国家自然科学基金(39670196)
- 作品数：7 被引量：25H指数：4
- 相关作者：吴元德李芸施广璞刘旭廖钢陵更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 超氧阴离子自由基致NIH3T3细胞DNA损伤与c-myc基因表达被引量：4
- 2000年
- 目的 研究超氧阴离子自由基 (O2 .- )对 NIH3T3细胞 DNA的损伤及其脂质过氧化作用和对 c- m yc基因表达的影响。方法 用黄嘌呤 -黄嘌呤氧化酶 (X- XO)系统产生 O2 .- ;测定 DNA-溴乙锭结合物荧光强度变化确定 DNA损伤程度 ;以硫代巴比妥酸法测定脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量 ;以细胞原位杂交法检测 c- myc基因表达。结果 高剂量 O2 .-能直接引起 DNA断裂损伤。O2 .-作用于完整细胞 ,MDA含量及 DNA断裂损伤显著增加 ,过氧化氢酶能明显抑制此效应。中、高剂量 O2 .- 能引起明显的 c- myc基因表达。结论 O2 .- 引起细胞 DNA损伤与过氧化氢的形成有关 ,其损伤的途径可能是通过膜脂质过氧化 ;O2 .- 诱导 NIH3T3细胞 c- m yc基因表达与剂量密切相关。
- 余斌李芸盛齐廖钢陵吴元德
- 关键词：超氧阴离子自由基DNA损伤脂质过氧化基因表达
- 超氧阴离子自由基对大鼠肝卵圆细胞胞内自由钙浓度的影响被引量：6
- 2000年
- 采用激光共聚焦扫描显微镜，观察黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶反应系统（ Ｘ／ＸＯ）生成不同浓度的超氧阴离子自由基（Ｏ２）致培养的大鼠肝卵圆细胞（ＷＢ细胞）胞质内钙浓度的变化，结果发现：仅小剂量的Ｏ２（Ｘ：２００ｍｏｌ／Ｌ ＸＯ：０．２ｍｕ／ｍＬ）引起胞质内钙浓度升高，约３０ｓ后达到峰值，６０ｓ后恢复正常。部分细胞观察到数次钙浓度间断升高、幅度逐渐下降的现象。超氧化物歧化酶（ ＳＯＤ）可抑制此变化，过氧化氢酶（ ＣＡＴ）无效果。细胞在无钙液中观察仍出现钙峰，但受内钙库耗竭剂Ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ阻断。结果表明，小剂量Ｏ２可诱使肝卵圆胞胞内钙库钙释放造成瞬间胞质自由钙浓度增高，并可能引发胞内钙浓度的衰减振荡，此可能与Ｏ２通过影响胞内重要信号转导因子钙，调控细胞生物学功能如增殖、转化相关。
- 廖钢陵李芸俞志宏刘旭吴元德
- 关键词：超氧阴离子自由基肝卵圆细胞肝肿瘤
- H_2O_2对大鼠肝卵圆细胞株WB-F344细胞膜理化特性、脂质过氧化及基因组DNA的影响被引量：2
- 2001年
- 目的 研究小剂量(100 nmol/L)H_2O_2对大鼠肝卵圆细胞株WB-F344细胞膜理化特性、脂质过氧化及基因组DNA的影响。方法利用标记膜脂及膜蛋白质的荧光标记物1，6-二苯基-1，3，5-己三烯(DPH)和N-(3芘)马来酰亚胺[N-(3P)M]标记不同剂量H_2O_2作用及经H_2O_2多次作用后发生转化的WB细胞，通过测定其荧光偏振度确定膜理化特性的改变；以硫代巴比妥酸(TBA)法测定其脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量的变化；以及利用溴化乙锭(EB)作荧光探针，通过DNA-EB结合物荧光强度的变化确定其基因组DNA的损伤程度。结果小剂量(100 nmol/L)H2O2的一次作用可使膜蛋白运动度增加，膜脂流动性增大，MDA的含量增高；H_2O_2的多次作用使上述变化更为显著。大剂量(1 mmol/L)、中剂量(100 μmol/L)的H_2O_2作用细胞后可直接损伤基因组DNA，小剂量H2O2的一次作用虽然不能直接损伤基因组DNA，但多次作用后却可使基因组DNA受损。结论H_2O_2可诱使WB细胞膜理化特性发生改变，脂质过氧化产生及造成基因组DNA损伤，此可能与H_2O_2的致、促癌作用有关。
- 施广璞李芸霍淑敏吴元德
- 关键词：脂质过氧化DNA损伤
- 活性氧对大鼠肝卵圆细胞株WB-F344钾通道的作用被引量：1
- 2000年
- 用膜片箝技术的细胞贴附式 (cell-attached)观察O2.-对大鼠肝卵圆细胞株WB -F344K +通道活动的影响 ,结果发现 :1)在细胞处于静息状态时 ,在箝制电压为0mV ,每10mV阶跃 ,测试电压分别达±120mV范围内未记录到通道活动。此时 ,小剂量O2.- 也不能激活WB细胞的通道活动。在细胞外液中加入20mmol/LCaCl2 后通道开启 ,记录到小振幅的通道活动 ,它们的电导是9.48±0.93ps(n=4)。此时再用O2.-作用于细胞 ,通道被激活 ,通道电导增大 ,在正测试电压时为15.74±5.46ps(n=8) ,在负测试电压时为48.32±8.67ps(n=6)。通道活动具有外向整流特性。2)胞外加入4 -AP可抑制该通道的活动 ,而SNP则可增强通道的活动。
- 施广璞于德洁鲍光宏
- 关键词：膜片箝钾通道肝卵圆细胞活性氧
- 过氧化氢促肝卵圆细胞株WB-F344的增殖及转化作用被引量：5
- 2001年
- 目的 探讨过氧化氢（H_2O_2）对肝卵圆细胞株WB-F344的促增殖及转化作用。 方法 用H_2O_2直接作用于培养的WB-F344细胞，以MTT 比色试验、3H-TdR掺入液闪计数观察其对细胞的促增殖效应；经N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）启动的和未经MNNG启动的WB细胞用小剂量H_2O_2连续作用促其转化，以形态学观察、核型分析及甲基纤维素半固体培养进行检测。 结果 小剂量的H_2O_2一次作用具有明显的促进WB细胞增殖的效应，连续作用28 d，可促进经MNNG启动的和未经MNNG启动的WB细胞发生转化，形态上呈现典型的转化细胞的特征；核型分析显示染色体数目改变，染色体结构畸变率明显升高；在甲基纤维素半固体培养基中形成克隆。 结论 小剂量H_2O_2可诱使肝卵圆细胞增殖、转化，提示H_2O_2在肝癌发生中可能具有重要作用，抗氧化作用可能在肝癌的防治中具有一定的意义。
- 施广璞李芸王全意吴元德
- 关键词：过氧化氢增殖肝癌肿瘤发生
- 超氧阴离子自由基促肝卵圆细胞株WB-F344增殖、转化作用的研究被引量：7
- 2000年
- 目的 探讨超氧阴离子自由基 (O- ·2 )对肝卵圆细胞株 WB- F34 4的促增殖及转化作用。方法 用黄嘌呤 -黄嘌呤氧化酶 (X- XO)系统产生的 O- ·2 直接作用于培养的 WB- F34 4细胞 ,以 MTT比色试验、3H- Tdr掺入液闪计数、3H- Tdr掺入放射自显影观察其对细胞的促增殖效应 ;细胞经 N-甲基 - N′-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)启动后 ,用小剂量的 O- ·2 (10 0μmol/L X,0 .2 m U /m l XO)连续作用促其转化 ,以形态学观察、核型分析及甲基纤维素半固体培养进行检测。结果 小剂量的 O- ·2 1次作用具有明显的促进 WB细胞增殖效应 ,连续作用 15 d,促进经 MNNG启动的 WB细胞的转化 ,形态上呈现典型的转化细胞的特征 ;核型分析显示染色体数目改变 ,染色体结构畸变率明显升高 ;在甲基纤维素半固体培养基中可形成克隆。结论 小剂量的 O- ·2 可诱使肝卵圆细胞增殖、转化 ,提示 O- ·2 在肝癌的发生中具有重要作用 。
- 李芸廖钢陵邓建籽吴元德
- 关键词：超氧阴离子自由基增殖肝癌
- H_2O_2致WB-F344细胞内活性氧的产生及机理被引量：6
- 2002年
- 以双氢罗丹明123(DHR123)作为荧光探针,采用激光共聚焦扫描显微镜研究小剂量(800 nmol/L)H2O2诱导大鼠肝卵圆细胞株WB-F344细胞内活性氧产生的动态变化过程及其机理。结果发现:(1)小剂量H2O2的一次作用可以引起胞内活性氧的产生;(2)胞内活性氧清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)处理2 h时后,再加入小剂量H2O2,发现胞内活性氧的产生明显减少;(3)用广谱的蛋白激酶抑制剂2-氨基嘌呤(2-AP)、Ca2+依赖性蛋白激酶(PKC)抑制剂Bisindolylmaleimide I、酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂Tyrphostin 25分别预处理15 min后,H2O2诱导的胞内活性氧的产生现象均消失;(4)细胞在无外钙环境下,小剂量H2O2诱导的胞内活性氧的产生明显减少;(5)细胞在无外钙环境下用NAC预处理后,H2O2诱导的胞内活性氧的产生现象消失。结果表明,H2O2可以通过胞内信号转导系统诱使WB细胞胞内活性氧产生,这可能与小剂量H2O2调控细胞生物学功能(如增殖、转化)相关。
- 施广璞杜洪震刘子文刘旭吴元德
- 关键词：过氧化氢信号转导
