“十五”国家科技攻关计划(2004BA717B23)
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
- 相关作者：薛正楷魏泓叶彬魏弘商海涛更多>>
- 相关机构：第三军医大学泸州职业技术学院重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- CYP3A29稳定表达HepG_2细胞株的建立及其硝苯地平代谢活性鉴定被引量：6
- 2009年
- 目的建立稳定表达Bama小型猪CYP3A29的HepG2细胞株。方法通过总RNA提取、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A29的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体PMD18-T上得到重组质粒pMD-3A29;以测序正确的重组质粒pMD-3A29为模板,采用PCR扩增CYP3A29基因并在其3′添加组氨酸标签,扩增产物经BamHI/XhoI双酶切,将带有组氨酸标签的CYP3A29基因定向克隆至pcDNA3.1(+)中,并测序验证;将测序正确的CYP3A29基因通过脂质体转染至HepG2细胞,G418筛选10代,经RT-PCR及Western-blot分析及探针药物硝苯地平对重组细胞进行活性鉴定。结果与HepG2相比,HepG2-CYP3A29细胞株具有极显著的硝苯地平氧化活性。结论成功建立了稳定表达CYP3A29的HepG2细胞株,可用于相关药物代谢研究。
- 薛正楷魏泓商海涛叶彬
- 关键词：巴马小型猪HEPG2WESTERN-BLOT硝苯地平
- CYP3A22稳定表达HepG_2细胞株的建立及其探针药物代谢活性鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的建立稳定表达Bama小型猪细胞色素CYP3A22的HepG2细胞株。方法通过从Bama小型猪肝组织中提取tRNA、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A22的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体pMD18-T上得到重组质粒pMD-3A22;以测序确定的重组质粒pMD-3A22为模板,采用PCR扩增CYP3A22基因并在其3′添加组氨酸标签,扩增产物经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切,将带有组氨酸标签的CYP3A22基因定向克隆至pcDNA3.1(+)中,测序表明,CYP3A22基因真核表达载体正确构建;将测序正确的CYP3A22基因通过脂质体转染至HepG2细胞,G418筛选10代,RT-PCR及Western blot分析,并用探针药物硝苯地平对重组细胞进行进行活性鉴定。结果与HepG2相比,HepG2-CYP3A22细胞株具有极显著的硝苯地平氧化活性。结论成功建立了稳定表达CYP3A22的HepG2细胞株,可用于相关的药物代谢研究。
- 薛正楷魏泓商海涛杨根庆叶彬
- 关键词：SUSHEPG2BLOT探针药物
- 重组细胞色素P4503A4和P4503A22细胞微粒体药物代谢动力学比较研究
- 2014年
- 目的:利用已建立的巴马小型猪细胞色素P4503A22和P4503A4稳定表达重组肝癌细胞株微粒体,分析比较二者的药物代谢动力学特征.方法:以P4503A特异性代谢底物硝苯地平(NF)、睾酮及其抑制剂酮康唑(KCZ)为探针药物,将探针药物与重组P4503A4,P4503A22细胞微粒体在优化的微粒体浓度、药物浓度、孵育时间等条件下进行体外孵育,通过高效液相色谱仪检测其药物代谢(抑制)动力学参数,并将二者进行比较分析.结果:P4503A22的硝苯地平、睾酮的代谢活性均低于P4503A4(p<0.05);酮康唑对P4503A4和P4503A22的硝苯地平代谢具有较强的抑制活性,但酮康唑对P4503A4的抑制活性强于P4503A22(p<0.05).结论:无论是代谢底物或抑制底物活性,重组P4503A22细胞微粒体活性均低于重组P4503A4细胞微粒体活性.
- 薛正楷魏泓
- 关键词：重组细胞微粒体细胞色素P4503A4药物代谢
- CYP3A39基因的克隆、表达及活性研究
- 2013年
- 为研究细胞色素氧化酶CYP3A39的生物学活性,采用RT-PCR方法从巴马小型猪肝组织中克隆CYP3A39基因,与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建重组质粒,转染HepG2细胞,采用G418筛选,以获得稳定表达该基因的细胞株;以CYP3A特异性代谢底物睾酮为探针药物,在体外进行孵育,高效液相色谱仪测定睾酮羟基化产物6β-羟基睾酮(6β-OHT)的产量。结果显示,成功克隆了CYP3A39基因,建立了稳定表达CYP3A39基因的HepG2细胞株,且其具有睾酮代谢活性。
- 薛正楷叶彬魏泓
- 关键词：细胞色素氧化酶基因克隆重组细胞
- 细胞色素P4503A46基因的异源表达及药物代谢活性分析被引量：1
- 2015年
- 为了克隆巴马小型猪细胞色素P4503A46基因,建立P4503A46稳定表达肝癌细胞株(Hep G2-P4503A46),并探究其药物代谢活性,通过RT-PCR从肝组织中钓取基因P4503A46,将基因与真核表达载体pc DNA3.1连接并转染Hep G2细胞,经G418筛选10代,获得稳定表达重组细胞株Hep G2-P4503A46,以P4503A特异性代谢底物硝苯地平(NF)探针药物,将探针药物与重组细胞在优化的细胞浓度、药物浓度、孵育时间等条件下进行体外孵育,通过高效液相色谱仪检测其药物代谢(抑制)动力学参数,并将对照组进行比较分析。结果表明,本研究成功从人Bama小型猪肝组织克隆了P4503A46基因,并通过G418筛选,成功建立了细胞稳定表达株,其硝苯地平代谢活性显著高于阴性对照组(P<0.01);因此,成功克隆、并建立了小型猪P4503A46的稳定表达细胞株(Hep G2-P4503A46),该细胞株具有显著的硝苯地平代谢活性。
- 薛正楷魏弘
- 关键词：基因克隆
- 重组CYP3A46细胞微粒体体外药物代谢动力学分析
- 2014年
- 通过对巴马小型猪CYP3A46重组细胞微粒体体外药物代谢动力学特征比较分析,为巴马小型猪应用于临床前药理试验提供科学依据。分析重组CYP3A4、CYP3A46细胞微粒体药物代谢动力学参数Vmax、Km(S50)、Clint及IC50均表明:CYP3A46的硝苯地平、睾酮的代谢活性及酮康唑的抑制活性均比较接近CYP3A4(P>0.05),CYP3A46是否是CYP3A4的同源酶需要进一步研究确定。
- 薛正楷魏弘
- 关键词：重组细胞微粒体药物代谢
- 2种腺相关病毒介导的增强型绿色荧光蛋白对人成纤维细胞转染效率的研究被引量：4
- 2008年
- 目的比较2种不同腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的增强型绿色荧光蛋白对人皮肤成纤维细胞(human fibroblast,HFB)的转染效率。方法原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数(multiple of in-fection,MOI)为104、105、106转染传2代的人成纤维细胞,流式细胞检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的转染效率,倒置荧光显微镜观察转染后的荧光强度。MTT法检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的毒性。结果腺相关病毒AAV2-EGFP对HFB的转染效率随着MOI增加而增高,MOI为104时转染效率为(7.68±1.18)%,当MOI达到105后,转染效率稳定在(22.16±5.59)%,随着MOI增加,最高至MOI 106转染效率无显著提高。而病毒AAV2/1对于HFB的转染效率在MOI为106转染效率仅为(3.47±0.93)%。2种病毒在转染过程中,细胞生长正常,MTT显示各转染组与未转染组的吸光度值无统计学差异。结论AAV2载体对体外培养的HFB转染效率高于AAV2/1,但2种病毒载体对人皮肤成纤维细胞转染效率均不高,AAV2/1-EGFP对HFB几乎无感染能力。
- 郑钧丰孔永葛良鹏魏泓
- 关键词：腺相关病毒人皮肤成纤维细胞增强型绿色荧光蛋白流式细胞
- 基于重组HepG_2-P4503A4与HepG_2-P4503A46全细胞体外药物代谢比较研究
- 2014年
- 本研究以探针药物硝苯地平（NF）、睾酮（TST）及其抑制剂酮康唑（KCZ）与重组HepG2-P4503A4、HepG2-P4503A46细胞全细胞在优化的重组细胞浓度、药物浓度、孵育时间等条件下进行体外孵育，通过高效液相色谱仪检测其药物代谢（抑制）动力学参数，并将二者进行比较分析。重组HepG2-P4503A46与HepG2-P4503A4细胞的硝苯地平、睾酮的代谢活性无显著差异（P＞0.05）；在0～10 μM的浓度范围内，酮康唑对硝苯地平和睾酮的抑制活性均随酮康唑浓度的增加而增加，且其IC50值均低于1 μM，为nM级，表明酮康唑对二者的硝苯地平代谢具有较强的抑制活性，抑制剂酮康唑对重组HepG2-P4503A46与HepG2-P4503A4细胞的抑制活性差异不显著（P＞0.05）。本研究表明无论是底物代谢或底物抑制活性，重组HepG2-P4503A46细胞均与重组HepG2-P4503A4细胞差异不显著，P4503A46可能为巴马小型猪体内人P4503A4的同源酶。
- 薛正楷罗祎魏泓
- 关键词：细胞色素P4503A4全细胞药物代谢
- 重组细胞色素P4503A4与P4503A39微粒体药物代谢活性比较研究
- 2014年
- 目的:通过考察已建立的P4503A39和P4503A4稳定表达重组细胞株微粒体药物代谢动力学特征,旨在分子水平为巴马小型猪作为临床药物代谢试验动物提供科学依据。方法:制备重组细胞微粒体,以P4503A特异性代谢底物硝苯地平(NF)、睾酮及其抑制剂酮康唑(KCZ)为探针药物,将其与重组P4503A4、P4503A39细胞微粒体在优化的微粒体浓度、药物浓度、孵育时间等条件下进行体外孵育,获得药物代谢(抑制)动力学参数,并将二者进行比较分析。结果:P4503A39和P4503A4体外微粒体药物代谢动力学参数Vmax、Km(S50)、Clint及IC50均表明:P4503A39的硝苯地平、睾酮的代谢活性及酮康唑的抑制活性均显著低于P4503A4(P<0.05)。结论:重组P4503A39细胞微粒体活性显著低于重组P4503A4细胞微粒体活性。
- 薛正楷魏弘
- 关键词：重组细胞微粒体细胞色素P4503A4药物代谢
