国家自然科学基金(30471741)
- 作品数：7 被引量：28H指数：3
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- 相关机构：哈尔滨医科大学哈尔滨市第一医院哈尔滨医科大学附属第四医院更多>>
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- CD40靶向小干扰RNA抑制大鼠异体肢体移植急性排斥反应后细胞凋亡及P53、P21表达被引量：1
- 2008年
- 目的探讨CD40靶向小干扰RNA（即短发夹RNA，shRNA）对大鼠异体肢体移植急性排斥反应及细胞凋亡的影响。方法以纯系SD大鼠为供体，纯系Wistar大鼠为受体，行同种异体右后肢移植。27只大鼠肢体移植后随机分为3组：实验组．注射梭华一Sofast（15μl）-siCD40—2，pSilencer（100μg）载体复合物600μl；空载体对照组，在肢体移植后，即注射Sofast（15μl）-pSilencer4．1-CMVneo（100μg）空载体复合物600μl；生理盐水对照组，在肢体移植注射生理盐水600μl。观察移植物排斥反应征象及存活情况，并于第7天对产生免疫耐受大鼠进行混合淋巴细胞反应（MLR），同时进行组织学检查。结果与其他组相比．实验组移植物发生排斥反应的时间及存活时间均显著延长（P〈0．01）（〉13d），未见排斥反应征象，其他组均于术后近期发生排斥反应；实验组大鼠对供体的淋巴细胞呈现低反应性，移植的供体同系大鼠的肢体得以存活。实验组移植物细胞凋亡率低于其他组。结论在术后不应用免疫抑制剂的情况下，CD40靶向的shRNA干扰可以抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应。
- 张震宇刘伟毕郑钢董清平
- 关键词：移植物存活急性排斥反应
- 骨形态发生蛋白-2对椎间盘细胞软骨特异性基因mRNA的调节作用被引量：2
- 2005年
- 目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)2对椎间盘细胞软骨特异性基因Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的调控作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术检测BMP2对培养的人椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因mRNA表达的调控作用。结果在BMP2浓度为100μg/L(0.149±0.006,P<0.05)和1000μg/L(0.163±0.006,P<0.01)时,其对椎间盘细胞中Sox9基因mRNA可起到显著的正向调控作用;在此浓度下,它也可以对Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因mRNA起到正向调控作用。结论BMP2可以按照剂量依赖方式正向调控椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的表达。
- 王文波赵勇卢宇李雪松赵哲于长水
- 关键词：骨形态发生蛋白-2MRNA椎间盘退变
- 靶向CD40小RNA干扰抑制大鼠异体肢体移植急性排斥反应后细胞凋亡及P53，P21，Bcl-2，Bax的表达
- 2008年
- 背景：对于CD40通路的研究以往多集中在器官移植，涉及异体肢体方面的报道较少。目的：探讨靶向CD40的小分子RNA干扰对大鼠异体肢体移植急性排斥反应、细胞凋亡的影响，检测CD40通路阻滞后相关基因的表达变化。设计、时间及地点：细胞基因工程体内实验，于2007—09／2008—02在哈尔滨医科大学附属第一医院中心实验室完成。材料：清洁级10～12周龄雄性Wistar受鼠、SD供鼠各27只，行同种异体右后肢移植。真核表达质粒pSilencer4．1-CMV neo为Ambion公司产品。pSilencer4．1-CD40shRNA重组质粒由哈尔滨医科大学附属第一医院中心实验室保存。梭华-Sofastr^TM in vivo体内转染试剂为厦门太阳马生物工程有限公司产品。方法：27只Wistar受鼠异体肢体移植完成后随机分为3组，9只／组。干扰组经阴茎背静脉注入梭华-Sofast（15 μL）-siCD40—2／pSilencer（100μg）载体复合物600μL，空载体组等量注入梭华-Sofast（15μL）-pSilencer4．1-CMV neo（100μg）空载体复合物，对照组等量注入生理盐水，连续注射6d，1次／d。主要观察指标：观察移植物排斥反应征象及移植肢体存活时间，检测细胞凋亡情况，免疫组织化学染色检测p53，p21，Bcl-2，Bax的表达。结果：干扰组未见排斥反应征象，且移植物发牛排斥反应的时间及存活时间均显著长于空载体组、对照组（t=3．137～3．519，P〈0．01）；空载体组、对照组于移植后近期发生排斥反应。干扰组移植后第1，3，5，7天细胞凋亡指数均明显低于空载体组、对照组（t=3．636-4．786，P〈0．01）。干扰组移植后各时间点P53，P21，Bax的表达均明显低于空载体组、对照组（t=3．586-4．531，P〈0．01）；Bcl-2的表达均明显高于空载体组、对照组（t=3．664—4．644，P〈0．01）。结论：在不应用免疫抑制剂的情况下，靶向CD40的小分子RNA干扰可以减轻大鼠异�
- 张震宇刘伟毕郑钢董清平
- 关键词：移植物存活急性排斥反应
- 白细胞介素1对椎间盘细胞软骨特异性基因Sox9 mRNA的调节作用被引量：7
- 2006年
- 目的探讨白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)对人椎间盘细胞软骨特异性基因Sox9和Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。方法应用RT-PCR技术检测IL-1对培养的椎间盘细胞中软骨特异性基因Sox9和Ⅱ型胶原基因mRNA表达的调节作用。结果在IL-1浓度为0.1ng/ml、1ng/ml和10ng/ml培养24h时,其对椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因mRNA可起到显著的负向调控作用;10ng/ml的IL-1随着培养时间的延长对椎间盘细胞中Sox9和Ⅱ型胶原基因mRNA出现显著的负向调控作用。结论IL-1可以按照剂量及时间依赖方式负向调节椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因的表达。
- 赵勇王文波卢宇葛芸于占革薛飞
- 关键词：白细胞介素1SOX基因胶原椎间盘
- 骨形态发生蛋白-2与椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因的调控关系被引量：15
- 2005年
- 目的:探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。方法:应用逆转录聚合酶链反应和Western印迹检测不同浓度BMP-2对培养的人椎间盘细胞中软骨特异性基因Sox9和Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。结果:BMP-2浓度为100ng/ml和1000ng/ml时,椎间盘细胞中Sox9和Ⅱ型胶原基因mRNA表达与0ng/ml组(对照组)相比明显增加(P<0.05);在蛋白水平的检测中,也得到了一致的结果。结论:BMP-2可以按照剂量依赖方式正向调节椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因的表达,提示BMP-2可能对退变早期的椎间盘具有修复功能。
- 赵勇王文波李吉友卢宇霍锐
- 关键词：骨形态发生蛋白-2SOX基因椎间盘
- 椎间盘髓核细胞中Sox9与Ⅱ型胶原基因表达的关系被引量：7
- 2007年
- 目的:探讨椎间盘髓核组织中Sox9基因表达的变化及其与Ⅱ型胶原基因表达的关系。方法:将30个椎间盘组织按Thompson分期分为Ⅰ～Ⅳ期,应用RT-PCR、Western blot和免疫组化方法检测各期间盘组织中Sox9、Ⅱ型胶原基因的mRNA和蛋白表达;应用SPSS10.0统计学软件,采用单因素方差分析、t检验和Pearson相关性检验分析两者的相互关系。结果:椎间盘髓核组织中Sox9mRNA的表达量在总体上低于Ⅱ型胶原,Sox9蛋白表达位于细胞核中而Ⅱ型胶原主要位于细胞间质内,Sox9在ThompsonⅠ期椎间盘的细胞核内表达很强而在Ⅳ期则很弱甚至缺失;从ThompsonⅠ～Ⅳ期两种基因的mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低,各分期间有显著性差异(P<0.05)。ThompsonⅠ～Ⅳ期标本中Ⅱ型胶原与Sox9表达量的下降趋势相近。结论:Sox9和Ⅱ型胶原基因表达水平与Thompson分期密切相关,随椎间盘退变程度加重表达逐渐降低,且两者下降趋势相近。
- 赵哲王文波李吉友刘洋李雪松马淑茜
- 关键词：椎间盘髓核SOX9基因表达
- 靶向CD40的shRNA干扰抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应的实验研究
- 2008年
- 目的探讨靶向CIM0的RNA干扰对大鼠异体肢体移植急性排斥反应的影响。方法以纯系SD大鼠为供体，纯系Wistar大鼠为受体，行同种异体右后肢移植。27只大鼠肢体移植后随机分为三组，A组：注射入梭华-Sofast—siCD40—2／pSilencer载体复合物600μL；B组：注射Sofast-pSilencer4．1-CMV neo空载体复合物600μL；C组：注射生理盐水600μL，以上均通过阴茎背静脉注射。观察移植物排斥反应征象及存活情况，并于第7天对产生免疫耐受大鼠进行混合淋巴细胞反应，同时进行组织学检查。结果与B、C组相比，A组移植物发生排斥反应的时间及存活时间均显著延长，差异有统计学意义（P〈0．01）（〉13d），未见排斥反应征象；B、C组均于术后近期发生排斥反应。A组大鼠对供体的淋巴细胞呈现低反应性，移植的供体同系大鼠的肢体得以存活。结论术后不应用免疫抑制剂的情况下，靶向CD40的shRNA干扰可以抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应。
- 张震宇刘伟毕郑钢董清平
- 关键词：移植物存活移植物排斥
