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教育部科学技术研究重点项目(206132)

作品数：15 被引量：50H指数：5
相关作者：程振涛岳筠周碧君徐春志李永明更多>>
相关机构：贵州大学贵阳医学院江苏农牧科技职业学院更多>>
发文基金：教育部科学技术研究重点项目贵州省科技攻关计划贵州省优秀科技教育人才省长资金项目更多>>
相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>

文献类型

  • 15篇中文期刊文章

领域

  • 15篇农业科学
  • 3篇生物学
  • 1篇轻工技术与工...

主题

  • 14篇羊痘
  • 14篇山羊
  • 14篇山羊痘
  • 13篇痘病
  • 13篇痘病毒
  • 13篇羊痘病
  • 13篇羊痘病毒
  • 13篇山羊痘病
  • 13篇山羊痘病毒
  • 13篇病毒
  • 4篇基因
  • 4篇P32基因
  • 3篇克隆
  • 2篇原核表达
  • 2篇片段
  • 2篇抗体
  • 2篇克隆与序列分...
  • 2篇基因片段
  • 2篇PCR
  • 1篇调节免疫

机构

  • 14篇贵州大学
  • 1篇贵阳医学院
  • 1篇江苏农牧科技...

作者

  • 13篇岳筠
  • 13篇程振涛
  • 12篇周碧君
  • 11篇徐春志
  • 9篇李永明
  • 8篇文明
  • 7篇许乐仁
  • 4篇罗阿东
  • 3篇王开功
  • 2篇唐源
  • 2篇周思旋
  • 1篇史开志
  • 1篇江楠
  • 1篇刘忠伟
  • 1篇葛竹兴
  • 1篇秦枫
  • 1篇鲍娟
  • 1篇陈军义
  • 1篇朱善元
  • 1篇李俊

传媒

  • 3篇黑龙江畜牧兽...
  • 2篇贵州农业科学
  • 2篇山地农业生物...
  • 2篇中国预防兽医...
  • 1篇中国兽医学报
  • 1篇中国兽医杂志
  • 1篇江苏农业科学
  • 1篇畜牧与兽医
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇中国兽医科学

年份

  • 2篇2009
  • 9篇2008
  • 4篇2007
共 15 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
山羊痘病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：13
2009年
利用DNAStar分析了GenBank中所有8株羊痘病毒全基因序列,选取位于山羊痘病毒(AY077835)基因组gp064区域约64bp的基因片段,设计并合成了一对PCR引物和一条TaqMan-MGB探针,建立了FQ-PCR和标准曲线,并利用该方法对山羊痘临床皮肤痘疹材料和人工感染动物材料进行GPV核酸检测。结果表明,构建的FQ-PCR具有良好的敏感性、特异性、稳定性和临床应用性。该方法的建立为山羊痘临床快速高效地诊断和山羊痘病毒感染羊只的发生、发展及转归研究提供了一种有效的手段。
程振涛岳筠李永明许乐仁王开功周碧君陈军义李俊江楠
关键词：山羊痘病毒荧光定量PCR
山羊痘病毒P32基因重组表达载体的构建及原核表达被引量：2
2007年
以含山羊痘病毒贵州LD株P32基因的质粒pMD18-T-P32/LD为模板,应用PCR方法扩增P32基因,将该基因片段克隆至原核表达载体pET-28a,构建了重组表达载体pET-28a-P32/LD,转化大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,有分子量约为35.5 ku的融合蛋白获得表达,与预期结果相符;Western-Blotting证实该表达蛋白具有免疫学活性。P32蛋白的成功表达为山羊痘基因工程疫苗的研制及诊断方法的建立奠定了基础。
程振涛岳筠徐春志李永明许乐仁文明周碧君
关键词：山羊痘病毒P32基因原核表达
山羊痘病毒P32基因的克隆、测序及在原核细胞表达被引量：1
2008年
为比较山羊痘病毒贵州分离株P32基因与国内外分离株的关系,并获得P32蛋白,应用PCR方法从贵州山羊痘病毒分离株的核酸样本中扩增出P32基因片段,将PCR产物克隆至pMD18-T载体,对重组质粒进行了基因序列测定。将测定的P32基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank中相应序列作比较,同源性分别达到99.4%和98.4%,表明山羊痘病毒的P32基因具有高度保守性。将P32基因克隆至原核表达载体pET-28a,成功构建重组表达质粒pET-28a-P32/LD,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测显示,重组细菌在35.5 kDa处表达一条特异性的蛋白带,而阴性对照未见这条蛋白带;Western-Blotting检测证实,这条蛋白带能与山羊痘高免血清反应而显示其免疫学活性。
程振涛岳筠徐春志李永明许乐仁文明周碧君
关键词：山羊痘病毒P32基因基因克隆原核表达
山羊痘病毒ITR基因片段的克隆与序列分析被引量：1
2008年
应用PCR方法扩增山羊痘病毒QL、LD、Y和B株ITR基因片段,插入pMD18-T载体,转化DH5α感受态细胞,提取重组载体经PCR和酶切鉴定后测序,并与GenBank上8株羊痘病毒相应序列进行同源性分析。结果经PCR扩增,4株病毒均可得到一条均一的DNA片段,该片段可被内切酶AluⅠ特异酶切,而且该PCR的DNA模板最小检出量为24.40pg。经测序,该基因片段长度为289bp;序列比较发现,4株病毒ITR片段与GenBank上2株山羊痘病毒的核苷酸与氨基酸序列同源性均为100%,与3株绵羊痘病毒分别为98.2%和96.5%,与3株牛疙瘩皮肤病病毒为98.2%～99.3%和96.5%～97.7%。这表明ITR基因片段在羊痘病毒属中较为保守,可以针对ITR基因建立羊痘病毒的PCR检测方法。
王开功岳筠徐春志程振涛周思旋罗阿东周碧君许乐仁
关键词：山羊痘病毒PCR
山羊痘病毒P32基因的PCR-RFLP分析被引量：1
2008年
根据羊痘病毒基因组设计引物,建立了检测羊痘病毒P32基因的PCR方法,并扩增了疫苗毒株、标准毒株、贵州分离株的P32基因;应用生物学软件对山羊痘和绵羊痘病毒P32基因的酶切位点进行分析,选择合适的限制性内切酶对P32基因进行酶切。结果表明,以SDS-蛋白酶K法提取的病毒DNA在含量和纯度上均高于Trizol法,更有利于PCR扩增;所建立的PCR方法对细胞感染物及山羊痘疹样本均能扩增出特异性的目的DNA条带;软件分析选择限制性内切酶Hinf I对羊痘病毒P32基因的PCR产物进行酶切鉴定,可以有效区分山羊痘病毒和绵羊痘病毒。
岳筠周碧君程振涛徐春志王开功李永明
关键词：山羊痘病毒PCR方法P32基因
山羊痘免疫效果检测被引量：4
2007年
应用山羊痘正向间接血凝诊断试剂对贵州省和广西柳州市共604头份山羊血清进行了抗体检测。同时对3种山羊痘疫苗进行了免疫效果比较，测定了山羊痘疫苗的免疫抗体消长规律、免疫保护期，对皮内、皮下、肌肉接种疫苗的免疫效果进行了比较。结果表明：山羊痘弱毒疫苗免疫后7～8d可检测出抗体，皮内、皮下注射接种方式的免疫效果优于肌肉注射。制定了对山羊痘病的免疫程序，使用B组疫苗，采用皮内注射方式对山羊进行免疫，产生抗体的时间较快，水平较高，维持时间可达196d以上。
刘忠伟周碧君虞天德
关键词：山羊痘疫苗抗体免疫检测
山羊痘病毒SYBR Green I荧光PCR检测方法的建立被引量：7
2008年
为建立山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)的SYBR Green I荧光PCR方法,根据GPV的反向末端重复序列(Inverted Terminal Repeat,ITR)的核苷酸序列设计引物。以此引物和山羊痘皮肤痘疹提取的DNA为模板,建立并优化SYBR Green I模式荧光PCR检测GPV的ITR基因的方法,并与普通PCR方法进行敏感性比较。结果表明,此次建立的检测GPV的SYBR Green I荧光PCR方法能检测出7×102拷贝数的DNA模板,此法比文献报道的普通PCR法更敏感、准确、快速。
罗阿东唐源文明岳筠程振涛徐春志
关键词：山羊痘病毒实时定量PCR熔解曲线
三七总皂苷的质量控制研究被引量：3
2008年
郑义葛竹兴朱善元秦枫
关键词：三七总皂苷心脑血管疾病活性成分凝血时间药理作用调节免疫
山羊痘病毒不同基因片段PCR诊断方法的研究被引量：6
2008年
程振涛徐春志岳筠李永明许乐仁周碧君文明
关键词：山羊痘病毒基因片段TERMINALGENBANK接触性传染病
感染细胞与痘疹样本中山羊痘病毒PCR检测方法的建立被引量：2
2008年
比较Trizol法和SDS-蛋白酶K法提取山羊痘病毒DNA后,根据山羊痘病毒P32基因设计引物,建立了能检测感染细胞培养物与组织病料的PCR方法,结果显示以SDS-蛋白酶K法提取的病毒DNA在含量与纯度上均明显高于Trizol法;该PCR方法对山羊痘标准毒株细胞感染物能扩增出特异性的DNA条带,最小检出量为40.625ng;且能检出山羊痘疫苗毒Y株、贵州现场分离毒LD株和QL株的细胞感染物以及山羊痘疹样本中病毒DNA,而对鸡痘疫苗毒株感染细胞、正常细胞及正常山羊皮肤均为阴性反应。这些结果表明,建立的PCR方法具有特异性强、可靠性好、灵敏度高等特点,可用于山羊痘的临床诊断。
徐春志周碧君岳筠程振涛史开志鲍娟李永明文明
关键词：山羊痘病毒PCR
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