上调的基因,用实时定量PCR方法对其表达水平进行了进一步的分析,所得结果与基因芯片结果基本吻合。用PCR方法扩增获得长为550 bp全长基因序列,其编码的144个氨基酸残基形成Cys2H is2型双锌指结构蛋白,并且锌指结构的α-螺旋区含有植物锌指蛋白特定的保守序列QALGGH。因此,OsM sr4有可能是TFⅢA型锌指蛋白,作为转录因子参与各种环境胁迫应答反应,调控多个逆境相关基因表达。
- 王曼玲Rocha Pedro李落叶徐孟亮夏新界
- 关键词：水稻逆境基因芯片实时定量PCR基因克隆
- 茶陵野生稻苗期耐冷性研究被引量：4
- 2009年
- 以耐冷性强弱不同的栽培稻为参比,通过自然冷胁迫与(或)人工冷处理,比较了茶陵野生稻与不同类型栽培稻经冷胁迫后的秧苗成活率、净光合速率和光系统Ⅱ光化学量子效率的变化,对茶陵野生稻苗期耐冷性作出评估。结果表明:经冷胁迫后,茶陵野生稻上述指标值的变化小于典型籼稻和爪哇稻,大于典型粳稻。说明茶陵野生稻苗期耐冷性强于籼稻和爪哇稻,但弱于粳稻。
- 徐孟亮陈志肖媛崔延春徐国云夏新界
- 关键词：普通野生稻水稻耐冷性净光合速率叶绿素荧光参数
- 一个水稻多逆境响应基因OsMsr3克隆与表达分析
- 2009年
- 为深入探讨水稻对逆境的反应机理并寻找新的植物耐逆基因，采用Affymetrix水稻表达芯片（含51279个转录本）分析了培矮64S全基因组在不同逆境（高温、干旱、低温）胁迫下、不同生育时期叶片和穗中的表达谱，从中筛选出一个受多种逆境诱导表达的基因OsMsr3（Oryza sativa L．multiple stresses responsive gene3，Gen Bank登陆号为FJ383169）。定量实时PCR分析结果进一步证实了此基因在逆境条件下的诱导表达模式。用RT—PCR方法扩增获得了包含其完整开放阅读框的cDNA克隆，序列分析表明，其ORF大小为480bp，编码一个具有160个氨基酸残基的低分子量热激蛋白，推测分子量约为18．0kD；pI约为6．8。对其编码的蛋白质进行分析，发现其羧基端存在一个HSP20的蛋白保守结构域，与其他植物中的低分子量热激蛋白的相似牲介于33．7％-97．5％。对其可能的启动子序列分析，发现6类与逆境反应有关的顺式作用元件。推测该基因在逆境反应中起着重要的作用，进一步的研究正在进行中。
- 崔延春徐孟亮李落叶王曼玲徐国云夏新界
- 关键词：水稻逆境基因芯片
- 水稻多逆境响应基因OsMsr13的克隆与功能分析
- 2011年
- 为了深入研究作物耐逆境胁迫的分子机制和发现新的水稻耐逆基因,采用Affymetrix基因芯片技术与水稻表达芯片(含51,279个转录本),分析了培矮64S不同生长发育时期、不同组织器官全基因组在低温、干旱、高温逆境胁迫下的表达水平变化,筛选出一批耐多逆境候选功能基因。OsMsr13是其中一个受低温、高温与干旱诱导,在各生长发育时期与组织器官均显著上调的基因。根据序列生物信息学分析,OsMsr13含有7个外显子和6个内含子c,DNA全长序列为1603bp,完整的ORF为1317bp,编码一个含438个氨基酸残基的蛋白质;在OsMsr13启动子区域发现多个与逆境应答相关的顺式作用元件;数据库查找和蛋白质多序列的比对表明OsMsr13的预测蛋白属于钙调素结合蛋白家族。为了进一步研究OsMsr13基因的功能,通过RT-PCR方法扩增到包含OsMsr13完整ORF的cDNA克隆,构建了含有OsMsr13重组基因的过量表达载体pCAM-JIT-OsMsr13,并经农杆菌介导法将重组基因导入到水稻中。转OsMsr13株系苗期的抗逆性试验表明OsMsr13过量表达能显著地提高水稻的耐寒性,但在抗旱和耐高温方面,转基因植株和野生型9311没有观察到多大差别。
- 杨细平赵洋王曼玲朱玉兴夏新界
- 关键词：水稻逆境基因芯片基因转化
- 应用基因表达芯片分析水稻高温胁迫相关基因被引量：6
- 2009年
- 非生物逆境,如低温、高温、干旱通常会严重影响到农作物的生长及产量,其中高温胁迫则是造成植物伤害的主要原因之一。为深入了解水稻高温胁迫反应的分子机理,发现新的耐高温相关功能基因,为水稻生物工程育种提供候选材料,采用Affymetrix水稻表达芯片分析了超级稻两优培九母本培矮64S(Oryzasativa L.)在高温逆境胁迫下,孕穗期、抽穗开花期的叶片全基因组表达谱,得到大量高温诱导表达基因。应用实时定量PCR方法对其中一部分基因的表达水平进一步分析,所得结果与基因芯片结果基本吻合,证明芯片分析数据是可靠的,为下一步耐高温相关基因的克隆、功能分析等研究提供了基础。
- 王曼玲Rocha Pedro李落叶徐孟亮Din Chen夏新界
- 关键词：水稻逆境基因芯片实时定量PCR
