国家自然科学基金(30772856)
- 作品数：11 被引量：51H指数：6
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- 青蒿琥酯抑制肝纤维化的作用及其机制被引量：10
- 2015年
- 目的:探讨青蒿琥酯(Art)对人源肝星状细胞(LX-2)的作用。方法:样本为体外培养人源肝星状细胞,实验分为对照组及3个不同剂量的Art(250、350、450μmol/L)组。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测LX-2的增殖情况,HPLC-FLD法检测LX-2上清中神经酰胺的含量,酶消化法测定羟脯氨(Hyp)的含量,Western blot法检测PPAR-γ、p53、Caspase 3蛋白在各组中的表达。结果:与对照组比较,不同浓度青蒿琥酯组对肝星状细胞增殖均有明显抑制作用,且呈剂量-效应关系(P<0.01);青蒿琥酯可提高神经酰胺的含量(P<0.01),同时各给药组羟脯氨酸的含量明显下降(P<0.05,P<0.01);与对照组比较,青蒿琥酯组PPAR-γ、p53、Caspase 3蛋白的表达上调(P<0.01)。结论:青蒿琥酯可能是通过上调神经酰胺,发挥抑制肝星状细胞增殖、促进其凋亡的作用。
- 杜岩李立楠方步武
- 关键词：青蒿琥酯肝纤维化神经酰胺PPAR-ΓP53CASPASE
- 蒿鳖养阴软坚方对免疫性肝纤维化大鼠的治疗作用被引量：8
- 2010年
- 目的探讨蒿鳖养阴软坚方对牛血清白蛋白(BSA)免疫性肝纤维化大鼠的治疗作用。方法以18 mg/mL BSA与等体积的弗氏不完全佐剂混悬液足跖皮下多点注射5次免疫大鼠后,尾静脉攻击注射BSA生理盐水(每次2 mg/0.4 mL递增至3.4 mg/0.4 mL)15次,每周2次,制备肝纤维化模型;按体质量随机区组法分为模型组,蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量(8.2、2.59、0.82 g/kg,2.59 g/kg为临床等效剂量)组,复方鳖甲软肝片组,秋水仙碱组,各治疗组均于造模结束后ig给药(1 mL/100 g),每日1次,连续2个月,对照组和模型组分别ig等体积蒸馏水。酶谱法检测肝组织基质金属蛋白酶-2和-9(MMP-2、MMP-9),荧光法测定血清丙二醛(MDA),放免法检测血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)。结果蒿鳖养阴软坚方各剂量均能显著降低肝组织羟脯氨酸(Hyp)、MMP-2及MMP-9、肝纤维化程度、血清HA、LN、Ⅳ-C水平(P<0.05),其高、中剂量能明显降低血清MDA水平(P<0.05)。结论蒿鳖养阴软坚方对BSA免疫性肝纤维化大鼠具有治疗作用,抗脂质过氧化与降低MMP-2及MMP-9为其部分作用机制。
- 邢伟孔维涵方步武
- 关键词：牛血清白蛋白肝纤维化基质金属蛋白酶-2丙二醛
- 青蒿琥酯对大鼠原代肝星状细胞产生与分泌转化生长因子β1的影响被引量：5
- 2012年
- 目的探讨青蒿琥酯对大鼠原代肝星状细胞（HSC）增殖的影响，从抑制HSC表达、生成和分泌转化生长因子β1（TGFβ1）这—环节探讨其抗肝纤维化的机制。方法分离大鼠HSC于培养瓶中原代培养10d，已处于培养活化状态，将HSC分为实验组和对照组，实验组以青蒿琥酯（终浓度分别为125、150、175、200、225μmol／L）作用24、48、72h。以四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖率，RT-PCR法检测HSC中TGFβ1 mRNA的表达水平，Western blot法分析TGFβ1蛋白水平的变化，酶联免疫吸附法测定培养上清液中TGFβ1含量。样本均数比较采用单因素方差分析，两样本均数比较采用独立样本t检验。结果不同浓度青蒿琥酯对培养活化的HSC均有明显抑制作用，且呈剂量-效应关系和时间-效应关系，作用24h时，125、150、175、200、225μmol／L青蒿琥酯对HSC的抑制率分别为6．06%±1．44％、21．47％±5．57％、42．00％±7．36%、67．12％±4．55％、79．83％±3．67％（P值均〈0．01）。青蒿琥酯作用HSC24h能明显抑制、下调HSC表达TGFβ1 mRNA，呈剂量-效应关系（P〈0．01）；并且明显降低细胞内TGFβ1蛋白及细胞上清液中TGFβ1水平，0、150、175、200μmol／L青蒿琥酯处理组TGFμ1分别为（164．24±6.88）pg／ml、（102．68±4．45）pg／ml、（86．54±5．56）pg/ml、（56．55±5．66）pg／ml（P值均〈0．01）。结论青蒿琥酯呈剂量和时间依赖性地抑制原代分离培养活化的HSC，青蒿琥酯在体外具有抗肝纤维化的作用，与其下调TGFβ1基因及蛋白的表达、翻译与TGFβ1分泌至细胞外等环节有关。
- 王媛方步武彭龙希
- 关键词：青蒿肝硬化转化生长因子Β1青蒿琥酯肝星状细胞
- 测定生物样本中神经酰胺含量的HPLC-FLD法被引量：8
- 2012年
- 目的:建立高效液相色谱-荧光检测器分析生物样本中的神经酰胺。方法:神经酰胺及预处理样本在1 mol·L-1氢氧化钾乙醇溶液中沸水浴反应2 h脱酰基,再与邻苯二甲醛衍生试剂反应60～90 s,采用Kromasil C18(250 mm×4.5 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(90∶10),流速1.0 mL·min-1,荧光检测器的激发波长和吸收波长分别为340 nm和455 nm,进样量50μL。结果:神经酰胺浓度在0.05～6.4μg·mL-1范围内与衍生物峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),回收率为93.2%～107.5%,RSD<7.6%。结论:本方法具有快速、准确、灵敏度高、稳定性好等优点,适用于生物样品中微量神经酰胺的检测。
- 娄婷婷李英娴方步武刘文东董伟林张庆伟薛春兰
- 关键词：生物样本神经酰胺柱前衍生化高效液相色谱法荧光检测质谱分析
- 青蒿琥酯通过上调神经酰胺抑制肝星状细胞增殖并诱导其凋亡被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨神经酰胺与青蒿琥酯抗肝纤维化作用的关系。方法:将培养的肝星状细胞分为实验组和对照组,实验组为不同浓度的青蒿琥酯处理组及神经酰胺处理组。以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测肝星状细胞(HSC)增殖率,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡,Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率,HPLC-FLD法测定青蒿琥酯处理后HSC培养上清中的神经酰胺的含量,均数比较采用单因素方差分析,两样本均数比较采用独立样本t检验。结果:不同浓度青蒿琥酯及神经酰胺对肝星状细胞均有明显抑制作用,且呈剂量-效应关系和时间-效应关系(P<0.01),青蒿琥酯及神经酰胺均能诱导肝星状细胞的凋亡,青蒿琥酯能够上调细胞培养上清液中神经酰胺的含量。结论:青蒿琥酯可能通过上调神经酰胺抑制肝星状细胞的增殖并诱导其凋亡。
- 马淑晶张晓燕徐亚洁方步武
- 关键词：青蒿琥酯神经酰胺肝星状细胞增殖凋亡
- 青蒿琥酯对人源肝星状细胞LX-2增殖、胶原产生以及KLF6表达的影响被引量：8
- 2014年
- 目的:探讨青蒿琥酯(Art)对人源肝星状细胞(HSCs)LX-2增殖的影响以及其抗肝纤维化的作用机制。方法:将肝星状细胞LX-2分为对照组和实验组,对照组为细胞培养液,实验组为不同浓度的青蒿琥酯。应用MTT法检测青蒿琥酯对细胞增殖的影响,比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,酶消化法测定羟脯氨酸(Hyp)含量,Western blotting法测定青蒿琥酯对HSCs内KLF-6蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,青蒿琥酯能抑制肝星状细胞LX-2的增殖(P<0.01),且呈剂量-效应和时间-效应关系;青蒿琥酯各浓度组LDH活性与对照组比较,无显著性差异(P>0.05);青蒿琥酯能降低肝星状细胞LX-2中Hyp含量(P<0.01),且呈剂量-效应关系,并能降低KLF6蛋白的表达(P<0.01)。结论:青蒿琥酯对人源肝星状细胞LX-2有明显的抑制作用,其作用机制是降低胶原的生成以及KLF6蛋白的表达减少,进而抑制肝纤维化的发生。
- 张晓燕马淑晶徐亚洁方步武
- 关键词：青蒿琥酯肝星状细胞肝纤维化
- 青蒿琥酯及神经酰胺对肝星状细胞增殖、胶原生成及MMP13表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨青蒿琥酯及神经酰胺对大鼠原代肝星状细胞(HSCs)增殖以及胶原生成/分泌的影响,从诱导基质金属蛋白酶13(MMP13)表达这一环节探讨其抗肝纤维化的机制。方法:分离大鼠原代HSCs,传代培养活化后,将其分为实验组和对照组,实验组以青蒿琥酯(终浓度为125、150、175、200、225μmol/L)、神经酰胺(终浓度为10μmol/L)作用24、48、72 h。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率,酶消化法测定羟脯氨酸(Hyp)含量,Western blot法测定MMP13的表达。结果:与细胞对照组相比,青蒿琥酯各浓度组及神经酰胺组作用24、48、72 h的吸光度值均降低(P<0.01),且对HSCs的抑制作用呈剂量-效应和时间-效应关系;均能有效降低HSCs上清液中Hyp含量(P<0.01),且呈剂量-效应关系;均可促进MMP13的表达(P<0.01),且呈剂量-效应关系。结论:青蒿琥酯及神经酰胺抗肝纤维化的可能机制是抑制肝星状细胞的增殖,减少胶原的生成/分泌,促进MMP13的表达,从而促进胶原的降解,使细胞外基质减少,抑制纤维化发生。
- 李英娴娄婷婷刘文东方步武
- 关键词：青蒿琥酯神经酰胺肝星状细胞基质金属蛋白酶13
- 神经酰胺对肝纤维化治疗作用的初步研究被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨神经酰胺代谢酶抑制剂油酰乙醇胺(NOE)和丙咪嗪(Imi)对人源肝星状细胞(HSCs)LX-2中神经酰胺含量的影响,并探讨神经酰胺在肝纤维化治疗中的作用。方法:实验分为给药组(NOE组终浓度为50、75、100μmol/L;Imi组终浓度为10、20、30μmol/L),乙醇对照组(乙醇终浓度为1%),DMSO组(DMSO终浓度为1‰)。高效液相法测定HSCs内神经酰胺的含量,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSCs的增殖情况,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性,酶消化法测定羟脯氨酸(Hyp)的含量。结果:与乙醇组比较,NOE各浓度组可显著提高HSCs内神经酰胺的含量(P<0.05);对HSCs的抑制作用呈剂量-效应关系;各浓度组LDH活性与乙醇组比较,无显著性差异(P>0.05);且各浓度组均可显著降低HSCs上清液中Hyp的含量(P<0.05)。30μmol/L Imi作用24 h后,与DMSO组比较,可降低HSCs内神经酰胺的含量,促进HSCs的增殖,并可升高HSCs上清液中Hyp的含量,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:神经酰胺代谢酶抑制剂对HSCs内神经酰胺的含量有显著影响,且神经酰胺可通过抑制HSCs细胞的增殖、减少胶原蛋白的合成来发挥抗肝纤维化作用。
- 徐亚洁张晓燕马淑晶杜岩方步武
- 关键词：神经酰胺肝纤维化丙咪嗪
- 青蒿琥酯对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶表达的影响被引量：6
- 2013年
- 目的:研究青蒿琥酯对肝纤维化大鼠肝组织中基质金属蛋白酶(MMPs)及Ⅰ型胶原表达的影响,探讨青蒿琥酯对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:Wistar大鼠随机分为6组:正常组、模型对照组、青蒿琥酯低、中、高剂量组(3.2 mg/kg、9.6 mg/kg、28.8mg/kg)及马洛替酯阳性对照组(53.1 mg/kg),每组10只大鼠。牛血清白蛋白(BSA)免疫性大鼠肝纤维化模型制备成功后,各组按相应药物剂量分别开始治疗,正常组和模型组给予同体积蒸馏水,每日1次,连续2个月至实验结束。酶谱法测定肝组织MMP-2,MMP-9的表达;Western blotting检测肝组织Ⅰ型胶原与MMP-13的表达。结果:(1)肝组织Ⅰ型胶原的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Ⅰ型胶原含量增高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织Ⅰ型胶原含量均降低(P<0.05)。(2)肝组织基质金属蛋白酶的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织MMP-2、MMP-9表达增高(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织MMP-2、MMP-9表达均降低(P<0.01),MMP-13表达升高(P<0.01)。结论:青蒿琥酯可能通过降低肝组织MMP-2、MMP-9的表达,增加MMP-13的表达,从而发挥抗肝纤维化的作用。
- 刘文东李英娴娄婷婷高思楠方步武
- 关键词：青蒿琥酯肝纤维化基质金属蛋白酶
- 青蒿琥酯在大鼠体内外抗肝纤维化的作用被引量：11
- 2016年
- 目的观察青蒿琥酯(artesunate,Art)对大鼠肝纤维化的治疗作用及其对大鼠原代肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法建立牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)免疫性肝纤维化大鼠模型,分为正常对照组、模型对照组及青蒿琥酯低、中、高剂量组;给药组分别给予不同剂量的青蒿琥酯灌胃,正常和模型对照组给予同体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续2个月;酸水解法检测其肝组织胶原蛋白含量,测定血清白蛋白(albumin,Alb)、丙氨酸氨基转移酶(alanine amino transferase,ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino transferase,AST)水平;苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE染色)和胶原染色法对肝组织切片染色。分离大鼠HSCs,以培养活化HSCs。用MTT法测定HSCs增殖率,消化法测定细胞培养上清液中的羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,Western blot和RT-PCR法检测HSCs p53表达。结果与正常对照组相比,模型对照组大鼠血清Alb水平降低(P<0.05),ALT、AST水平增高(P<0.05);与模型对照组相比,青蒿琥酯低、中、高剂量组血清AST水平降低(P<0.05),大鼠肝组织胶原蛋白含量降低(P<0.05)。青蒿琥酯对培养活化的HSCs有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05);青蒿琥酯作用24 h后,HSCs分泌羟脯氨酸减少(P<0.05),p53 mRNA表达增加(P<0.05)。结论青蒿琥酯在大鼠体内、体外均有抗肝纤维化作用,该作用与其增加HSCs p53的表达有关。
- 彭龙希高思楠王媛闫静李艳芸方步武
- 关键词：青蒿琥酯肝纤维化牛血清白蛋白肝星状细胞P53
