国家自然科学基金(81070138)
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
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- FABP3过表达对斑马鱼胚胎心脏发育及线粒体DNA拷贝数的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨脂肪酸结合蛋白(FABP)3过表达对斑马鱼胚胎死亡率、心脏发育形态及线粒体DNA拷贝数影响。方法构建FABP3过表达载体,在斑马鱼受精卵的单细胞期进行胚胎显微注射(A组);以野生型斑马鱼胚胎作为空白对照(C组)。收集受精后12、24、48、72hpf斑马鱼胚胎,利用体式显微镜观察其发育情况,并统计其死亡率;RT-PCR技术检测胚胎线粒体DNA拷贝数。结果 A组斑马鱼心脏在12、24、48、72hpf各时间点发育大体形态、死亡率与C组比较均无明显差异。A组24hpf时斑马鱼线粒体DNA的拷贝数高于C组(P<0.05);而在48、72hpf时,两组间斑马鱼线粒体DNA拷贝数无统计学差异(P>0.05)。结论 FABP3过表达对斑马鱼胚胎死亡率、心脏发育的形态无明显影响,对线粒体功能起保护作用。
- 周莉娟史春梅宋桂仙刘海浪刘明钱玲梅
- 关键词：斑马鱼心脏发育线粒体DNA
- FCCP对FABP3基因表达沉默的P19细胞线粒体功能的影响
- 2013年
- 目的探讨羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(FCCP)对脂肪酸结合蛋白3(FABP3)基因表达沉默的P19细胞线粒体功能的影响。方法构建FABP3表达沉默载体(A组)及相应的空载体(B组),包装病毒后感染P19细胞,建立稳定转染FABP3沉默的P19细胞株,采用实时定量PCR检测干扰效率。给予FCCP 2.5μmol/L(C组)、5μmol/L(D组)干预FABP3沉默的P19细胞,采用荧光素酶化学发光法检测细胞ATP含量,流式细胞术观察线粒体膜电位的变化。结果 B组FABP3基因表达量较A组下调(0.50±0.08vs.2.23±0.42)(P<0.05)。与A、B组相比,C、D组细胞ATP生成减少(2.47±0.58、1.05±0.13vs.0.09±0.03、0.12±0.02)(P<0.05),而细胞线粒体膜电位升高(358.36±12.23、389.66±12.13vs.437.35±9.27、473.21±19.65)(P<0.05)。结论FABP3基因在维持P19细胞线粒体功能中发挥重要作用。
- 金瑾史春梅周丽娟宋桂仙刘海浪刘明钱玲梅盛燕辉
- 关键词：P19细胞线粒体功能
- FABP3对P19细胞增殖的影响及其生物信息学分析被引量：1
- 2011年
- 目的探讨脂肪酸结合蛋白(FABP)3基因过表达对P19细胞分化、增殖的影响及FABP3基因的生物信息学特征。方法构建FABP3过表达载体及相应的空载体,转染P19细胞,经0.9%二甲基亚砜(DMSO)诱导分化为心肌细胞,定量PCR检测肌钙蛋白T(cTnT)和转录调控因子GATA4基因的表达,MTT法检测P19细胞增殖,应用在线数据库软件分析FABP3的核苷酸基本特征、蛋白质理化性质、亚细胞定位等。结果与空载体相比,FABP3基因过表达能抑制cTnT、GATA4 mRNA表达及P19细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。生物信息学分析显示,FABP3基因mRNA全长1097 bp,开放阅读框长402 bp,编码133个氨基酸,相对分子质量为14 858 Da,蛋白主要位于胞浆。结论 FABP3基因过表达显著抑制心肌细胞分化、增殖,生物信息学分析为进一步研究该基因奠定了基础。
- 沈亚卉刘垚秋胡德亮张奇军孔祥清钱玲梅
- 关键词：P19细胞生物信息学
- FABP3基因荧光载体构建及其蛋白的亚细胞定位
- 2012年
- 目的构建脂肪酸结合蛋白3(FABP3)基因的荧光表达载体FABP3-pEGFP-N2,并应用绿荧光融合蛋白技术检测FABP3蛋白的亚细胞定位。方法 RT-PCR法获得FABP3基因编码框,克隆到pEGFP-N2载体中,利用脂质体将构建的表达载体转染P19细胞后,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞内FABP3蛋白定位。结果成功克隆FABP3基因片段,并将其重组到pEGFP-N2载体中。荧光显微镜和激光共聚焦显微镜显示,FABP3蛋白主要分布于P19细胞的胞浆和胞核中。结论成功构建了FABP3-pEGFP-N2真核表达载体,FABP3在P19细胞的胞浆和胞核中呈弥漫分布特点。
- 沈亚卉宋桂仙张奇军刘垚秋周莉娟孔祥清钱玲梅
- 关键词：P19细胞亚细胞定位
- FCCP对P19细胞向心肌细胞诱导分化的影响
- 2013年
- 目的:探讨羰基-氰-对-三氟甲氧基本腙(carbonyl cyanide p-trifluoromethoxyphenylhydrazone,FCCP)对P19细胞向心肌细胞诱导分化的影响。方法:在P19细胞向心肌细胞诱导分化的过程中加入5μmol/L的FCCP,同时设立阴性对照组,显微镜观察分化过程中不同时间点P19细胞形态的变化,并采用real-time PCR和蛋白质印迹法分别检测GATA4、NKX2.5及cTnT在分化过程中的mRNA和蛋白表达水平。结果:FCCP处理组P19细胞形成的胚胎样小体较对照组体积小,结构较松散,形态不均一。在整个分化过程中,FCCP处理组GATA4、NKX2.5及cTnT基因均有表达,但整个动态表达过程较对照组延迟;Western blot结果显示,FCCP处理组GATA4、NKX2.5蛋白在第5、7、9天的表达量均较对照组低;在第11天,两组间GATA4蛋白的表达量差异无统计学意义;而NKX2.5在FCCP处理组的表达量仍低于对照组。FCCP处理组和对照组cTnT蛋白在分化第5、7天的表达量差异无统计学意义,而在第9、11天cTnT蛋白表达量FCCP组均较对照组低。结论:FCCP可抑制P19细胞向心肌细胞诱导分化的进程。
- 金瑾周丽娟史春梅钱玲梅盛燕辉
- 关键词：心肌细胞P19细胞FCCP分化
- FABP3过表达对斑马鱼ROS和线粒体ATP含量的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨脂肪酸结合蛋白3(FABP3)过表达对斑马鱼胚胎活性氧(ROS)及线粒体ATP含量的影响。方法构建FABP3过表达载体,在斑马鱼受精卵的单细胞期进行胚胎显微注射(A组);以野生型斑马鱼作为空白对照(C组)。收集受精后24、48hpf斑马鱼胚胎,采用流式细胞术和化学发光法分别检测斑马鱼ROS和ATP含量。结果与C组相比,A组24hpf时斑马鱼ROS水平降低,ATP含量增加(P<0.05);而在48hpf时,两组间斑马鱼ROS水平和ATP含量无统计学差异(P>0.05)。结论 FABP3过表达对斑马鱼线粒体功能起保护作用。
- 夏黎史春梅宋桂仙王薛洁周莉娟钱玲梅
- 关键词：斑马鱼活性氧
