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花生过敏原iso-Ara h 3的克隆、表达和免疫学鉴定被引量：4: 2009年; 采用Touchdown PCR技术从花生cDNA中克隆到花生的过敏原iso-Ara h 3基因,并进行重组蛋白表达,再用Western blot技术鉴定重组蛋白过敏原性。结果显示,构建的pET44a-iso-Ara h 3重组菌能表达iso-Ara h 3蛋白。用8例花生过敏的阳性血清鉴定表明,重组的iso-Ara h 3蛋白血清IgE识别率为12.5%,是一种低过敏原性的过敏原蛋白。; 钟海峰马三梅王永飞邹泽红陶爱林; 关键词：花生基因克隆 H

绿脓杆菌外毒素A常用肽编码基因的克隆与鉴定被引量：5: 2008年; 目的对绿脓杆菌外毒素A(pseudomonas aeruginosa exotoxinA,PEA)的常用肽编码基因进行克隆,为后续的基因改良奠定物质基础。方法以绿脓杆菌基因组DNA为模板,以PEA编码基因特异区段为引物,克隆绿脓杆菌外毒素A常用肽编码基因,经菌落PCR筛选出阳性克隆后再进行DNA测序分析。结果PCR产物克隆后,菌落PCR挑选得到了3个有意义的阳性克隆,DNA测序结果与GenBank中登录的序列之间一致性达99%。结论成功获得3个阳性克隆;选择适当的退火温度,采用Touchdown PCR,能保证顺利扩增出目的基因及保证扩增的特异性。; 刘绮明冯木林陶爱林; 关键词：绿脓杆菌外毒素A 基因克隆阳性克隆

梭子蟹变应原的分离、纯化与鉴定被引量：12: 2007年; 目的：对梭子蟹（Portunus pelogicus（Linnaeus））变应原进行分离,鉴定其主要及次要变应原,采用蛋白纯化技术获取梭子蟹天然的主要变应原并进行鉴定,为标准化变应原疫苗的研制提供理论依据.方法：取常规方法制备梭子蟹浸出液,经SDS-PAGE分离,测定各组分的相对分子量;同时用26例对蟹过敏的病人血清进行Western blot,鉴定其主要及次要变应原;利用快速制备液相色谱（FPLC）纯化技术（凝胶过滤层析和离子交换层析）获取主要变应原并作鉴定.结果：SDS-PAGE显示梭子蟹有19条可辨蛋白带,分子量在13 000～90 000之间,其中主带有9条,分子量是20 900、24 200、27 100、29 200、33 700、38 900、48 700、74 700、89 100;Western blot结果表明,26例蟹过敏患者血清全部呈阳性反应,浸出液中共有5条致敏条带,其中分子量在74 400、48 700的是主要变应原,阳性反应率均为100%;纯化后获取了74400、48700的主要变应原;经过免疫鉴定证实其具有免疫活性.结论：梭子蟹74 400和48 700的变应原为主要变应原,层析技术可以对分子量为74400和48700的主要变应原成分进行纯化.; 赵绮华王锡忠陈丽金李文刘永平; 关键词：梭子蟹变应原 SDS-PAGE WESTERN BLOT FPLC

主要过敏原的物种分布及逐步聚类分析被引量：5: 2007年; 目的综合分析数据库中过敏原的总体状况，在剖析重组过敏原研究领域的共性问题后，对主要过敏原进行聚类分析，为重组过敏原的深入研究指明方向。方法以国际免疫学联合会过敏原命名分会公布的正式过敏原名录表为原始数据，对过敏原的物种分布特点进行分析，并采用Kolmogorov-Smironov检验对过敏原类型分布与相应的物种分布的一致性进行检验；针对氨基酸序列数据，采用ClustalW 1．83及MEGA2等生物信息学软件，辅之以手动缩减，对来自公共数据库中的主要过敏原进行逐步聚类分析，以获得代表性过敏原。结果过敏原物种分布分析显示，510个过敏原归属于9大类共179个物种，不同类型过敏原所涉及的物种数及过敏原例数产生的两类分布相同；用关键词在蛋白质数据库中搜索得到的60条主要过敏原序列，聚类成有着明显差异的7个簇后，逐步聚类缩减到21个氨基酸序列无任何相关的代表性过敏原。结论过敏原的研究是依所涉及的物种不同而逐步平行地展开，没有明显的物种或过敏原的侧重点；依据氨基酸序列的相似性，可以将不同物种来源的主要过敏原缩减到少数代表性过敏原上，从而减少重组过敏原的工作量。; 陶爱林邹泽红赖荷黄柏波张建国李扬彬

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广东省科技计划工业攻关项目(2005B33801002)