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雷公藤甲素对Wistar大鼠免疫毒性相关基因表达的影响被引量：6: 2012年; 目的应用基因芯片技术研究雷公藤甲素对大鼠胸腺全基因表达谱的影响,从基因水平探讨雷公藤甲素引起免疫抑制毒性的潜在分子作用机制。方法 Wistar大鼠,连续28 d ig给予雷公藤甲素0.5和1.0 mg·kg-1以及环孢素A 20 mg·kg-1(阳性对照),进行T细胞依赖抗体反应检测、免疫器官组织病理学检查和胸腺组织基因芯片实验。结果与溶媒对照组相比,雷公藤甲素0.5和1.0 mg·kg-1组和环孢素A组大鼠血清中T细胞依赖抗体应答水平均受到了显著抑制。组织病理学检查发现,雷公藤甲素1.0 mg·kg-1使胸腺皮髓质淋巴细胞数量轻度减少,环孢素A使胸腺髓质皮质化。基因芯片检测结果显示,雷公藤甲素1.0 mg·kg-1给药第7天引起422个显著差异表达基因,其基因功能主要涉及DNA依赖的细胞转录调节、核转运、微管蛋白复合体装配、核小体装配、线粒体DNA转录、氨基酸转运和线粒体DNA复制等。KEGG通路分析发现差异表达基因主要参与移植排斥和自身免疫性疾病等多个与免疫抑制相关的基因表达调控途径。结论雷公藤甲素1.0 mg·kg-1能够引起大鼠胸腺基因表达谱的显著性改变,其免疫毒性的主要机制可能是通过下调免疫毒性相关基因的表达,抑制淋巴细胞的增殖。; 耿兴超洪敏宋莹林志张亮李波王军志; 关键词：雷公藤内酯胸腺

超高效液相色谱-串联质谱法测定亚硫酸氢钠穿心莲内酯在大鼠肝微粒体中的含量被引量：2: 2012年; 目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠肝微粒体中亚硫酸氢钠穿心莲内酯。方法:以肝微粒体孵育液为基质,通过添加标准溶液的方法配制含亚硫酸氢钠穿心莲内酯和内标物大豆苷元的样品,选用甲醇为沉淀剂,经离心除去肝微粒体孵育液中的蛋白质,上清液用于目标物的检测。采用Thermo Hypersil Gold C18分析柱(50 mm×2.1 mm,1.9μm),预柱:Phenomenex Security Guard C18(4 mm×3.0 mm),以甲醇-水溶液为流动相,梯度洗脱,流速:0.2 mL.min-1,柱温:35℃,整个分析时间为6 min。采用电喷雾负离子(ESI-)模式电离,选择反应监测(SRM)模式检测,以大豆苷元作为内标物质进行定量。用于监测的离子分别为亚硫酸氢钠穿心莲内酯m/z 413.2→287.2/331.2和大豆苷元m/z 253.1→132.2,用基质匹配标准溶液法进行定量。结果:肝微粒体孵育液中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的质量浓度在0.05～50μmol.L-1范围内线性良好(r=0.9977,权重系数W:1/x2);孵育液中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的检出限(信噪比为3)为0.02μmol.L-1;其平均回收率在85%～115%之间;日内及日间的相对标准偏差(RSD)均小于15%,满足生物样品检测的要求。结论:将该方法用于肝微粒体孵育液中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的检测。该方法选择性强、灵敏度高、操作简便快速、重现性好,适用于亚硫酸氢钠穿心莲内酯体外代谢动力学等方面的研究。; 汤瑶李佐刚闻镍张双庆孙旭于敏王秀文汪巨峰李波; 关键词：超高效液相色谱-串联质谱法亚硫酸氢钠穿心莲内酯大豆苷元肝微粒体代谢

Microtech 648 ISO型电泳分析仪测定血清蛋白的性能验证研究及应用被引量：1: 2012年; 目的验证Microtech 648 ISO型电泳分析仪的性能,并建立实验动物的血清蛋白电泳参考值。方法用商业质控血清作为测试物,分别测定日内精密度、日间精密度、灵敏度和准确性。结果 Alb、α1、α2、β、γ区带的日间CV分别为2.5%、7.4%、7.6%、7.1%、9.9%;在同一膜片上的日内CV值分别为1.6%、8.9%、4.9%、4.6%、5.4%;在不同膜片上的日内CV值分别为3.5%、8.7%、9.3%、9.3%、5.8%;准确度在可接受的范围内;白蛋白和球蛋白的检测灵敏度分别为1.1g/L和1.2g/L。用验证后的仪器建立了常用实验动物的血清蛋白电泳参考值。结论 Microtech 648 ISO型电泳分析仪的性能良好,可以用于实验研究。; 苗玉发马犇潘东升刘芳汪巨峰李波; 关键词：电泳精密度灵敏度参考值

食蟹猴静脉注射抗CD20功能人源化单克隆抗体SM09重复给药毒性研究被引量：5: 2012年; 目的:评价食蟹猴静脉重复给药抗CD20功能人源化单克隆抗体SM09的安全性。方法:将食蟹猴随机分为溶媒对照组,SM09低、高剂量组(25,50 mg.kg-1),每组6只,静脉注射给药,每周1次,连续8周,恢复期12周,进行各项毒理学指标检测。结果:除个别动物偶见呕吐外,体重、进食量、体温、尿、心电图、骨髓细胞计数等均未显示与供试品相关的改变。SM09给药后能够诱导动物产生快速深度的外周血B细胞清除,至恢复期结束,多数动物外周血中B细胞水平恢复正常。给药4周,动物血液白细胞及淋巴细胞下降,之后逐渐回升。给药结束时动物补体C4水平略有降低。组织病理学检查结果除药理学作用相关的改变外,未见其他与供试品相关的改变。结论:食蟹猴连续静脉注射SM09,总体上具有良好的剂量耐受性,除观察到与药理作用相关的效应外,未见其他毒性反应。; 周晓冰李正东孙立齐卫红杨艳伟王秀文梁瑞安李波; 关键词：抗CD20单克隆抗体食蟹猴毒性

用于CMV启动子序列检测的绝对定量PCR方法的建立及验证: 2012年; 目的建立和验证用于CMV启动子序列检测的绝对定量PCR方法。方法针对CMV启动子序列设计探针和引物,用SYBR Green I熔解曲线分析引物扩增的特异性。对反应体系进行系统优化。用含CMV启动子的基因治疗产品和质粒标准品验证建立的PCR方法。结果上游引物为5'-AGACTTGGAAATCCCCGTGAGT-3',下游引物为5'-CGTATTAGTCATCGC-TATTACCATGGT-3',探针为5'-AACCGCTATCCACGCCCATTGATG-3'。扩增的特异性较强,反应体系优化后能达到较高的灵敏度。Ct值的变异系数都小于2%。标准曲线的定量范围为1.5×102～1.5×107拷贝,灵敏度为30拷贝。质粒标准品和基因治疗产品的扩增效率相近。结论建立了检测CMV启动子序列的绝对定量PCR方法。; 苗玉发王三龙汪巨峰李波; 关键词：实时定量PCR 质粒

重组嵌合抗CD20单抗PUM100单次给药药代动力学研究被引量：1: 2011年; 目的:研究国产重组嵌合抗CD20单抗PUM100经静脉单次给药后在食蟹猴体内的药代动力学,与相同条件下利妥昔单抗的药代动力学参数进行比较,评价二者的生物等效性关系。方法:12只食蟹猴按体重均衡法分为4组,分别单次给予不同剂量(10,30 mg.kg-1)的PUM100和利妥昔单抗,在不同时间点采血分离血清,用ELISA法测定血清中药物浓度;根据非房室统计矩模型用WinNolin药代软件对测定结果进行曲线拟合并计算药代动力学参数。结果:食蟹猴经静脉推注单次给予不同剂量(10,30 mg.kg-1)的PUM100后,半衰期(t1/2)分别为(111.3±10.8)和(154.0±39.1)h,全身清除率(CL)与表观分布容积(Vss)较接近,C0及AUC0-inf与给药剂量正相关,且两个剂量对应时间点的血药浓度存在显著性差异;PUM100与等剂量利妥昔单抗的主要药代动力学参数无显著性差异。结论:PUM100与等剂量利妥昔单抗的血清药物浓度-时间曲线特征相同,说明PUM100在试验剂量范围内与利妥昔单抗具有生物等效性。; 李佐刚盖文琳闻镍汤瑶孙旭于敏王秀文王军志李波; 关键词：利妥昔单抗非霍奇金淋巴瘤抗CD20单抗生物等效性药代动力学

超高效液相色谱-串联质谱法测定兔血浆中的丝裂霉素C被引量：7: 2012年; 建立了采用超高效液相色谱-串联质谱测定兔血浆中丝裂霉素C的方法。以兔空白血浆为基质,通过添加标准溶液的方法配制含丝裂霉素C和内标物曲安奈德的样品,选用乙酸乙酯为提取溶剂,液-液萃取法处理血浆样品。采用Hypersil Gold C18分析柱(50 mm×2.1 mm,1.9μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(90∶10,v/v),等度洗脱,流速0.2 mL/min,柱温35℃,在3 min内实现了快速分离。采用电喷雾正离子(ESI+)模式电离,选择反应监测(SRM)模式检测,以曲安奈德作为内标物进行定量。用于监测的定量离子对分别为丝裂霉素C m/z 335.2→242.2和曲安奈德m/z 435.2→397.3/415.2,用基质匹配标准溶液法进行定量。结果表明:兔血浆中丝裂霉素C的质量浓度在1～1 000μg/L范围内线性关系良好(r=0.997 8,权重系数(weighting):1/x2);血浆中丝裂霉素C的检出限(信噪比为3)为0.2μg/L;其平均回收率为85%～115%;日内及日间的相对标准偏差(RSDs)均小于15%,满足生物样品检测的要求。该方法可用于兔气管外壁给药后的血浆样品中丝裂霉素C的检测。本方法选择性强、灵敏度高、操作简便快速、重现性好,适用于丝裂霉素C药代动力学等方面的研究。; 汤瑶张双庆李响孙旭闻镍于敏彭莉莉李进让李佐刚李波; 关键词：超高效液相色谱-串联质谱法丝裂霉素C 新西兰大白兔血浆

CMV启动子序列检测的复合实时定量PCR方法的建立: 目的建立和验证用于巨细胞病毒(CMV)启动子序列检测的复合定量PCR方法.方法以CMV启动子序列和小鼠管家基因β-actin的cDNA序列为模版分别设计探针和引物,用SYBR Green Ⅰ熔解曲线分析两对引物扩增的...; 苗玉发李波

丝裂霉素C-聚乳酸凝胶兔气管外壁给药后体内释放量的测定: 2012年; 目的将丝裂霉素C(MMC)与聚乳酸(PLA)制成凝胶制剂固定在兔气管外壁给药,并建立超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)测定兔体内释放丝裂霉素C的含量。方法新西兰大白兔30只,气管处外科手术形成瘢痕组织,将0.2 ml载有不同剂量(0.05、0.1、0.2、0.4和0.6mg)的聚乳酸凝胶与明胶海绵的混匀后置于损伤后的气管外壁,固定后缝合手术切口。兔血浆经乙酸乙酯提取后,采用UHPLC-MS/MS法测定MMC血浆药物浓度。结果兔血浆中丝裂霉素C的质量浓度在1～1 000μg·L-1范围内线性良好(r=0.9977,权重W:1/x2);血浆中丝裂霉素C的检出限(信噪比为3)为0.2μg·L-1;其平均回收率在85%～115%之间;日内及日间的相对标准偏差(RSDs)均小于15%,满足生物样品分析要求。兔气管外壁给药后,血浆中MMC释放量少,血药浓度极低,此为选择UHPLC-MS/MS的主要依据。结论该方法简便快捷、灵敏度高、重现性好,适用于丝裂霉素C的体内大批量样品定量分析及药代动力学等方面的研究。MMC-PLA凝胶局部用药后吸收量极少,说明此凝胶剂对全身影响不大。; 汤瑶孙旭李响彭莉莉李进让张双庆闻镍于敏李佐刚李波; 关键词：丝裂霉素C 超高效液相色谱-串联质谱法新西兰大白兔血药浓度

GLP体系下临床检测室的质量保证要素: 2012年; 目的介绍GLP体系下临床检测室的质量保证要素。方法通过研究美国病理学家学会(Collegeof American Pathologists,CAP)认可程序、美国临床实验室质量改进法案(CLIA-88)以及卫生行业标准WS/T 250-2005对实验室质量保证的要求,结合本实验室的具体情况,总结GLP体系下有关临床检测室的质量保证要素。结果质量保证涉及到实验室的所有工作,主要涵盖样品采集、标识、运输、接收、检验和报告、人员培训和考核、仪器管理、室内质量控制、室间质量评价、方法验证以及客户沟通和交流等等。结论质量保证各个要素的实施是临床检测室获得质量数据的决定性因素。; 苗玉发潘东升刘芳汪巨峰李波

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国家科技重大专项(2008ZX09305-002)

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机构

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