安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2009A75)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 长枝木霉eg1基因的克隆及表达被引量：1
- 2012年
- 从长枝木霉3.1029基因组中克隆了内切葡聚糖酶EGI基因,该基因全长1 566 bp,由3个外显子2个内含子组成,编码461个氨基酸,编码蛋白的N端为22aa组成的信号肽。采用重叠PCR法获得无内含子的内切葡聚糖酶基因eg1,构建成pYE-Leg1重组质粒;同时将其成熟肽编码序列插入酿酒酵母分泌型表达载体pYEα中,构建成pYEα-Leg1重组质粒;分别转化酿酒酵母。重组转化子经β-半乳糖诱导,检测表达产物的酶活,结果表明,pYE-Leg1转化子无明显胞外酶活;而pYEα-Leg1转化子在刚果红平板上可产生明显的水解圈,酶活检测显示pYEα载体可有效地将该基因在酿酒酵母中表达并分泌到胞外,发酵液中的酶活在培养96 h达到最高1.16 U/mL,最适酶解温度为50℃,最适pH值为5.6。以上研究将为利用酿酒酵母生产胞外纤维素酶提供依据。
- 王旭范军朱苏文程备久陶芳
- 关键词：酿酒酵母分泌表达
- 拟康氏木霉egl基因的克隆及在酿酒酵母中的分泌表达被引量：1
- 2011年
- 从拟康氏木霉3.3002基因组中克隆了内切葡聚糖酶EGI基因,该基因全长1566bp,由3个外显子2个内含子组成,编码461个氨基酸。编码蛋白EGI的N端为22aa组成的信号肽,其后依次为催化结构域、连接肽和结合结构域。采用重叠PCR法获得无内含子的内切葡聚糖酶基因egI,并将其成熟肽编码序列插入酿酒酵母分泌型表达载体pYEα中,构建成pYEα-Peg1重组质粒,转化酿酒酵母。重组转化子经β-半乳糖诱导,检测表达产物的分子大小以及酶活,结果表明,转化子在刚果红平板上可产生明显的水解圈;酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EG I并分泌到胞外;SDS-PAGE电泳显示EGI蛋白分子量比预期目的蛋白稍偏大。
- 陶芳王旭江海洋范军朱苏文程备久
- 关键词：拟康氏木霉酿酒酵母分泌表达
