广东省自然科学基金(04004529)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 相关作者：陈敏生董颀张弋刘世明林晓圳更多>>
- 相关机构：广州医学院广州医学院第二附属医院中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CaMKⅡ信号通路在神经肽Y诱导心肌细胞肥大中的作用被引量：5
- 2008年
- 目的:探讨钙离子/钙调蛋白(Ca2+/CaM)依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在神经肽Y(NPY)诱导下心肌细胞肥大的作用。方法:原代培养SD乳鼠心肌细胞,将细胞分为5组,NPY组:培养液中加入终浓度为100nmol/L的NPY;KN-931组、KN-935组和KN-9310组除加入100nmol/L的NPY外,分别加入CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93,终浓度为1μmol/L、5μmol/L和10μmol/L;对照组:培养液中不加任何刺激药品。加药24h后采用3H-亮氨酸(Leu)掺入法测定各组心肌细胞蛋白质合成速率,Westernblotting测定对照组与NPY组心肌细胞的CaMKⅡδ蛋白表达。结果:经100nmol/LNPY刺激24h后,可明显增加心肌细胞3H-Leu掺入量(P<0.05),KN-93(1～10μmol/L)可以抑制NPY刺激的心肌细胞3H-Leu掺入量的增加,并呈剂量依赖性(P均<0.05);100nmol/LNPY明显增加心肌细胞内CaMKⅡδ蛋白的表达(P<0.05)。结论:Ca2+/CaM依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号途径参与NPY诱导的大鼠心肌细胞肥大反应。
- 林晓圳董颀石永英张弋陈敏生
- 关键词：心肌细胞动物实验
- 神经肽Y对大鼠心肌细胞肌浆网钙的影响
- 2009年
- 目的观察神经肽Y(NPY)刺激对大鼠心肌细胞肌浆网(Sarcoplasmic Reticulum,SR)内钙含量的影响。方法用100nmol·L-1NPY刺激Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞24h,用荧光染料Fluo-4AM负载胞浆钙,并用咖啡因诱导的胞浆钙瞬变(Caffeine-induced Ca2+ transient,CCT)幅度来反映肌浆网内总钙负荷;用荧光染料Fluo-5NAM直接标记心肌细胞肌浆网内游离钙离子。所有钙影像均由LeicaSP2激光共聚焦显微镜记录。结果经100nmol·L-1NPY刺激24h后,心肌细胞肌浆网内游离钙含量明显低于对照组(p<0.01);咖啡因诱导下钙瞬变幅度也低于对照组。结论长时间的NPY刺激可导致肌浆网内钙含量减少。
- 张弋苏涛刘世明董颀陈敏生
- 关键词：心肌细胞肌浆网钙瞬变
- 神经肽Y1受体激动药诱导大鼠心肌细胞肥大的研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨神经肽Y1受体激动药[Leu31,Pro34]NPY在诱导心肌细胞肥大中的作用。方法用不同浓度[Leu31,Pro34]NPY刺激原代培养心肌细胞,采用放射性核素3H-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率。应用荧光定量PCR方法检测[Leu31,Pro34]NPY对培养心肌细胞肥大相关基因ANF、β-MHCmRNA表达的影响。结果[Leu31,Pro34]NPY(10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L)作用心肌细胞24h后可明显增加心肌细胞3H-leu的掺入量(P<0.01),并可诱导心肌细胞β-MHC表达增加(P<0.01),对ANF表达的影响不明显。结论神经肽Y1受体激动药[Leu31,Pro34]NPY可加快细胞蛋白质合成速率、促进心肌细胞β-MHC表达,直接诱导心肌细胞的肥大。
- 张同欣唐发宽董颀刘启才陈敏生
- 关键词：心肌肥大
- Ca^(2+)/CaM依赖的蛋白激酶Ⅱ对神经肽γ诱导心肌细胞内钙重分布的作用被引量：5
- 2008年
- 背景神经肽 Y(NPY)是中枢神经及末梢神经重要的调节剂,作用广泛,包括调节心脏及血管正常的生理活动,并参与许多心血管疾病的发生发展。研究表明,急性的 NPY 刺激可促进心肌细胞钙活动,对心肌产生正性肌力作用。而持续 NPY 刺激对心肌钙活动的影响及其机制,目前还未见报道。目的观察 NPY 刺激对大鼠心肌细胞胞浆钙和肌浆网(SR)内钙分布的影响,以及 Ca^(2+)/CaM 依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在其中的作用。方法用100 nmol/L NPY 刺激 Sprague Dawley 乳鼠心肌细胞24 h,CaMKⅡ特异性抑制剂 KN-93干预。应用荧光染料 Fluo-4 AM 负载胞浆钙;Fluo-5N AM 负载肌浆网内游离钙离子,所有钙影像均由激光共聚焦显微镜记录。应用Western-blot 法和免疫荧光法检测 Ca^(2+)-ATP 酶(SERCA2a)和 ryanodine 受体(RyR_2)两种蛋白的分布及蛋白量的变化。结果经100 nmol/L NPY 刺激24 h 后,与对照组相比,心肌细胞胞浆游离钙浓度明显升高(65.3±6.2 vs50.7±4.1,P<0.05),心肌细胞肌浆网内游离钙含量明显低于对照组(67.6±8.3 vs 85.5±6.0,P<0.05),而KN-93可抑制上述效应;NPY 可增加 SERCA2a 和 RyR_2的蛋白表达(SERCA2a:2.4±0.7 vs 对照组:1.4±0.3;RyR_2:2.3±0.4 vs 对照组:1.2±0.4),KN-93可抑制上述作用。结论 CaMKⅡ通过影响 SERCA2a 和 RyR_2,调控 SR 的钙转运,进而介导 NPY 刺激下的细胞内钙重分布效应。
- 张弋林晓圳刘世明董颀陈敏生
- 关键词：心肌细胞游离钙
- 神经肽Y诱导大鼠心肌细胞内游离钙重分布研究
- 2007年
- 目的:观察神经肽Y(NPY)对大鼠心肌细胞胞浆钙浓度和肌浆网(SR)内钙含量的影响。方法:用100nmol.L-1NPY刺激Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞24h,用荧光染料Fluo-4AM负载胞浆钙,记录静息状态下心肌细胞胞浆钙浓度,并用咖啡因诱导的胞浆钙瞬变幅度来反映肌浆网内总钙负荷;用荧光染料Fluo-5NAM直接标记心肌细胞肌浆网内游离钙离子。所有钙影像均由LeicaSP2激光共聚焦显微镜记录。结果:100nmol.L-1NPY刺激24h后,心肌细胞胞浆游离钙浓度明显高于对照组(P<0.05);心肌细胞肌浆网内游离钙含量明显低于对照组(P<0.01);咖啡因诱导下钙瞬变幅度也低于对照组。结论:24hNPY刺激可导致心肌细胞内游离钙出现空间分布的变化,即胞浆钙浓度增高而肌浆网内钙负荷减少。
- 熊龙根张弋苏涛刘世明董颀陈敏生
- 关键词：心肌细胞肌浆网钙
- 神经肽Y对大鼠心肌细胞Ca2＋-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨神经肽Y对大鼠心肌细胞ca2＋-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMK Ⅱ）的影响.方法 原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为对照组（n=6）和神经肽Y组（n=6）,神经肽Y组加入终浓度为100 nmol/L的神经肽Y,对照组不进行处理.处理15 min后采用同位素32P掺人法检测心肌细胞CaMK Ⅱ活性,免疫印迹法（Western blotting）检测磷酸化CaMK Ⅱ（p-CaMK Ⅱ）蛋白表达;处理24 h后激光共聚焦显微镜下记录心肌细胞静息状态下细胞核Ca2＋-浓度,实时定量PCR检测心肌细胞β-肌球蛋白重链（β-MHC）、心钠素mRNA表达.结果 神经肽Y刺激心肌细胞15 min后,神经肽Y组CaMK Ⅱ活性较对照组明显升高（336 094.80±10 744.61比273 301.50±16 737.99,P＜0.05）,P-CaMK Ⅱ蛋白表达明显增加.神经肽Y刺激心肌细胞24 h后,神经肽Y组心肌细胞胞核Ca2＋-浓度较对照组明显增加（226.87±17.37比84.04±6.50,P＜0.01）;实时定量PCR显示β-MHC、心钠素mRNA表达亦明显增加.结论 神经肽Y通过增加心肌细胞胞核Ca2＋浓度活化CaMK Ⅱ.CaMK Ⅱ可能在神经肽Y诱导心肌细胞肥大效应中起着重要作用.
- 林晓圳董颀张弋陈敏生
- 神经肽Y对大鼠心肌细胞胞浆钙及钙瞬变的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)对静息状态下心肌细胞胞浆钙含量及兴奋-收缩耦联过程中心肌细胞钙瞬变的影响。方法用NPY(100nmol/L)刺激Sprague-Dawley乳鼠心肌细胞24h,用荧光染料Fluo4-AM负载胞浆钙,记录静息状态下心肌细胞胞浆钙浓度,并用场刺激诱发胞浆钙瞬变。所有钙影像均由LeicaSP2激光共聚焦显微镜记录。结果NPY组心肌细胞胞浆钙含量明显高于对照组(P<0.05);场刺激诱导下NPY组心肌细胞胞浆钙瞬变幅度明显高于对照组(P<0.01),NPY组钙瞬变恢复时间明显缩短(P<0.01),钙瞬变上升时间则无显著差别。结论长时间的NPY刺激可显著影响兴奋-收缩耦联过程中钙的动态活动,并导致胞浆内钙含量增加。
- 张弋苏涛刘世明董颀陈敏生
- 关键词：心肌细胞钙瞬变
