博士科研启动基金(SWUB2008072)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：西南大学重庆大学更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 球孢白僵菌T-DNA突变体库的构建及高温和高渗敏感型突变体的筛选(英文)被引量：5
- 2009年
- 【目的】筛选对高温和高渗等逆境胁迫敏感的球孢白僵菌T-DNA随机插入突变体,并克隆相关基因,为研究杀虫真菌适应逆境的分子机理奠定基础。【方法】利用逆境胁迫的方法从球孢白僵菌的T-DNA随机插入突变库中筛选对高温和高渗敏感的突变体,进而利用YADE(Y-shaped adaptor dependent extension)技术克隆相关基因。【结果】筛选得到5个对高温和高渗敏感的突变体。其中2个(212和2550)对高温敏感,在32℃下生长完全受抑;其它3个突变体对高渗胁迫敏感。突变体212的分生孢子对逆境胁迫的抗性也显著降低。与野生菌株相比,分生孢子经紫外线、高温和氧胁迫后,其存活率分别下降了23%、52%和21%。突变体212和2737对桃蚜的致死率(接种浓度为1×107个孢子/mL)分别下降了12%和40%。T-DNA侧翼序列分析显示,突变体212和2737的2个功能未知基因的编码框被T-DNA随机插入阻断,而其它3个突变体的T-DNA插入位点位于非编码区域。【结论】本研究结果表明,利用T-DNA随机插入突变筛选高温与高渗等逆境相关突变体,进而克隆相关基因是一种行之有效的方法。
- 罗志兵张永军金凯马金成王芯裴炎
- 关键词：球孢白僵菌插入突变高温
- 球孢白僵菌高渗适应性相关基因Bbmpd的克隆与表达分析被引量：4
- 2010年
- 【目的】克隆与球孢白僵菌(Beauveria bassiana)的高渗适应性相关基因,并对其功能进行分析,以揭示球孢白僵菌对高渗等逆境适应的分子机理。【方法】利用YADE法克隆T-DNA的侧翼序列并进行基因组步行,获得突变基因的全长及上游序列;利用RT-PCR技术分析突变基因的表达特性以及与Bbhog1的关系;采用同源重组技术敲除Bbmpd基因。【结果】克隆得到插入突变基因及其上、下游序列全长3037bp。该基因与编码球孢白僵菌的1-磷酸甘露醇脱氢酶基因相似性为98%。Bbmpd的表达受高渗环境(0.8mol/L NaCl)的诱导,受Bbhog1信号途径的激活调节,Bbhog1缺失导致Bbmpd表达下调。Bbmpd缺失突变体在高渗胁迫下的生长受到明显抑制。Bbmpd缺失不影响球孢白僵菌在查氏培养基上的生长和产孢。【结论】由T-DNA突变体克隆了编码球孢白僵菌1-磷酸甘露醇脱氢酶基因Bbmpd,该基因的表达受高渗环境的诱导和Bbhog1的调控,与球孢白僵菌高渗适应性相关。
- 罗志兵金凯张永军武增强裴炎
- 关键词：球孢白僵菌
