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谷氨酰胺和天冬酰胺对CHO细胞生长、代谢及抗体表达的影响被引量：8: 2014年; 以离心换液的批培养为例,通过设计谷氨酰胺和天冬酰胺不同的添加方式来考察两者对CHO细胞生长,代谢及产物表达的影响。结果表明:基础培养基中谷氨酰胺和天冬酰胺不能简单地相互替换,缺失谷氨酰胺或天冬酰胺的基础培养基均不能支持dhfr-CHO细胞的正常生长和产物表达,仅谷氨酰胺和天冬酰胺的浓度同时达到4mmol/L,才能满足细胞生长所需。另外,代谢副产物氨的生成仅与谷氨酰胺和天冬酰胺的加和线性相关,与两者添加比例无关。但适当提高天冬酰胺与谷氨酰胺的比例可提高抗体表达水平,同时减少乳酸的生成。因此,为培养基开发与优化过程中谷氨酰胺和天冬酰胺的添加策略提供了依据,为建立高效的流加培养过程奠定了基础。; 张维燕刘亚亚刘旭平范里谭文松; 关键词：谷氨酰胺天冬酰胺抗体乳酸

Mixture与响应面法结合开发BHK-21细胞无血清悬浮培养基被引量：2: 2015年; 采用Mixture与响应面实验设计相结合的方法开发BHK-21细胞无血清悬浮培养基。在实验室已知配方的6种培养基A-F的基础上,通过Mixture实验筛选出BHK-21细胞无血清培养基的最优组合为A∶B∶C∶D∶E∶F=0∶0∶11∶0∶9∶0。利用响应面法针对培养基中的几种关键组分进行浓度优化,确定谷氨酰胺、酪氨酸、牛血清白蛋白和钙离子的最优浓度分别为3 mmol/L、2.5 g/L、0 g/L和0 mmol/L。该无血清悬浮培养基能很好地支持BHK细胞悬浮生长,培养时细胞最大活细胞密度可达140.21×105个/m L,比商业培养基提高了1.95倍。采用Mixture试验设计和响应面分析法能够在较短的时间内开发出适合BHK-21细胞生长的无血清悬浮培养基,为采用BHK-21细胞大规模工业化生产口蹄疫疫苗奠定了基础。; 汪梁刘旭平谭文松; 关键词：BHK-21细胞

聚乳酸的合成及其修饰的研究进展被引量：10: 2015年; 聚乳酸是由乳酸单体缩聚而成的生物可降解的聚酯材料,可被水解为CO2和H2O,具有生物相容性、无毒、无刺激,可应用为埋植剂、药物载体、超声造影、医用缝合线等。由于乳酸来源广泛且可再生性强,被认为是一种环境友好的聚合物,根据乳酸单体的手性异构,聚乳酸可分为左旋聚乳酸(L-PLA)、右旋聚乳酸(DPLA)、外消旋聚乳酸(D,L-PLA)和内消旋聚乳酸(meso-PLA)等。合成方法可分为乳酸直接缩聚和丙交酯开环聚合,其中直接缩聚可分为溶液聚合和熔融-固相聚合,丙交酯开环聚合可分为阳离子聚合、阴离子聚合、配位插入聚合和有机开环聚合。由于聚乳酸的亲水性差,降解周期难控制等原因,对于聚乳酸的修饰得到越来越多的研究,修饰可按功能分为改性修饰和靶向修饰,改性方法主要有共聚、共混和增塑等,产物如聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA,聚乙二醇聚乳酸PEG-PLA等;靶向修饰将聚乳酸纳米粒表面修饰有相应的配体或抗体,如叶酸、转铁蛋白和抗体等。文章主要针对对聚乳酸的种类、合成以及修饰的聚乳酸纳米粒的研究进展进行总结。; 夏宇驰熊成浩刘煜; 关键词：聚乳酸改性靶向缓释纳米粒

细胞密度和营养供给对H1N1流感病毒产率的影响被引量：4: 2015年; 探究细胞培养生产流感病毒过程中,高细胞密度引起低单位细胞病毒产率(Svy)的原因及找到解决方法。通过增加微载体浓度以及换液操作获得较高的细胞密度;考察了感染时细胞密度(CCI)和病毒感染用维持培养基对病毒产量和单位细胞病毒产率的影响。在12.6 g/L微载体培养过程中,通过换液操作,可获得高细胞密度,达到1.47×107 cells/m L。在CCI为1×107cells/m L条件时,选择合适的维持培养基,其Svy最高达到5.14×103 virions/cell,比同等条件下用DMEM维持培养基的Svy值提高了近一倍。高密度培养MDCK细胞生产流感病毒时,充分考虑不同阶段的培养条件和营养需求,可以提高细胞密度和单位细胞病毒产率,进而提高流感病毒的产量。该研究结果为工业化生产流感病毒疫苗提供了基础数据。; 孔文刚黄锭罗剑周琳婷陈则刘旭平谭文松邓献存; 关键词：MDCK 流感病毒

全人源抗VEGF165单克隆抗体培养工艺的研究被引量：2: 2015年; 为研究一种表达全人源抗VEGF165单克隆抗体（HVAB）的重组DG44细胞的培养工艺。在摇瓶培养阶段利用常见的流加和分阶段温度控制培养的方法,初步确定培养工艺。在生物反应器培养阶段,研究了不同pH范围对DG44细胞生长和单克隆抗体表达的影响。结果表明,通过补料可使HVAB表达量从101 mg/L提高到654 mg/L;通过在生长中期的适当降温,使细胞终活性保持在80%以上;pH控制范围6.4~7.4更适合DG44细胞的生长和HVAB表达。反应器中的抗体表达量为526 mg/L,与对照摇瓶相比降低了11%,为之后的中试研究奠定了工艺基础。; 李昕然刘睿刘方堃刘煜; 关键词：生物反应器

感染时间对MDCK细胞中H1N1甲型流感病毒扩增过程的影响被引量：2: 2015年; 为了研究感染时间TOI对MDCK细胞中H1N1甲型流感病毒扩增过程的影响,以期合理优化以MDCK细胞培养技术为基础的H1N1流感病毒生产工艺,从而提高其生产效率。在不同TOI条件下以H1N1流感病毒感染MDCK细胞,考察TOI对MDCK细胞生长与代谢动力学以及H1N1流感病毒扩增过程的影响。结果表明,当TOI为72 h时,H1N1流感病毒产量最高。然而单位细胞病毒产率却随TOI增大而呈现下降趋势,进一步剖析TOI与感染时细胞密度CCI对单位细胞病毒产率的影响可知,该现象是由细胞状态而非高细胞密度所致。上述研究揭示了由TOI不同导致的细胞状态差异对MDCK细胞中H1N1流感病毒生产效率的重要性。; 黄锭刘旭平范里赵亮谭文松陈则; 关键词：流感病毒 MDCK细胞

微载体浓度与细胞接种密度对ST细胞生长的影响被引量：7: 2016年; 选择合适的微载体浓度、细胞接种密度以提高微载体利用率,优化微载体培养体系猪睾丸细胞(Swine testicle cells)的贴附生长与维持。使用DMEM补加10%血清、LSM(Low serum medium)两种培养基考察微载体浓度、细胞接种密度对细胞生长维持的影响,进而比较ST细胞在不同条件下对Cytodex1微载体的利用率。结果显示,使用LSM在T150方瓶中连续传代培养30d,平均比生长速率为0.626d^(0-1),是DMEM补加10%FBS培养基的1.15倍。选择10×10~5cells/mL细胞接种3g/LCytodex1搅拌瓶体系,最大细胞密度为38.3×10~5cells/mL,微载体利用率上升到58.8%。在灌注培养体系中培养ST细胞15d,最终细胞密度达到36.6×10~5cells/mL,扩增了13.6倍。微载体悬浮培养的使用一方面有利于ST细胞的贴附与生长,实现高密度生长,另一方面增加了微载体的使用成本,选择合适的微载体浓度、细胞接种密度,能够最大化利用微载体与培养基中的营养物质实现细胞的最优生长。; 陈以衡陶姝宇刘旭平谭文松; 关键词：微载体 ST细胞猪瘟病毒细胞密度

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国家高技术研究发展计划(2012AA02A303)