陕西省科学技术研究发展计划项目(2011-K12-19)
- 作品数：11 被引量：60H指数：4
- 相关作者：郑见宝孙学军贺赛陈南征魏光兵更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学医学院第二附属医院陕西省人民医院更多>>
- 发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目国家自然科学基金陕西省科技统筹创新工程计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腹腔镜对比传统开放手术治疗直肠癌临床效果的Meta分析被引量：25
- 2013年
- 目的:对比腹腔镜直肠癌手术和传统开腹手术的临床效果。方法:检索近20年来发表的关于比较腹腔镜与传统开腹手术治疗直肠癌临床效果的随机对照试验。按纳入标准筛选文献,用Review Manager 5.1软件行Meta分析。结果:最终纳入14个随机对照试验,共2 114例患者,其中腹腔镜组1 111例,开腹组1 003例。腔镜组与传统开腹组比较,术中出血量少、胃肠功能恢复时间及下床活动时间早、住院时间缩短、伤口感染减少,差异均有统计学意义(均P<0.05);手术并发症发生率包括输尿管损伤、尿潴留、肠梗阻、吻合口瘘,切口疝,两组组间差异均无统计学意义(均P>0.05);两组在淋巴结清扫数量、标本长度、环周切缘阳性率、局部复发、切口或穿刺口种植转移、远处转移、3,5年总体生存率、3,5年无病生存率等指标上均无统计学差异(均P>0.05)。结论:腹腔镜直肠癌手术术中出血少、术后恢复快、住院时间短,肿瘤根治效果与传统开腹手术相仿,可作为治疗直肠癌的标准术式。
- 赵军抗孙学军郑见宝贺赛
- 关键词：直肠肿瘤腹腔镜随机对照试验META分析
- 人神经菌毛素-1基因shRNA慢病毒载体的构建被引量：1
- 2012年
- 目的:构建并鉴定靶向人神经菌毛素-1(NRP-1)基因的小发卡RNA的慢病毒载体。方法:针对NRP-1mRNA设计了4条shRNA,并构建pGCSIL-RFP-shNRP1慢病毒质粒,PCR扩增阳性克隆并测序鉴定。用pGCSIL-RFP-shNRP1、pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度。将慢病毒干扰RNA及含有NRP-1过表达载体共转染293T细胞,Western blot法检测Flag表达,观察NRP-1蛋白相对表达抑制效果。结果:PCR和测序结果与设计的干扰序列一致,病毒滴度达1×109Tu/mL。转染细胞中NRP-1蛋白相对表达显著降低。结论:成功构建了高效率的人NRP-1基因shRNA慢病毒载体。
- 郑见宝耿智敏陈强王林
- 关键词：NEUROPILIN-1RNA干扰
- 抑癌基因RASSF1A在结肠癌中的表达研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨抑癌基因Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因在结肠癌组织以及相应正常结肠组织中的表达并分析其表达与结肠癌临床病理因素之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法和Western blot法检测34例结肠癌手术标本和相应的正常结肠组织中RASSF1A蛋白的表达水平,应用RT-PCR法检测RASSF1A mRNA在结肠癌和正常结肠组织中的表达情况。结果①免疫组织化学法结果:结肠癌组织中RASSF1A蛋白表达阳性率明显低于其在正常结肠组织中的表达阳性率〔35.3%(12/34)比97.1%(33/34),P<0.05〕。结肠癌组织中RASSF1A蛋白的表达与肿瘤分化程度和TNM分期均有关(P<0.05),即高、中分化及TNM分期较低(Ⅰ+Ⅱ期)者的RASSF1A蛋白表达阳性率较高(P<0.05)。②Western blot法结果:在34例结肠癌患者中RASSF1A蛋白表达水平明显低于其在相应的正常结肠组织中的表达水平〔0.316 8±0.019 6比0.914 4±0.177 6,P<0.05〕;该结果与RT-PCR法检测到的RASSF1AmRNA表达情况基本一致〔0.158 9±0.223 7和0.572 3±0.193 9,P<0.05〕。结论 RASSF1A基因的失表达可能在原发性结肠癌的发生、发展中起重要作用,检测RASSF1A的表达情况可为结肠癌的早期诊断提供帮助。
- 贺赛孙学军郑见宝王炜周培华魏光兵王晖姚建峰张立禄韶英杜俊凯
- 关键词：结肠癌RASSFLAWESTERNBLOTRT-PCR
- 肠系膜上动脉压迫综合征的诊断与治疗被引量：16
- 2013年
- 目的探讨肠系膜上动脉压迫综合征的诊断和治疗方法。方法对笔者所在医院2003年8月至2010年8月期间收治的16例肠系膜上动脉压迫综合征患者的临床资料进行回顾性分析。结果 16例肠系膜上动脉压迫综合征患者的临床表现主要为反复发作性进食后上腹部胀痛或隐痛、呕吐且呕吐后症状可缓解(12例),恶心、反酸及嗳气(13例),饭后饱胀感或腹胀(16例),以及食欲不振(13例)。16例患者均行上消化道造影检查明确诊断;3例行腹部彩色多普勒超声检查符合诊断;4例行CT检查排除十二指肠周围占位性病变。16例患者均先行非手术治疗,其中10例患者的腹痛缓解,呕吐消失,好转出院;另6例因治疗无效而行手术治疗,其中行Treitz韧带松解加十二指肠空肠侧侧吻合术2例,行十二指肠空肠Roux-en-Y吻合术3例,行胃大部分切除、胃空肠吻合术(BillrothⅡ式)1例。术后除1例行Treitz韧带松解加十二指肠空肠侧侧吻合术的患者仍有间断腹胀伴恶心外,其余患者均痊愈。结论肠系膜上动脉压迫综合征主要表现为上腹部胀痛、呕吐、食欲不振及消瘦,确诊依赖于上消化道造影。对其治疗首选非手术治疗,对非手术治疗无效者可采用手术治疗,其中十二指肠空肠Roux-en-Y吻合术是一种有效、易行的手术方式。
- 郑见宝孙学军王炜张仕运刘栋陈南征张超
- 关键词：肠系膜上动脉压迫综合征
- 多效生长因子在结直肠癌组织中的表达及其临床意义被引量：5
- 2013年
- 目的探讨多效生长因子(pleiotrophin,PTN)mRNA及其蛋白在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法采用原位杂交和免疫组化染色方法,检测结直肠癌组织和正常结直肠组织中PTN mRNA及其蛋白的表达,并分析其与结直肠癌患者临床病理特征的关系。结果结直肠癌组PTN mRNA及其蛋白的表达阳性率分别为63.9%(53/83)和60.2%(50/83),均高于(P=0.008,P=0.002)正常对照组的40.7%(22/54)和33.3%(18/54)。结直肠癌组织中PTN mRNA及其蛋白的表达与肿瘤分化程度和TNM分期均有关(P<0.05),Ⅲ～Ⅳ期者和低分化者的表达阳性率均较高;而与年龄、性别及肿瘤类型均无关(P>0.05)。结论 PTN mRNA及其蛋白在结直肠癌组织中高表达,其可能参与了结直肠癌的浸润和转移。PTN可作为预测结直肠癌转移和预后的指标之一。
- 陈南征孙学军贺赛郑见宝任燕飞王炜魏光兵姚建锋张立
- 关键词：多效生长因子结直肠癌组织芯片原位杂交免疫组化染色
- 缺氧诱导的肿瘤特异性基因治疗载体的靶向性鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的检测本课题组已构建的缺氧诱导的hTERT基因启动子(5HRE-hTERTp)调控的基因表达载体调控元件的肿瘤特异性和对缺氧诱导的反应性。方法 MTT法检测不同浓度(100、200、300、400、500μmol/L)CoCl2对LoVo细胞活力以及增殖的影响。收集前期已包装成功的缺氧反应元件(hypoxia-response elements,HRE)和人端粒酶催化亚单位启动子hTERTp联合调控CDX2表达的慢病毒表达载体pLVX-5HRE-hTERTp-CDX2-3FLAG(5HhC)病毒液,感染hTERT+LoVo细胞及hTERT-HK-2细胞,细胞免疫组化法验证该治疗载体的靶向性;复苏前期筛选的稳定表达5HhC的LoVo细胞(5HhC/LoVo),用缺氧模拟剂CoCl2模拟缺氧微环境,Western blot和RT-PCR分别检测缺氧调控下CDX2的表达水平。结果结肠癌细胞株LoVo在不同浓度CoCl2环境下随缺氧时间的延长,细胞活力及增殖均受到抑制,在高浓度(300、400、500μmol/L)作用下抑制效果更加明显;5HhC病毒成功感染hTERT+LoVo细胞,而在hTERT-HK-2细胞中不表达;Western blot和RT-PCR证实缺氧可上调5HhC/LoVo细胞中CDX2蛋白和mRNA的表达,且在300μmol/L CoCl2作用24h其蛋白表达量最高。结论缺氧微环境可明显上调hTERTp靶向性的治疗载体5HhC中抑癌基因CDX2的表达。
- 贺赛郑见宝孙学军陈南征周培华贾蓬勃魏光兵王晖姚建锋禄韶英
- 关键词：缺氧基因治疗载体
- hTERT,CEA及CMV启动子在人结肠癌细胞株中的转录活性比较被引量：4
- 2014年
- 目的:比较人端粒酶催化亚单位(hTERT),癌胚抗原(CEA)及巨细胞病毒(CMV)启动子在人结肠癌细胞株LoVo和SW480中的转录活性。方法:设计引物应用PCR法从人结肠癌基因组中克隆hTERT和CEA启动子;用双酶切和PCR法切除原始载体pLVX-EGFP-3FLAG中的CMV启动子后,将hTERT,CEA启动子与该载体重组,构建出重组质粒pLVX-hTERTp-EGFP-3FLAG和pLVX-CEAp-EGFP-3FLAG;将上述两种质粒及原始载体(含CMV启动子)分别瞬时转染人结肠癌细胞株LoVo和SW480后,检测两种细胞株绿色荧光蛋白表达。结果:经PCR,酶切及测序鉴定,克隆及载体构建完全正确。CMV,hTERT及CEA启动子的转录活性(绿色荧光细胞数/总细胞数)在LoVo细胞中依次为54.7%,33.0%,9.5%;在SW480中依次为16.5%,10.1%,8.5%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:在人结肠癌细胞株中,转录活性以CMV启动子最高,hTERT启动子次之,CEA启动子最低。该结果可为结肠癌的靶向性基因治疗研究提供参考。
- 贺赛孙学军郑见宝陈南征任燕飞Rajendra Gurung魏光兵张立姚建峰尉春艳
- 关键词：结肠肿瘤转录启动子
- 尾型同源盒转录因子2 shRNA慢病毒表达载体的构建及其转染对结肠癌细胞生长的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:构建尾型同源盒转录因子2(CDX2)shRNA慢病毒表达载体,并观察下调CDX2基因其对结肠癌细胞生长的影响。方法:根据CDX2 m RNA序列设计shRNA,并合成shRNA的互补序列,通过连接酶链接到GV248载体上,用测序方法鉴定阳性克隆后,将构建好的慢病毒表达载体与慢病毒包装载体用Lpofectamine 2000共转染293T细胞,产生慢病毒颗粒并用稀释法进行滴度测定。将CDX2 shRNA慢病毒表达载体转染人结肠癌细胞SW480、HT29后,分别用q RT-PCR和Western blot检测CDX2 m RNA及蛋白水平,CCK8实验及克隆形成实验检测细胞增殖能力。结果:DNA测序鉴定证实,CDX2 shRNA表达片段正确插入GV248载体中,包装后的病毒滴度为1×109TU/m L;SW480、HT29细胞转染CDX2-shRNA慢病毒表达载体后,CDX2 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(均P<0.05),但细胞的增殖与克隆形成能力无明显改变(均P>0.05)。结论:成功构建shRNA慢病毒表达载体,其转染结肠癌细胞后能有效地抑制CDX2基因的表达;下调CDX2基因对人结肠癌细胞的增殖无明显影响。
- 王训凯郑见宝孙学军王孝珑余钧辉李孝斌
- 关键词：结肠肿瘤RNA干扰
- 人神经菌毛素-1基因重组腺病毒的构建及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建含有人神经菌毛素1（NRP-1）基因和3Flag标签蛋白基因的腺病毒载体，为研究该基因对肿瘤细胞与其周围间质细胞的相互作用的影响提供实验基础。方法应用AgeⅠ和NheⅠ限制性内切酶酶切含有人NRP-1基因的质粒，再将其与酶切线性化的pDC3153Flag载体片段连接，构建穿梭质粒pDC315-NRP-1-3Flag；应用腺病毒骨架质粒pBHGlox△E13Cre与此穿梭质粒共转染HEK293细胞，产生重组腺病毒，进而对重组腺病毒进行扩增、纯化及滴度测定；用PCR和基因测序方法验证穿梭质粒pDC315NRP-1-3Flag的构建；再通过荧光显微镜和Westernblot方法，分别检测质粒pDC315-NRP1-3F1ag和重组腺病毒转染HEK293细胞后NRP1蛋白的表达情况。结果经PCR和测序分析，证实穿梭质粒pDC315-NRP-1-3F1ag与设计一致；穿梭质粒pDC315-NRP13Flag和重组腺病毒分别转染HEK293细胞后，经WesternBlot均检测出在95-130ku处有条特征带，其大小和NRP-1-3F1ag融合蛋白（104ku）相吻合；滴度测定为2．00E＋11PFu／mL。结论成功构建了人NRP-1基因重组腺病毒载体，并能在HEK293细胞中表达。
- 郑见宝耿智敏陈强王林
- 关键词：重组腺病毒载体肿瘤微环境
- 双靶向调控CDX2基因慢病毒表达载体的构建及鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的构建5个拷贝的HRE和hTERTp双靶向调控表达CDX2基因的慢病毒表达载体,并在结肠癌LoVo细胞中检测其启动活性。方法设计引物应用PCR法从人结肠癌基因组中克隆获得hTERT启动子,用双酶切和PCR法切除笔者所在课题组已构建的载体pLEGFP-5HRE-CEAp中的CEA启动子后,将hTERT启动子与该载体重组,构建出pLEGFP-5HRE-hTERTp;提取5HRE-hTERTp基因序列,同时双酶切切除pLVX-EGFP-3FLAG载体中的CMV启动子,同源重组构建获得pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG载体。设计引物应用PCR法从笔者所在课题组已构建的GV230-CDX2-EGFP载体中克隆获得CDX2基因序列,用双酶切和PCR法切除载体pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG中的EGFP后,将CDX2基因序列与该载体重组,构建出pLVX-5HREhTERTp-CDX2-3FLAG。应用pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG载体瞬时转染体外培养的人结肠癌LoVo细胞,通过观察绿色荧光蛋白EGFP的表达,鉴定hTERTp的启动活性。结果经PCR和测序分析,pLEGFP-5HREhTERTp、pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG和pLVX-5HRE-hTERTp-CDX2-3FLAG 3组质粒与设计一致,测序正确。将pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG载体瞬时转染体外培养的人结肠癌LoVo细胞,有绿色荧光表达,提示hTERT启动子能够有效启动下游基因的表达。结论成功构建了pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG及pLVX-5HRE-hTERTp-CDX2-3FLAG载体,为后续的体外和体内研究打下了基础。
- 郑见宝贺赛孙学军任燕飞陈南征张仕运刘栋张立王晖
- 关键词：端粒酶慢病毒载体基因治疗
