国家自然科学基金(30960111)
- 作品数：10 被引量：34H指数：4
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- 不同底物对Sombati癫细胞模型整合素α_2表达的影响
- 2011年
- 目的探讨不同底物对经体外培养的Sombati癫癎细胞模型海马神经元整合素α_2表达水平的影响及意义。方法以层黏连蛋白和多聚L-赖氨酸作为底物于体外培养新生小鼠海马神经元,至第7天时行神经元纯度鉴定;无镁细胞外液继续培养3 h后制备Sombati癫癎细胞模型,逆转录-聚合酶链反应检测不同处理组海马神经元整合素α_2 mRNA相对表达变化。结果模型制备前,经体外培养至第5天的层黏连蛋白组神经元胞体增大、饱满,突起连接紧密,神经网络形成,多聚L-赖氨酸组则体外培养至第7天时方出现上述表现;模型制备后24 h,不同处理组神经元均可见迁移现象和神经网络"网格"样改变,但不同处理组神经元形态无明显差异。以整合素α2与β-肌动蛋白光密度值之比值代表整合素α_2mRNA相对表达量,多聚L-赖氨酸组、层黏连蛋白组和多聚L-赖氨酸+层黏连蛋白组分别为0.25±0.03、037±0.05和0.48±0.09,后两组整合素α_2 mRNA表达水平高于多聚L-赖氨酸组,且差异有统计学意义(p=0.005,0.000)。结论与多聚L-赖氨酸组相比,层黏连蛋白对经体外培养的原代神经元贴壁及轴突连接具有较强的促进作用。添加外源性层黏连蛋白可诱导Sombati癫癎细胞模型海马神经元整合素α_2mRNA表达上调。
- 苏婕吴原马美刚吴月娟刘云唐玉兰余璐
- 关键词：神经元整合素Α2层黏连蛋白逆转录聚合酶链反应细胞
- 难治性癫痫细胞模型中N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Vb和肌营养不良蛋白聚糖基因的表达变化及意义
- 2014年
- 目的探讨难治性癫痫细胞模型(Sombati癫痫细胞模型)中N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Vb(GnT-Vb)和肌营养不良蛋白聚糖(dystroglycan)基因的表达变化及意义。方法取新生24 h内SD乳鼠,分离其双侧海马进行原代海马神经元培养。将培养至第14天的海马神经元分为对照组和模型组,模型组利用低镁细胞外液培养3 h制备Sombati癫痫细胞模型。通过实时定量聚合酶链式反应(real-time qPCR)方法测定对照组和模型组造模后第1天和第4天GnT-Vb和dystroglycan的基因表达水平。结果造模后第1天,模型组GnT-Vb基因表达水平低于对照组(P<0.05);而两组dystroglycan基因表达水平间无差异(P>0.05)。造模后第4天,模型组GnT-Vb、dystroglycan基因表达水平均高于对照组(P<0.05)。结论 GnT-Vb和dystroglycan基因在Sombati癫痫细胞模型中表达呈增高趋势,并呈现一定时间的动态变化;GnT-Vb和dystroglycan基因可能同时参与了难治性癫痫的形成过程。
- 叶洁梅吴原黄金山李偲俊韦兴刘云
- 关键词：癫痫
- 难治性癫痫细胞模型中神经元损伤及神经突起的变化被引量：11
- 2011年
- 目的 了解难治性癫痫细胞模型神经元损伤情况及神经突起的形态学变化.方法 培养至第10天的海马神经元用无镁液处理3 h,制备成难治性癫痫细胞模型,测定乳酸脱氢酶（lactic acid dehydrogenase,LDH）释放量了解神经元损伤情况,应用光学显微镜及扫描电镜观察神经元和神经突起的形态学变化.结果 模型组LDH释放量（U/L）在无镁液处理后3、6、24 h（分别为4.26±1.28、6.56±2.34和16.67±3.57）均较对照组明显升高（LSD法,P〈0.05）.随着时间的延长,模型组LDH释放量逐渐升高（F=39.316,P〈0.05）.经无镁液处理后24 h,光学显微镜下可见神经元胞体相互靠近,神经突起相互迁移聚集,突起连接成网格样变化,72 h时这种变化更加明显.扫描电镜下可见神经元胞膜粗糙,有小凹陷形成,神经突起交织聚集.结论 难治性癫痫细胞模型存在神经元损伤,存在神经突起的形态学变化.
- 吴原刘秀颖王学峰唐玉兰余璐苏婕吴月娟马美刚
- 关键词：癫痫神经元神经学
- α-细辛醚对难治性癫痫细胞模型及Laminin β_1的影响被引量：11
- 2011年
- 目的研究α-细辛醚对难治性癫痫细胞模型的影响及对laminin β1表达的干预作用,探讨α-细辛醚抗癫痫的作用机制。方法体外培养海马神经元至第9天,随机将培养细胞分为正常对照组、模型组、模型+α-细辛醚(7.5μg/ml)组、模型+α-细辛醚(15μg/ml)组、模型+α-细辛醚(30μg/ml)组、模型+2μl无水乙醇组,观察各组神经元的形态学变化,检测各组细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)在12,24,48 h的变化。采用荧光定量PCR(FQ-PCR)和免疫组化检测各组laminin β1在处理后24 h的表达变化。结果①造模后少数神经元会发生迁移、融合,加α-细辛醚组均能减少神经细胞膜LDH的渗透。②在24 h,模型组lamininβ1 mRNA表达增加,各浓度α-细辛醚均能抑制laminin β1 mRNA的表达(均P<0.05)。③免疫组化显示laminin β1蛋白在细胞质和细胞外基质表达,平均光密度值:对照组(0.094 7±0.025 86),模型组(0.135 1±0.026 16),模型+30μg/mlα-细辛醚组(0.097 9±0.032 81)。结论α-细辛醚能减少难治性癫痫细胞模型神经元的细胞膜损伤,抑制laminin β1基因及蛋白的过度表达,这可能是α-细辛醚抗癫痫的作用机制之一。
- 马美刚吴原吴月娟苏婕刘秀颖唐玉兰余璐
- 关键词：Α-细辛醚LAMININ神经元癫痫模型
- 整合素β1 shRNA重组慢病毒载体的构建及其对Sombati癫痫细胞模型整合素β1基因表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的 构建大鼠整合素β1（integrin β1）基因RNA干扰慢病毒载体,为研究Sombati癫痫细胞模型integrin β1的作用机制提供载体.方法 构建integrin β1基因的4个shRNA慢病毒干扰载体,利用HEK 293T细胞进行慢病毒包装,感染靶细胞PC12,采用Western印迹验证干扰效果,筛选出沉默效果最好的慢病毒shRNA,感染新生大鼠海马神经元细胞和Sombati癫痫细胞,通过Western印迹检测其对海马神经元和Sombati癫痫细胞integrin β1的基因沉默效果.结果 经测序证实RNAi慢病毒载体构建成功,病毒达到有效滴度,PC12细胞病毒转染率达95％以上；Western印迹证实,重组慢病毒integrin β1 shRNA感染海马神经元细胞和Sombati癫痫细胞后integrin β1蛋白表达下降,integrinβ1 shRNA2重组慢病毒载体对海马神经元和Sombati癫痫细胞的沉默效率分别为70％和90％.结论 成功构建integrin β1 RNA干扰慢病毒载体,并在新生大鼠海马神经元和Sombati癫痫细胞中实现有效的基因沉默效应.
- 叶洁梅吴原黄金山李偲俊刘云
- 关键词：RNA干扰整合素Β1海马神经元癫痫
- 难治性癫痫细胞模型中Lamininβ1的表达及意义被引量：3
- 2010年
- 目的研究难治性癫痫细胞模型中lamininβ1表达的变化,探讨lamininβ1在难治性癫痫形成中的作用。方法 SD新生乳鼠,迅速断头后取出双侧海马,体外培养海马神经元至第9天,随机分为对照组和模型组,采用荧光定量PCR检测两组12h、24h和48h lamininβ1mRNA表达,免疫组化技术检测lamininβ1蛋白的表达。结果荧光定量PCR显示在12h后模型组lamininβ1mRNA表达增加(P<0.05),且随着时间延长表达增强。在24h,免疫组化显示模型组lamininβ1蛋白表达增强(平均光密度值:对照组0.0947±0.0259vs模型组0.1351±0.0262,P<0.01).结论难治性癫痫细胞模型中lamininβ1表达增加,提示lamininβ1可能参与难治性癫痫的形成过程。
- 马美刚吴原苏婕吴月娟刘秀颖唐玉兰余璐
- 动态脑电图检查对儿童颞叶癫痫的诊断意义被引量：4
- 2013年
- 目的观察动态脑电图检查对儿童颞叶癫痫临床诊断的价值。方法对常规脑电图检查正常而临床可疑的112例颞叶癫痫儿童进一步采用动态脑电图检查,并对比分析两种检查方式对儿童颞叶癫痫的诊断意义。结果在112例患儿中经动态脑电图检查出68例在颞区出现癫痫波。结论采用动态脑电图对临床可疑的颞叶癫痫儿童进行检查,能够在正常活动下不间断地进行脑电检测,对于痫性放电易发于自然睡眠早期的患儿尤其适用,具有良好的诊断价值。
- 吕高萍陈春莲陆慧慧蒋丽丽王晶吴原
- 关键词：颞叶癫痫动态脑电图睡眠期
- 体外培养癫痫细胞模型中整合素α2表达的变化被引量：4
- 2011年
- 目的探讨体外培养癫痫细胞模型中整合素α2(integrinα2)的动态表达变化及意义。方法体外培养至第7天的乳鼠海马神经元分成对照组和实验组,实验组利用"无镁细胞外液"体外培养3h制备体外癫痫神经元细胞模型,免疫细胞化学法和逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法测定对照组及实验组造模后12h,24h,48h三个时间点的integrinα2蛋白及mRNA的相对表达变化。结果造模24h后神经网络迁移,呈"网格样"改变;integrinα2蛋白相对表达:平均光密度值(mean integrated optical density,mean IOD)对照组为(0.033±0.005),实验组12h(0.084±0.033),24h(0.076±0.018),48h(0.077±0.006),实验组均高于对照组(P<0.05),在造模后12-48h表达量维持在两倍以上;RT-PCR结果示对照组integrinα2与β-actin光密度值(optical density,OD)之比为(0.316±0.039),实验组12h(0.435±0.067),24h(0.453±0.046),48h(0.515±0.054),不同时间实验组与对照组相比,integrinα2mRNA表达均显著提高(P<0.05)。结论 Integrinα2在体外培养乳鼠海马癫痫神经元中表达增加,推测integrinα2可能参与了细胞持续自发性放电后神经网络的重组过程。
- 苏婕吴原吴月娟马美刚唐玉兰余璐刘云李佳荃
- 关键词：整合素Α2神经网络
- α-细辛醚对无镁细胞外液培养海马神经元构建难治性癫痫细胞模型的影响被引量：4
- 2011年
- 背景:无镁细胞外液处理培养的海马神经元可诱导产生反复自发性癫痫样放电,该模型可作为临床难治性癫痫细胞模型。目的:探讨难治性癫痫细胞模型中α-细辛醚对神经元的保护作用。方法:分离培养新生24h内的SD大鼠海马神经元,取经鉴定的海马神经元,加入含终浓度为7.5,15,30,60,120mg/Lα-细辛醚的维持培养液培养4h后,换为无镁液建立难治性癫痫细胞模型,3h后恢复含α-细辛醚的维持培养基继续培养24h,MTT法检测海马神经元活力。结果与结论:经无镁细胞外液培养后,海马神经元的活力显著降低(P<0.01),α-细辛醚处理后,海马神经元的活力显著升高(P<0.01),且随α-细辛醚浓度的增加,海马神经元的相对活力升高。说明α-细辛醚可以抑制难治性癫痫细胞模型中的神经元损伤,发挥神经元保护作用,且具有剂量依赖性。
- 吴月娟吴原苏婕唐玉兰余璐马美刚刘云
- 关键词：神经元损伤难治性癫痫Α-细辛醚细胞模型
- Sombati癫癎细胞模型电压依赖性钾电流的变化
- 2011年
- 目的:采用全细胞膜片钳记录技术研究Sombati癫癎细胞模型电压依赖性K+电流的变化。方法:取SD新生乳鼠双侧海马,体外原代培养海马神经元,培养至第9天的部分海马神经元经无镁液处理3h制备癫癎细胞模型,采用全细胞膜片钳技术分别记录正常组(未经无镁液处理的海马神经元)和致癎组(经无镁液处理3h后更换为正常维持培养液的海马神经元)海马神经元的电压依赖性外向K+电流。结果:致癎组外向K+电流比正常组增大,峰值电流由(596.62±79.23)pA增至(978.68±53.23)pA,两组间比较差异有统计学意义(P=0.000)。与正常组相比,致癎组的I-V曲线明显左移,I-V曲线形态无显著改变。结论:Sombati癫癎细胞模型中,电压依赖性外向K+电流显著增加可能是癫癎细胞模型癎性放电后为了保持细胞稳态的代偿性保护作用。
- 刘云吴原吴月娟陈梓斌刘晓菲刘秋弟谭明会
- 关键词：全细胞膜片钳技术海马神经元
