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SYBR Green实时定量PCR检测人原发脑胶质瘤中REV3和REV7基因的表达被引量：1: 2008年; 目的运用实时定量PCR检测跨损伤修复基因REV3和REV7在人脑原发脑胶质瘤组织中的表达水平,探讨其和肿瘤级别之间的关系。方法采用SYBR Green实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测跨损伤修复基因REV3和REV7的mRNA在85例原发胶质瘤(Ⅱ级20例、Ⅲ级20例和Ⅳ级45例)和14例正常脑组织中的表达水平,统计学分析表达水平和肿瘤级别之间的关系。结果与正常组织相比,REV3和REV7在各病理级别胶质瘤中均表达上调(P<0.05);并且REV3在Ⅳ级胶质瘤中的表达比在Ⅱ级和Ⅲ级中都要高(P<0.05)。秩相关分析表明:REV3的表达量与胶质瘤病理分级呈正相关性(r=0.454,P<0.001)。结论REV3和REV7在胶质瘤组织中均高表达,而且REV3表达水平和恶性程度有密切联系。; 奚才华王慧博赵世光张舒羽卢大儒胡锦; 关键词：脑胶质瘤实时定量PCR SYBR

SYBR Green实时定量PCR检测人脑原发胶质瘤中LATS1和LATS2基因的表达被引量：5: 2006年; 目的:运用实时定量PCR检测肿瘤抑制基因LATS1和LATS2的mRNA在人脑原发胶质瘤组织中的表达情况,并进一步分析其表达变化与临床资料之间的关系。方法:建立SYBR Green实时定量PCR的检测方法;通过标准曲线法对肿瘤抑制基因LATS1和LATS2的mRNA在30例原发胶质瘤(WHO分级:Ⅱ级10例,Ⅲ级10例,Ⅳ级10例)和10例正常脑组织中的表达进行定量检测;统计学分析不同级别胶质瘤及正常脑组织间的表达差异,并进一步结合临床资料分析不同性别和不同年龄组的表达差异。结果:与正常脑组织相比,在各病理级别胶质瘤中LATS1和LATS2的mRNA表达均下调(P<0.05),但胶质瘤不同级别组之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。LATS1和LATS2在不同性别组和年龄组胶质瘤中的表达差异也无统计学意义(P>0.05)。结论:①成功地建立了SYBR Green实时定量PCR检测LATS1和LATS2基因表达的方法;②胶质瘤中LATS1和LATS2的mRNA表达水平均低于正常脑组织,但不同病理分级间的表达无明显差异。; 姜政胡锦李新钢卢大儒江玉泉; 关键词：神经胶质瘤实时定量聚合酶链反应 SYBR

DNA跨损伤修复基因在人脑胶质瘤中的表达: 2009年; 目的研究DNA跨损伤修复基因Revl、Polξ（Rev3和Rev7）、Polη、Polι、和Polk在脑胶质瘤中的表达，探讨这些基因的表达水平与脑胶质瘤发生、发展的关系。方法利用SYBRGreen实时定量PCR技术检测DNA跨损伤修复基因在85例原发脑胶质瘤病人和14名正常脑组织中的mRNA表达情况。结果与正常脑组织相比，Revl基因在Ⅳ级胶质瘤中表达上调（△Ct为5．55±1．12，P〈0．05）；Rev3基因在Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤中表达上调（△Ct分别为5．46±1．35、5．13±1．53和6．14±1．10，均P〈0．05）；Rev7基因在Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤中表达上调（△Ct分别为5．88±0．82、5．41±1．43和5．56±0．96，均P〈0．05）；Polη基因在Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级胶质瘤中表达上调（△Ct分别为5．97±1．15、5．83±1．03和6．34±1．0l，均P〈0．05）；Polι基因在Ⅱ～Ⅳ级胶质瘤中表达上调（ACt分别为6．67±1．17、6．33±1．39和7．03±1．06，均P〈0．05）；PolK基因在Ⅳ级胶质瘤中表达上调（△Ct为5．25±1．58，P〈0．05）。Spearman秩相关分析表明，跨损伤修复基因Revl、Rev3、Polm、PolL和PolK的表达量与肿瘤病理学分级呈正相关（均P〈0．01）。结论DNA跨损伤修复基因可能与胶质瘤的发生、进展相关。; 奚才华胡锦王慧博张舒羽卢大儒; 关键词：人脑胶质瘤

肿瘤侵袭相关基因EMP3、PCDH-γ-A11在脑胶质瘤中的表达研究被引量：1: 2007年; 目的探讨肿瘤侵袭相关基因EMP3和PCDH-γ-A11的mRNA在原发人脑胶质瘤组织中的表达情况,分析其表达变化与胶质瘤恶性程度的关系。方法分别应用传统的RT-PCR和SYBR Green实时定量PCR检测方法检测EMP3和PCDH-γ-A11基因mRNA在30例原发胶质瘤(WHO分级:Ⅱ级10例,Ⅲ级10例,Ⅳ级10例)和10例正常脑组织中的表达情况。统计学分析两个基因在胶质瘤和正常脑组织间的表达差异,并进一步结合临床资料分析不同分级、不同性别和不同年龄组间的表达差异。结果在各级别胶质瘤中EMP3和PCDH-γ-A11的mRNA与正常脑组织相比均表达下调,并具有显著意义(P<0.01);EMP3在Ⅱ级和Ⅳ级及Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤间的表达也存在统计学差异(P<0.05);PCDH-γ-A11在Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ级胶质瘤相互之间的表达无统计学差异(P>0.05)。结论各级别胶质瘤中EMP3和PCDH-γ-A11的mRNA表达均显著低于正常脑组织,并随胶质瘤恶性程度的增加表达量逐渐降低。EMP3基因的表达下调与胶质瘤的恶性程度密切相关。; 姜政李新钢胡锦卢大儒栗超越江玉泉; 关键词：神经胶质瘤

靶向血管内皮生长因子和神经生长因子的shRNA真核表达载体的构建与鉴定被引量：1: 2006年; 目的利用RNA干扰(RNAi)技术,构建靶向血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)双基因的短发夹RNA(short hairpin,shRNA)真核表达载体用于胶质瘤基因治疗。方法分别设计并体外合成靶向基因VEGF、NGF的特异性编码shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经BglⅡ-HindⅢ酶切线性化的pSUPER质粒H1启动子下游,构建shRNA重组质粒,进而脂质体介导瞬时转染胶质瘤细胞系U251,半定量RT-PCR检测VEGF mRNA、NGF mRNA表达。结果重组质粒经过酶切鉴定和测序,插入片段的序列大小、位点和方向均与已合成的寡核苷酸的序列完全一致,在瞬时转染胶质瘤细胞后下调了VEGF mRNA、NGF mRNA的表达。结论成功构建靶向基因VEGF、NGF的shRNA真核表达载体,为进一步应用RNAi技术,研究其对胶质瘤的抑制作用奠定基础。; 王元元胡锦董万利蒋觉安; 关键词：RNA干扰血管内皮生长因子神经生长因子重组质粒

脑胶质瘤中SLC5A8和TMS1/ASC基因启动子区甲基化及mRNA表达的研究被引量：9: 2007年; 目的研究肿瘤抑制基因SLC5A8和 TMS1/ASC 在胶质瘤中的启动子区甲基化和mRNA 表达情况,探讨其与临床情况之间的关系。方法通过甲基化聚合酶链反应(MSP)检测SLC5A8和 TMS1/ASC 基因在88例胶质瘤组织、10例正常脑组织及胶质瘤细胞株 U251和 SHG-44中的 DNA 甲基化情况;通过传统逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量 PCR 检测 SLC5A8和TMS1/ASC 的 mRNA 表达情况;检测去甲基化试剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用于细胞株后,对基因 DNA 甲基化和 mRNA 表达的影响。结果在88例胶质瘤中,SLC5A8启动子区的甲基化发生率为70.45%(62/88),其甲基化率随胶质瘤恶性程度的增加而增高;TMS1/ASC 启动子区的甲基化发生率为51/88(57.95%),其甲基化率随胶质瘤恶性程度的增加而降低。10例正常脑组织中均未检测到 SLC5A8和 TMS1/ASC 基因的甲基化。在各级别胶质瘤中 SLC5A8和 TMS1/ASC 的 mRNA 与正常脑组织相比均表达下凋,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。在 U251和 SHG-44胶质瘤细胞株中均检测到 SLC5A8和 TMS1/ASC 基因的甲基化,去甲基化试剂5-Aza-CdR 均能重新激活 SLC5A8和TMS1/ASC 基因的表达。结论 SLC5A8和 TMS1/ASC 基因在胶质瘤中的启动子区甲基化导致其mRNA 表达下调,其甲基化的发生率及 mRNA 表达与胶质瘤的恶性程度密切相关。; 姜政李新钢胡锦卢大儒周伟江玉泉栗超越; 关键词：神经胶质瘤 DNA甲基化

靶向EphB4基因的shRNA真核表达载体的构建与鉴定: 2008年; 目的构建和鉴定靶向EphB4基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体。方法体外合成一对互补并编码靶向EphB4基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经Bbs I酶切线性化的psiRNA人H1启动子质粒载体中,经酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确;采用脂质体转染的方法将构建的重组载体导入人恶性胶质瘤细胞系U251中,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染细胞EphB4mRNA的表达变化。结果经酶切和测序证明,pH1-EphB4-shRNA序列正确;转染pH1-EphB4-shRNA载体后,U251细胞EphB4基因的电泳条带明显减弱,在磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)参比下较空载体组下降60%。结论靶向EphB4基因的shRNA真核表达载体构建成功,转染U251细胞之后获得稳定表达,并可特异性沉默EphB4基因的表达,为进一步研究EphB4基因在恶性胶质瘤的发生发展中的作用提供了实验基础。; 张艳荣董万利胡锦惠国桢; 关键词：EPHB4 短发夹RNA 恶性胶质瘤

靶向IGF-1基因的siRNA抑制胶质瘤生长的体内外实验研究被引量：2: 2006年; 目的观察靶向IGF-1基因的小干扰RNA（siRNA）在体内和体外对胶质瘤生长的抑制作用。方法采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹测定干扰后IGF-1的表达水平；采用Transwell体外侵袭试验进行细胞体外的侵袭力分析；用流式细胞仪检测细胞凋亡率；应用裸鼠成瘤实验测定IGF-1基因表达下调后胶质瘤C6细胞在体内致瘤能力的改变。结果靶向IGF-1基因的siRNA可以有效抑制IGF-1基因的表达，使IGF—1 mRNA表达减少50％～80％，蛋白表达减少60％，流式细胞术检测细胞凋亡率明显提高（P〈0．01），降低了在裸鼠体内成瘤的能力。结论siRNA介导的IGF-1基因下调可明显抑制胶质瘤细胞的生长。IGF-1可以作为胶质瘤基因治疗的一个新的靶点。; 王元元董万利胡锦金由辛惠国桢; 关键词：胰岛素样生长因子-1 胶质瘤基因疗法

体外实验观察小分子干扰RNA对胶质瘤U251细胞血管内皮生长因子表达的影响被引量：1: 2007年; 目的:血管内皮生长因子能促进血管内皮细胞增生和血管形成,而RNA干扰技术可高效特异地导致转录后基因沉默现象。实验针对人血管内皮生长因子基因化学合成小分子干扰RNA,观察其对胶质瘤U251细胞的体外干扰效应。方法:实验于2006-09/2007-02在中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室完成。①实验材料:人类U251胶质母细胞瘤细胞株由上海市肿瘤研究所朱景德教授惠赠。非特异性小分子干扰RNA,绿色荧光标记的FAMnegativecontrolsiRNA(上海吉玛公司)。②实验方法:选择基因序列号为NM0033761的血管内皮生长因子基因cDNA序列上的3个位点设计3条不同序列的小分子干扰RNA,并应用BLAST技术排除其他同源基因。采用脂质体法转染U251细胞,以200nmol/L进行转染,以转染非特异性小分子干扰RNA作为阴性对照组,以未加入小分子干扰RNA作为空白对照组。48h后RT-PCR筛选最佳小分子干扰RNA,将抑制率最高的小分子干扰RNA再分别按50,100,200,300nmol/L进行转染。③实验评估:荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR法半定量检测浓度梯度下小分子干扰RNA对U251细胞血管内皮生长因子mRNA表达的抑制效果。结果:①荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率:镜下可见胞质内的绿色荧光,同一视野下细胞核呈蓝染,转染效率达95%以上。②RT-PCR检测血管内皮生长因子mRNA的表达水平:不同序列的小分子干扰RNA以200nmol/L转染细胞后血管内皮生长因子mRNA的表达水平均有所下调,以小分子干扰RNA1转染组最为明显(P<0.01),抑制率大于70%,选为最佳特异性小分子干扰RNA。U251细胞转染50,100,200,300nmol/L的小分子干扰RNA148h后,随着转染浓度的升高,小分子干扰RNA1的抑制效果逐渐增强,各浓度转染组血管内皮生长因子mRNA的表达水平可下调16%～73%。结论:以血管内皮生长因子为靶基因、化学修饰合成的特异; 王佳佳胡锦董万利金由辛; 关键词：小分子干扰RNA 血管内皮生长因子胶质瘤基因治疗

靶向胰岛素样生长因子受体的RNA干扰技术抑制胶质瘤生长被引量：1: 2006年; 目的研究靶向胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的小干扰RNA(siRNA)对胶质瘤生长的抑制作用。方法逆转录-聚合酶链反应和W estern b lot测定RNA干扰后IGF-1R表达水平;采用Transwell体外侵袭实验进行细胞体外的侵袭力分析;流式细胞仪检测细胞凋亡率;裸鼠成瘤实验测定IGF-1R基因表达下调后胶质瘤C6细胞在体内致瘤能力的改变。结果靶向IGF-1R基因的siRNA可以有效抑制IGF-1R基因的表达,使IGF-1R mRNA表达减少60%,蛋白表达减少50%;流式细胞术检测到细胞凋亡率明显升高(P<0.01);裸鼠体内成瘤能力降低。结论siRNA介导的IGF-1R基因下调能明显抑制胶质瘤细胞生长。; 胡锦王元元董万利史毅金由辛惠国桢; 关键词：小干扰RNA 胰岛素样生长因子-1受体胶质瘤基因疗法

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