沈阳市科技计划项目(F11-264-1-38)
- 作品数：12 被引量：53H指数：4
- 相关作者：王力宁范秋灵姜奕杨刚马健飞更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院辽宁中医药大学附属医院辽宁省人民医院更多>>
- 发文基金：沈阳市科技计划项目国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 坎地沙坦不同治疗时机对2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏硝化氧化应激的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾内硝化氧化应激的影响及其作用机制。方法:KK/Ta小鼠随机分为(1)非治疗组;(2)早期治疗组:自6周龄起经口予坎地沙坦(4mg·kg-1·d-1)治疗;(3)晚期治疗组:自12周龄起予坎地沙坦治疗,正常对照组采用BALB/c小鼠。应用免疫组化和免疫荧光染色检测肾脏中硝化氧化应激的标志物硝基酪氨酸,诱导型(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白的表达,竞争性RT-PCR检测iNOS和eNOSmRNA的表达。同时测定尿白蛋白排泄率,血压和糖耐量等临床指标。结果:28周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白排泄率增加,肾脏iNOSmRNA和蛋白表达上调,硝基酪氨酸的形成增加。坎地沙坦治疗减少尿白蛋白排泄率,抑制肾脏iNOSmRNA和蛋白的表达,减少硝基酪氨酸的形成,早期治疗组和晚期治疗组的作用差异无统计学意义。4组小鼠eNOSmRNA和蛋白的表达水平无差异。结论:坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏iNOS的表达,抑制过氧亚硝基阴离子的形成,抑制硝化氧化应激反应,发挥其降低尿白蛋白排泄率等肾脏保护作用。
- 范秋灵蒲实李卅立董雪竹张丛笑杨刚姜奕王力宁
- 关键词：坎地沙坦过氧亚硝基阴离子诱导型一氧化氮合酶
- 乌索酸改善高糖诱导系膜细胞损伤的机制被引量：30
- 2015年
- 目的 探讨乌索酸能否通过抑制高糖状态下系膜细胞内miRNA-21的过表达,上调其靶基因PTEN的表达,抑制磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）-Akt-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的激活,诱导自噬,减少细胞外基质堆积,发挥其肾脏保护作用.方法 高糖培养大鼠肾小球系膜细胞,以PI3K抑制剂LY294002以及不同剂量乌索酸进行干预,应用甲基噻唑基四唑（MTT）法观察细胞增殖能力,总蛋白/总细胞数测定细胞肥大,Western印迹和实时定量PCR检测PTEN-PI3K-Akt-mTOR信号通路活性、Ⅰ型胶原及自噬标志物.透射电镜观察自噬体的形成.结果 与正常对照组相比,高糖培养的系膜细胞出现显著的肥大、增殖,细胞内miRNA-21表达明显上调,PTEN蛋白及mRNA的表达明显下调,p85PI3K、磷酸化（p）-Akt、p-mTOR、Ⅰ型胶原、p62/SQSTMI表达明显增加,LC3 II表达明显降低,差异均有统计学意义（均P＜ 0.01）.与高糖组相比,乌索酸干预组及LY294002组细胞肥大、增殖程度均明显降低,p85PI3K、p-Akt、p-mTOR、Ⅰ型胶原、p62/SQSTMI的表达均明显降低,LC3 II表达明显升高,差异均有统计学意义（均P＜ 0.01）;但LY294002组细胞内miRNA-21和PTEN的表达与高糖组差异无统计学意义,而乌索酸干预组细胞内miRNA-21的表达明显下调,PTEN的表达明显上调,差异均有统计学意义（均P＜ 0.01）.结论 乌索酸可能通过抑制高糖培养系膜细胞内miRNA-21的过表达,上调PTEN表达,抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路异常活化,增强自噬从而减少细胞外基质堆积,减轻细胞的肥大、增殖.
- 卢新星范秋灵徐莉李琳徐艳艳张东成王力宁
- 关键词：糖尿病肾病自噬系膜细胞乌索酸MIRNA-21MIRNA-21
- 坎地沙坦抑制2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏氧化应激反应被引量：2
- 2012年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏氧化应激的影响及其作用机制。方法糖尿病KK/Ta小鼠随机分为:非治疗组;早期治疗组:自6周龄起经口给予坎地沙坦(4 mg.kg-.1d-1);晚期治疗组:自12周龄起给予坎地沙坦(4 mg.kg-1.d-1)。正常对照组采用BALB/c小鼠。应用免疫组化染色检测肾脏中DNA氧化损伤的标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG),免疫组化和竞争性RT-PCR检测NADPH氧化酶p47phox亚基mRNA和蛋白的表达。同时测定尿白蛋白排泄率、血压和糖耐量等临床指标。结果与同龄BALB/c小鼠比较,28周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白排泄率增加(P<0.01),肾脏NADPH氧化酶p47phox的mRNA和蛋白表达上调(P<0.01),8-OHdG的形成增加(P<0.01)。坎地沙坦治疗减少尿白蛋白排泄率(P<0.01),抑制肾脏NADPH氧化酶p47phox mRNA和蛋白的表达(P<0.01),减少8-OHdG的形成(P<0.01),早期治疗组和晚期治疗组的作用无统计学差异(P>0.05)。结论坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏NADPH氧化酶p47phox的表达,抑制氧化应激反应,延缓糖尿病肾病的进展。
- 范秋灵李卅立蒲实董雪竹张玉侠冯江敏马健飞姜奕王力宁
- 关键词：糖尿病肾病坎地沙坦氧化应激
- 多配体蛋白聚糖4是糖尿病肾病的候选基因被引量：2
- 2012年
- 目的在2型糖尿病肾病（DN）白蛋白尿易感基因定位的基础上，进一步筛选白蛋白尿易感基因位点（UA-1）区域附近的候选基因。方法提取20周龄雄性KK／Ta（n=3）和BALB／c（n=2）小鼠肾脏总RNA，应用Affymetrix Murine GenomeU74Av2基因芯片检测肾脏基因表达谱。选择UA-1区域的差异表达基因多配体蛋白聚糖4（syndecan-4），竞争性RT-PCR验证基因芯片的结果。提取KK／Ta、BALB／c小鼠的基因组DNA，进行syndecan．4基因编码区和启动子区域的序列分析。结果在2型糖尿病KK／Ta小鼠UA-1区域附近存在着约10个差异表达基因。其中syndecan-4在20周龄KK／Ta小鼠肾脏中的表达上调，为BALB／c小鼠的26．1倍。在syndecan．4基因编码区存在2个基因多态性，分别为A93C和T216C多态性，2者均为同义突变。在syndecan-4基因启动子区域存在3个基因多态性，分别为-T263C、-T396C与-G669A多态性。TATA框位于转录起始位点上游321bp处，-T263C处恰好为转录因子Clox的结合位点。结论syndecan-4基因位于2型糖尿病UA-1附近区域，在20周龄KK／Ta小鼠肾脏中的表达明显上调，是DN的候选基因。syndecan-4启动子处的基因多态性可能为其差异表达的原因。
- 范秋灵李卅立蒲实郭佳音岳媛张玉侠冯江敏马健飞姜奕王力宁
- 关键词：糖尿病肾病多态性单核苷酸候选基因
- 自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球microRNA表达谱和氯沙坦治疗效应被引量：4
- 2012年
- 目的分析糖尿病肾病（DN）发病过程中肾小球miRNA表达谱的变化，观察血管紧张素受体拮抗剂（ARB）氯沙坦对DN肾小球miRNA表达谱的影响，确认在DN发病过程中发挥关键作用的miRNA。方法8周龄KKAy小鼠随机分为氯沙坦治疗组（10mg kg-1·d-1）和非治疗组，C57BL／6小鼠作为正常对照组。于20周龄检测体质量、随机血糖、尿微量白蛋白、尿肌酐，观察肾脏形态改变。应用磁珠灌注法分离肾小球，提取总RNA，应用Affymetri。GeneChipmiRNA芯片，分析KKAy小鼠肾小球microRNA表达谱的变化，以及氯沙坦对microRNA表达谱的影响。结果KKAy小鼠的体质量和血糖较正常对照C57BL／6组小鼠显著升高（均P〈0．05），氯沙坦治疗显著改善2型糖尿病KKAy小鼠的尿白蛋白／肌酐比值[（539．71±100．23）mg／g比（728．00±177．19）mg／g，P〈0．051和肾脏病理损害，而对血糖无影响。miRNA芯片分析结果发现，与正常对照C57BL／6小鼠相比，20周龄KKAy小鼠肾小球内10个miRNA的表达上调；12个miRNA的表达下调。与KKAy非治疗组小鼠相比，20周龄氯沙坦治疗组KKAy小鼠肾小球内共有4个miRNA表达下调，其中miR-503和miR-181d在KKAy非治疗组小鼠肾小球内的表达显著上调，氯沙坦治疗可抑制其过表达。结论miR-503和miR-181d在糖尿病KKAy小鼠肾小球内的表达显著上调，氯沙坦治疗可抑制其在糖尿病状态下的异常表达，可能为糖尿病肾病新的治疗靶点。
- 范秋灵张丛笑刘晓丹杨刚姜奕董雪竹冯江敏马健飞张玉侠王力宁
- 关键词：糖尿病肾病肾小球微小RNASKKAY小鼠
- 坎地沙坦不同治疗时机对2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏血管紧张素1型和2型受体表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏血管紧张素1型受体(AT1)和2型受体(AT2)表达的影响。方法:KK/Ta小鼠随机分为:非治疗组;早期治疗组:自6周龄起经口予坎地沙坦(4mg.kg-1.d-1)治疗;晚期治疗组:自12周龄起予坎地沙坦治疗,正常对照组采用BALB/c小鼠。测定尿白蛋白排泄率、血压和糖耐量,计算总肾小球面积(WGA)、肾小球丛面积(GTA),细胞外系膜基质面积(EC-MA)和肾小球内细胞核数目(NIGCN)。免疫荧光和免疫组化染色检测肾脏中AT1和AT2的表达。结果:8周龄KK/Ta小鼠尿白蛋白/尿肌酐比率显著增加[(427.49±89.37)mg/g vs.(9.54±3.25)mg/g,P<0.01],WGA、GTA、ECMA和NIGCN增多,肾小球内AT1的表达增加,AT2的表达减少。坎地沙坦治疗显著减少KK/Ta小鼠尿白蛋白/尿肌酐比率[早期治疗组(32.18±9.41)mg/g,晚期治疗组(53.20±7.26)mg/g,P<0.01],减轻肾脏病理损害,抑制AT1的表达,上调AT2的表达,早期治疗组和晚期治疗组的作用无显著性差异。结论:KK/Ta小鼠肾脏中AT1受体表达增加,AT2受体表达减少。坎地沙坦治疗能够抑制AT1受体、上调AT2受体的表达,发挥其减少白蛋白尿,减轻糖尿病肾病病理损害的肾脏保护作用。
- 范秋灵肇晓明蒲实李卅立杨刚姜奕王力宁
- 关键词：糖尿病肾病坎地沙坦血管紧张素1型受体
- 乌索酸对高糖诱导人肾小球系膜细胞增殖肥大及细胞外基质分泌的影响
- 2017年
- 目的探讨乌索酸(UA)对高糖(HG)所致人系膜细胞(RMC)损伤的保护作用,保护机制是否通过抑制系膜细胞增殖、肥大及细胞外基质分泌而完成。方法取对数生长期细胞,分为空白对照组、模型组、对照组、实验A、B、C组。空白对照组予以5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖培养;模型组予以30.0 mmol·L^(-1)葡萄糖培养;对照组予以5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+24.5 mmol·L^(-1)甘露醇培养;实验A、B、C组分别予以30.0 mmol·L^(-1)葡萄糖+0.5,1.0,2.0μmol·L^(-1)乌索酸培养。6组均给药48 h。用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,用PI单染流式细胞仪检测细胞周期及细胞肥大,用逆转录聚合酶链式反应法及免疫印迹法检测转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、纤维连接蛋白(FN)mRNA及蛋白表达。结果给药48 h后,空白对照组、模型组、对照组、实验A、B、C组的细胞增殖分别为(3.66±0.32),(4.33±0.23),(3.50±0.22),(3.93±0.11),(3.59±0.06)和(0.67±0.16)。模型组和空白对照组的细胞增殖率比较,差异有统计学意义(P<0.05);实验B组、实验C组与模型组的细胞增殖率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验A组与空白对照组及对照组的细胞增殖率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);实验C组大部分系膜细胞已经死亡,设定实验B组为后续实验最终实验组。空白对照组、模型组、对照组、实验组的TGF-β_1mRNA分别(24.80±0.90),(29.89±1.06),(23.72±0.87)和(25.06±0.11),FN mRNA分别为(42.03±0.57),(54.55±1.20),(42.72±0.40)和(45.32±0.51),TGF-β_1蛋白分别为(54.92±3.28),(125.93±3.58),(25.11±0.51)和(101.23±7.55),FN蛋白分别为(46.44±7.90),(66.13±13.10),(34.98±5.52)和(28.70±5.70);模型组的上述指标与空白对照组及实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论乌索酸通过抑制系膜细胞增殖、肥大及细胞外基质分泌,从而减轻高糖诱导的系膜细胞损伤。
- 岳媛岳媛范秋灵都姝妍远方徐莉李琳刘楠姜奕
- 关键词：人系膜细胞乌索酸肥大增殖细胞外基质
- 坎地沙坦不同治疗时机对2型糖尿病KK／Ta小鼠肾脏晚期糖基化终末产物形成及其受体表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂坎地沙坦治疗对自发性2型糖尿病KK／Ta小鼠肾脏晚期糖基化终末产物形成及其受体（RAGE）表达的影响。方法KK／Ta小鼠（n=72）随机分为非治疗组（n=24）；早期治疗组（n=24）：自6周龄起经口予坎地沙坦[4mS／（kg·d）]治疗；晚期治疗组（n=24）：自12周龄起予坎地沙坦治疗。正常对照组采用BALB／c小鼠（n=24）。应用免疫荧光和免疫组化染色检测肾脏中晚期糖基化终末产物一羧甲基赖氨酸（CML）、RAGE蛋白的表达，竞争性RT-PCR检测RAGEmRNA的表达，同时测定尿白蛋白排泄率，血压和糖耐量等临床指标。结果28周龄KK／Ta小鼠尿白蛋白／尿肌酐比率显著增加[（427．494±89．37）mg／gvs（9．544±3．25）mg／g，P〈0．01]，足细胞RAGEmRNA和蛋白表达上调，CML的形成增加。坎地沙坦治疗显著减少了KK／Ta小鼠尿白蛋白／尿肌酐比率[早期治疗组（32．184±9．41）mg／g，晚期治疗组（53．204±26）mg／g，P〈0．01]，抑制肾脏RAGE mRNA和蛋白的表达，减少CML的形成，但早期治疗组和晚期治疗组的作用比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论坎地沙坦治疗通过下调糖尿病状态下肾脏RAGE的表达，阻断AGEs-RAGE的相互作用，减少AGEs的生成，发挥其降低尿白蛋白排泄率和改善肾脏病理损害的保护作用。
- 范秋灵肇晓明蒲实李卅立杨刚张丛笑姜奕王力宁
- 氯沙坦对自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球蛋白表达谱的影响被引量：4
- 2012年
- 目的利用比较蛋白质组学双向电泳技术研究体系来观察血管紧张素受体拮抗剂（ARB）氯沙坦对自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球蛋白表达谱的影响。方法8周龄自发性2型糖尿病KKAy小鼠随机分为氯沙坦治疗组（饮用水中喂入氯沙坦粉末10mg·kg^-1·d^-1）和非治疗组；8周龄C57BL／6小鼠作为正常对照组。饲养12周后，经胸主动脉磁珠灌流分离肾小球，提取肾小球蛋白。DIGE最小荧光标记法标记，行二维荧光差异凝胶电泳。应用Typhoon多功能成像系统扫描凝胶，DeCyder2D差异分析软件进行图像分析。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定差异表达蛋白质。结果KKAy小鼠的体质量、血糖和尿白蛋白排泄率较正常对照C57BL／6小鼠显著升高（均P〈0．05），氯沙坦治疗显著改善2型糖尿病KKAy小鼠尿白蛋白肌酐比[（539．71±100．23）mg／g比（728±177．19）mg／g]、肾小球基底膜增厚和系膜基质增生等肾脏病理损害，而对血糖无影响。通过DeCyder2D差异分析软件，发现KKAy氯沙坦治疗组与KKAy非治疗组肾小球内表达差异大于1．1倍的蛋白质斑点62个。经肽质量指纹图分析，鉴定出41种蛋白质。其中表达上调的蛋白28种，包括甘油激酶、亚硫酸盐氧化酶、甘氨酸脒基转移酶、腺苷高半胱氨酸酶等；表达下调的蛋白质13种，包括3．巯基丙酮酸硫基转移酶、ATP合酶亚单位d、60000热休克蛋白、线粒体应激蛋白70（又名75000葡萄糖调节蛋白，GRP75）等。有6种蛋白在20周龄KKAy小鼠和C57BL／6小鼠肾小球内存在差异表达，氯沙坦治疗抑制了其在糖尿病状态下的表达变化，包括丙酮酸脱氢酶复合物的二氢硫辛酰赖氨酸残基乙酰基转移酶组分、琥珀酰辅酶A连接酶[GDP-形成1亚单位β、ATP合酶亚单位d、GRP75、核苷二磷酸盐结合部分X模体19和硒结合蛋白1。结论氯沙坦可明显减轻KKAy
- 范秋灵杨刚刘晓丹马健飞冯江敏姜奕王力宁
- 关键词：糖尿病肾病肾小球蛋白质组学氯沙坦KKAY小鼠
- 自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏基因表达谱的研究被引量：1
- 2012年
- 目的:应用基因芯片技术研究自发性2型糖尿病KK/Ta小鼠肾脏基因表达谱,旨在寻找糖尿病肾病的易感基因。方法:提取20周龄雄性KK/Ta(n=3)和BALB/c(n=2)小鼠肾脏总RNA,应用Affymetrix公司生产的Affymetrix Murine Genome U74Av2基因芯片检测肾脏基因表达谱。选择差异表达基因,通过竞争性RT-PCR反应验证基因芯片的结果。结果:98个已知基因和31个表达序列标签(ESTs)在20周龄KK/Ta与BALB/c小鼠的肾脏中存在着差异表达。与BALB/c小鼠相比,KK/Ta小鼠肾脏中21个已知基因和7个EST表达上调,77个已知基因和24个EST表达下调。竞争性RT-PCR反应确认了基因芯片研究的结果。结论:KK/Ta小鼠肾脏中的差异表达基因广泛参与细胞外基质的合成与降解、信号传导、转录调节与蛋白质合成、离子转运、葡萄糖与脂类代谢等。糖尿病肾病易感基因位点UA-1区域的差异表达基因S-腺苷高同型半胱氨酸水解酶基因Ahcy为糖尿病肾病的可能易感基因。
- 范秋灵董雪竹王娟杨爽陈莹姜奕王力宁
- 关键词：糖尿病肾病基因芯片易感基因
