国家自然科学基金(30471745) 作品数:13 被引量:91 H指数:6 相关作者: 俞永林 杨丰建 任志伟 乔健 夏军 更多>> 相关机构: 复旦大学 复旦大学上海医学院 生物技术公司 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
IL-1β对兔关节软骨细胞MMP-1/-13mRNA表达和NO的影响 被引量:14 2008年 目的观察白介素-1β(IL-1β)对体外培养的兔关节软骨细胞基质金属蛋白酶-1/-13(MMP-1/-13)基因表达的调节作用和对一氧化氮(NO)的影响,以了解骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨损伤的机制。方法将体外培养的兔关节软骨细胞随机分为5组,每组有3个样本,第1组为空白对照组,第2,3,4,5组分别加入10ng/mL的IL-1β,作用时间分别为8,16,24,36h。采用实时荧光定量PCR(real-timePCR)的方法,观察兔关节软骨细胞MMP-1/-13基因的表达情况,以空白组为对照,比较不同时间段软骨细胞MMP-1/-13基因表达,并收取培养细胞上清液测定一氧化氮(NO)含量,比较各组变化。结果正常兔关节软骨细胞具有MMP-1/-13基因表达,但是表达量较低,而各实验组MMP-1/-13mRNA都明显增高。尤其是MMP-1mRNA增高明显,在36h内随着时间的延长逐渐增高,且各组间差异具有统计学意义(P<0.05);MMP-13mRNA增高后维持在高水平,但各组间无明显差异。NO的含量也随着时间的延长而逐渐增高。结论IL-β1随着时间延长,正向调节兔关节软骨细胞MMP-1/-13mRNA表达,并能促进NO的释放增加,从而使它们在OA软骨破坏的机制中发挥重要作用,但对MMP-1/-13具体调节机制不尽相同。 任志伟 俞永林 杨丰建 乔健 姜建元 肖保国 王静关键词:软骨细胞 白介素-1Β 实时荧光定量PCR 运动训练结合玻璃酸钠治疗膝关节骨性关节炎患者关节功能改善分析 被引量:14 2007年 目的:评价膝关节功能训练联合玻璃酸钠注射液(施沛特)对膝关节骨性关节炎患者关节功能改善的状况。方法:选择92例膝关节骨性关节炎患者,随机分为2组,一组接受玻璃酸钠注射液膝关节内注射治疗,每周1次,连续5次为1疗程。另一组同样完成1疗程的玻璃酸钠注射液膝关节内注射治疗,但在完成第2次玻璃酸钠注射液关节内注射时开始膝关节功能训练,功能训练持续6个月,评价两组患者膝关节功能改善的差异。结果:膝关节内注射玻璃酸钠注射液联合膝关节功能训练组在改善膝关节功能方面优于单纯膝关节内注射玻璃酸钠注射液组。结论:膝关节内注射玻璃酸钠注射液联合膝关节功能训练能够对膝关节骨性关节炎起到温和持久的关节功能改善作用。 俞永林 任志伟 杨丰建 洪晓亮关键词:玻璃酸钠注射液 骨性关节炎 膝关节 骨关节炎中的信号传导及其靶向治疗 被引量:1 2009年 周斌 俞永林关键词:信号传导 骨关节炎 靶向治疗 病理生理学基础 炎性介质 PPAR-Γ 丝裂酶原活化蛋白激酶激酶1/2抑制对家兔关节软骨保护作用的研究 被引量:2 2008年 目的评价丝裂酶原活化蛋白激酶(mitogen—activated protein kinase,MAPK)信号转导通路中MAPK激酶1/2(MEKI/2)在骨关节炎发病过程中的作用。方法新西兰家兔30只,制作OA模型,随机分成3组,每组10只。从造模术后第4天开始,第1组和第2组分别注射100μmol/L和40μmol/L的PD98059,第3组注射PBS液体作为安慰剂对照组,每周2次。另取10只家兔,正常关节内注射PBS液体作为正常对照组。8周后处死动物,进行股骨髁关节软骨退变的大体评分。用Western Blot印记杂交法测定软骨组织中ERK1/2以及磷酸化ERK1/2的表达。用实时定量PCR方法测定基质金属蛋白酶-1/13(MMp-1/13)的mRNA表达水平。结果与使用PBS的安慰剂对照组相比,使用PD98059的关节软骨破坏明显减轻。磷酸化的ERK1/2在100μmol/LPD98059干预组明显低于40μmol/L干预组和安慰剂对照组。而MMP-1/13的mRNA表达在不同浓度的干预组均低于安慰剂对照组。结论MAPK信号转导通路参与了骨关节炎关节软骨破坏的病理过程。MEK1/2选择性阻滞剂PD98059可以在关节炎动物活体内有效抑制关节炎软骨破坏的程度,该作用可能与其有效抑制ERK1/2的磷酸化激活有关。 夏军 俞永林 杨丰建 任志伟 乔健 王静关键词:基质金属蛋白酶类 蛋白激酶抑制剂 慢病毒介导的大鼠白细胞介素-1I型受体基因RNA干扰对体外软骨细胞的作用 2012年 目的构建大鼠白细胞介素-1(IL-1)I型受体基因RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,并观察其对体外大鼠软骨细胞的作用。方法筛选确定IL-1I型受体(IL—1RI)基因的RNAi有效靶序列,使用293T细胞包装产生慢病毒。收集293T细胞上清液并浓缩,得到滴度为1×10^7TU/ml的病毒。使用携带有效干扰片段的慢病毒分别以转染倍数(MOI)值20和50感染体外培养的软骨细胞,Westernblot法测定软骨细胞中IL—1RI以及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的表达。结果适合感染软骨细胞的MOI为50,感染率〉70%。经过RNAi后,体外培养的软骨细胞IL-1RI以及MMP-1蛋白表达显著降低。结论慢病毒介导的大鼠IL-1RI基因干扰能够显著降低体外培养的软骨细胞中IL-1RI的表达,并进一步降低下游蛋白MMP-1的表达。 杨丰建 俞永林 林伟龙 黄东辉 陈聪 蔡晓晞关键词:慢病毒 白细胞介素-1 RNA干扰 软骨细胞 基质金属蛋白酶-1 膝骨关节炎的超声检查与应用 被引量:4 2008年 黄培杰 杨永明 俞永林关键词:膝骨关节炎 超声检查 关节软骨退变 影像学检查方法 临床综合征 膝关节退变 慢病毒介导RNAi沉默IL-1 Ⅰ型受体在大鼠骨关节炎MAPK信号转导中的作用 被引量:4 2009年 目的观察慢病毒介导的RNAi沉默IL-1Ⅰ型受体对实验性大鼠膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)中的丝裂素原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径的影响,探讨IL-1和MAPK在OA中的作用。方法40只SD大鼠随机分为A~D4组,每组10只。A~C组行单侧前交叉韧带和内侧半月板前1/3切除术,分别于术后第7和9天,A组关节腔中注射慢病毒介导IL-1Ⅰ型受体有效RNA干扰片段,B组注射慢病毒介导IL-1Ⅰ型受体无效RNA干扰片段,C组单纯注射生理盐水。D组为正常动物不做处理。术后4周处死动物,对关节软骨的状况进行评分。取膝关节软骨组织,用Western blot方法检测软骨组织中p38、ERK1/2和JNK1/2的蛋白质表达水平。结果大体观察显示:A组软骨退行性变显著轻于B、C组(P<0.05),但高于D组(P<0.05)。Western blot显示,A组p38蛋白质表达水平显著低于B、C组(P<0.05),与D组没有显著性差异(P>0.05)。A组ERK1/2和JNK1/2的表达显著低于B、C组(P<0.05),但要显著高于D组(P<0.05)。结论慢病毒介导RNA干扰沉默IL-1Ⅰ型受体能抑制MAPK的表达,特别是对其中的p38蛋白质抑制更为明显。 周斌 俞永林 杨丰建 任惠民关键词:骨关节炎 兔骨关节炎模型的建立以及关节炎软骨组织中MMP-1/-13的表达 被引量:23 2007年 目的评价家兔膝关节前交叉韧带切断(ACLT)及内侧半月板前1/3切除制作骨关节炎(OA)模型方法的可行性,同时探索关节炎发病的不同时期,关节软骨中基质金属蛋白酶(MMP)-1,MMP-13的基因表达、蛋白表达水平的变化情况。方法实验组家兔30只行ACLT及内侧半月板前1/3切除术造模,分别于术后4周、8周、12周处死10只,假手术对照组家兔10只于术后12周处死。进行股骨髁关节软骨退变的大体评分;取退变的软骨组织,用实时定量PCR(Real-time PCR)及Western blot印记杂交方法测定软骨组织中MMP-1和MMP-13的mRNA和蛋白表达水平。结果ACLT及内侧半月板前1/3切除术后4周即可见软骨退变,8周和12周时退变进一步加重,对照组无明显软骨退变,不同组动物关节软骨评分有统计学差异。MMP-1的mRNA表达和蛋白表达在正常对照组水平均较低,造模4周开始升高,到第8周及第12周持续升高,且mRNA表达和蛋白表达升高的趋势相同;MMP-13在造模4周时表达开始升高,mRNA表达和蛋白表达趋势相同,造模第8周时持续升高,但在造模第12周时MMP-13mRNA表达和蛋白表达下降。结论家兔膝关节ACLT及内侧半月板前1/3切除制作OA模型的方法简便可行,MMP-1和MMP-13在骨关节炎的发病过程中有不同程度的升高,可以作为OA研究的评价指标。本实验结果提示,在OA发展的过程中,MMP-1和MMP-13的表达不平行,二者调控通路可能存在差异。MMP-13的mRNA表达的变化趋势与其蛋白水平的变化趋势相符合,说明引起MMP-13在OA病程中晚期下降的调控发生在翻译前水平。 杨丰建 俞永林 乔健 夏军 任志伟 王静关键词:骨关节炎 基质金属蛋白酶 关节软骨 兔关节软骨细胞的分离培养及生物学特征 被引量:6 2006年 目的探讨兔关节软骨细胞分离培养的方法和生物学特性。方法从4周龄新西兰白兔关节分离培养软骨细胞,倒置显微镜下观察原代及传代培养的细胞形态学变化,并计数绘制生长曲线。测定细胞冻存复苏后的存活率。用甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学法了解葡萄糖胺多糖(GAGs),Ⅱ型胶原的合成情况并鉴定细胞。结果成功建立体外培养兔关节软骨细胞的实验方法。原代培养的软骨细胞呈多角形,传代3次后出现反分化。形态学、免疫化学染色显示细胞培养3代以内可以保持表型的稳定,冷冻复苏存活率为92%。结论本文建立的体外培养关节软骨细胞的方法简单可行。体外培养的兔软骨细胞表型能保持3代稳定,具有良好的生物学活性,可用于实验研究,可经深低温冷冻保存。 俞永林 任志伟 乔健 杨丰建 肖保国 金慰芳 王静关键词:关节软骨 软骨细胞 细胞培养 基质金属蛋白酶-1/13与信号通路激酶ERK1/2在兔骨关节炎软骨中的表达 被引量:10 2007年 目的利用家兔膝关节前交叉韧带切断(ACLT)及内侧半月板前1/3切除的方法制作骨关节炎(OA)模型,测定关节炎发病的不同时期,关节软骨中基质金属蛋白酶-1(MMP-1),基质金属蛋白酶-13(MMP-13)以及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达水平的变化情况,探索它们之间的变化规律及关系。方法实验组家兔30只行ACLT及内侧半月板前1/3切除术造模,分别于术后4w、8w、12w处死10只,假手术对照组家兔10只于术后12w处死。进行股骨髁关节软骨退变的大体评分;取退变的软骨组织,用Westernblot印记杂交方法测定软骨组织中MMP-1,MMP-13和ERK1/2的蛋白表达水平。结果ACLT及内侧半月板前1/3切除术后4w即可见软骨退变,8w和12w时退变进一步加重,对照组无明显软骨退变,不同组动物关节软骨评分差异有统计学意义。MMP-1和ERK1/2的蛋白表达在正常对照组水平均较低,造模4w开始升高,到第8w及第12w持续升高;而MMP-13在造模4w时表达开始升高,造模第8w时持续升高,但在造模第12w时MMP-13的蛋白表达下降。结论家兔膝关节ACLT及内侧半月板前1/3切除制作OA模型的方法简便可行,MMP-1和MMP-13在骨关节炎的发病过程中有不同程度的升高,可以作为OA研究的评价指标。本实验结果提示,在OA发展的过程中,MMP-1和MMP-13的表达不平行,两者上游信号调控通路可能存在差异。蛋白激酶ERK1/2的表达水平从造模第4w开始持续升高,说明ERK1/2信号转导通路在骨关节炎发病过程中持续发挥作用。 杨丰建 俞永林 夏军 任志伟 乔健关键词:骨关节炎 基质金属蛋白酶 软骨 关节 前交叉韧带 蛋白激酶类