南京市卫生局医学科技发展项目(YKK07047)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：夏永祥吴剑锋田福亮更多>>
- 相关机构：南京师范大学江苏省人民医院南京医科大学更多>>
- 发文基金：南京市卫生局医学科技发展项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 化脓性链球菌高毒力株特异基因文库的构建和分析
- 2011年
- 目的构建化脓性链球菌毒力基因文库，克隆和筛选化脓性链球菌高毒力株特异表达基因。方法采用抑制消减杂交方法，以从患者体内分离的链球菌作为毒力菌株，分离毒力基因，将其与PMDl8-T载体进行T／A连接构建文库，将连接产物转化感受态大肠杆菌TOP10进行文库扩增后，将转化菌液涂布于LB固体平板，构建化脓性链球菌毒力株特异基因消减文库，用斑点杂交初步筛选后，将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析。结果酶切产物为100～2000bp，连接效率大于50％，成功构建了化脓性链球菌毒力基因消减文库，所得阳性克隆经斑点杂交筛选后测序，与Genebank数据库进行同源性比对。5个未知序列可能为新基因，7个与已知基因有高度的同源性。结论用抑制消减杂交技术及T／A克隆技术成功构建了化脓性链球菌毒力基因文库；5个未知的新序列可能与化脓性链球菌的高毒力有关。
- 吴剑锋夏永祥
- 关键词：链球菌科抑制消减杂交毒力基因
- 化脓性链球菌高毒力株特异基因文库的构建和分析被引量：1
- 2012年
- 目的构建化脓性链球菌高毒力株特异基因文库,克隆和筛选化脓性链球菌高毒力株特异表达基因。方法采用抑制消减杂交技术(SSH),以从患者体内所分离链球菌为毒力菌株,分离特异表达基因,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物转化感受态大肠杆菌TOP10进行文库扩增后,转化菌液涂布于LB固体平板,构建化脓性链球菌毒力株特异基因消减文库,用斑点杂交初步筛选消减文库后,将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析。结果酶切产物为100～2 000bp,连接效率大于50%,消减组与非消减组差异明显,成功构建了化脓性链球菌毒力株特异基因消减文库,所得阳性克隆经斑点杂交筛选后测序,与Genebank数据库进行同源性比对,5个未知序列可能为新基因,7个与已知基因有高度的同源性。结论用SSH及T/A克隆技术成功构建了人源化脓性链球菌高毒力株基因文库,5个未知的新序列有待于进一步的研究。
- 田福亮吴剑锋夏永祥
- 关键词：抑制消减杂交毒力基因
