广东省科技攻关计划(532014202028)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 相关作者：江丽芳赵卫龙北国张文炳晏辉钧更多>>
- 相关机构：中山大学南方医科大学中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：广东省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SARS病例尸解标本和咽嗽液中病原体检测被引量：1
- 2005年
- 目的 确定严重急性呼吸系统综合征(SARS)病例尸解肺组织和咽嗽液中病原体种类。方法 用超薄切片电镜技术观察广东省传染性非典型肺炎流行早期3例死亡病例尸解肺组织标本,用RT- PCR法扩增尸解肺组织和SARS病人咽嗽液中SARS冠状病毒特异核酸片段,并进行序列测定。结果 在死亡病人肺组织中观察到衣原体的网状体、中间体以及原体颗粒,并见衣原体包涵体样结构;用RT- PCR法在2例尸解肺组织扩增出预期大小的DNA片段,测序后经相似性(BLAST)比较,其与SARS冠状病毒相应基因片段高度同源;用巢式RT -PCR技术在SARS病人咽漱液中扩增出SARS冠状病毒特异基因片段。结论 在SARS尸解肺组织中发现衣原体样颗粒,在尸解肺组织和咽漱液中扩增出SARS冠状病毒核酸片段,说明SARS患者可合并衣原体等微生物混合感染。
- 晏辉钧赵卫方丹云周经姣张文炳龙北国郭辉玉江丽芳
- 关键词：传染性非典型肺炎衣原体SARS冠状病毒逆转录多聚酶链式反应
- SARS冠状病毒S2基因原核表达及免疫学特性被引量：5
- 2007年
- 目的研究严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒S2蛋白表达并对其免疫学特性。方法克隆SARS冠状病毒S2基因,并在大肠埃希菌中表达谷胱甘肽硫转移酶(GST-S2)融合蛋白。通过免疫印迹(Westernblot)和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法鉴定表达GST-S2融合蛋白的活性。结果通过原核系统表达的GST-S2融合蛋白可与谷胱甘肽硫转移酶(GST)多克隆抗体结合,并在85千道尔顿(KD)处出现特异性结合条带。GST-S2蛋白能与SARS患者恢复期血清反应,而不与正常人血清反应。结论本项研究获得了SARS冠状病毒GST-S2融合蛋白,它可与GST多克隆抗体特异性结合,并与SARS患者恢复期血清发生特异性反应。
- 周浩龙北国张文炳江丽芳陈丽丹贡树基赵卫
- 关键词：SARS冠状病毒S2基因克隆
- SARS冠状病毒M基因的克隆及其表达
- 2005年
- 从SARS冠状病毒(GD322株)组织培养上清中提取 RNA,进行 RT PCR扩增其 M基因并克隆到巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB,电穿孔法将重组体整合入酵母菌 P. pastoris,经抗生素 Zeocin筛选产生的转化子进行表型鉴定,取Mut+菌用甲醇诱导表达,SDS PAGE检测其表达产物。Mut+ 酵母转化菌经甲醇诱导可分泌表达约 65kDa和42 kDa的蛋白质,与SARS恢复期病人血清的免疫印迹证实它们为特异的重组M蛋白质,且获得的重组M蛋白质具有免疫反应性。
- 晏辉钧赵卫方丹云周经姣龙北国张文炳郭辉玉江丽芳
- 关键词：SARS冠状病毒M基因克隆巴氏毕赤酵母
- 乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白主要抗原片段的高效表达被引量：5
- 2005年
- 在本实验室已构建的原核表达载体(含乙脑疫苗株SA14 14 2株E蛋白基因主要抗原片段)的基础上用巴斯德毕赤酵母系统表达,该片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,将其亚克隆入酵母表达载体pPICZαA,以电穿孔法转化酵母X 33,用Zeocin平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS PAGE和免疫印迹分析表达产物。由于糖基化不同,所表达产物有两种,其相对分子质量分别为44kDa和50kDa,表达量较高,约为290mg/L,经Western印迹验证,有较好的抗原性。在ELISA试验中,我们直接以PBS透析后的酵母上清包被,能够很明显地区分出乙脑阴阳性血清,与RT PCR检测的相符率达95%,为制备JEV的诊断抗原和基因工程疫苗提供了依据。
- 葛菲菲邱亚峰杨耀武陈溥言
- 关键词：巴斯德毕赤酵母
- SARS冠状病毒M基因在大肠杆菌中的表达及其免疫学特性初步研究被引量：1
- 2005年
- 【目的】在大肠杆菌中表达SARS冠状病毒包膜(M)蛋白与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,并对其进行血清学鉴定。【方法】克隆编码SARS冠状病毒M蛋白的基因,并在原核系统中表达GST-M融合蛋白,用Westernblot和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析GST-M融合蛋白。【结果】10份SARS患者恢复期血清均能识别M-GST融合蛋白,并在Mr=52000附近出现特异性结合带;而10份正常人血清不与M-GST融合蛋白起反应。【结论】本研究获得了SARS冠状病毒GST-M融合蛋白,它可与SARS患者的恢复期血清产生特异性的结合反应,为研究SARS冠状病毒感染宿主细胞的过程和制备重组疫苗提供了条件。
- 晏辉钧赵卫方丹云周经姣龙北国张文炳郭辉玉江丽芳
- 关键词：SARS冠状病毒GST融合蛋白融合蛋白免疫学特性大肠杆菌特异性结合
