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利用双标记mTn5构建甲基杆菌MB200突变体库的研究被引量：5: 2008年; Methylobacterium sp. MB200是一种粉红色的、兼性甲基营养菌,它能以单碳化合物作为唯一碳源和能源,因此,可以作为氨基酸、工业酶等的生产菌株。以M. sp. MB200一碳代谢途径作为主要研究对象,利用mTn5-gusA-pgfp21转座子构建了甲醇利用菌的突变体库,在含有丁二酸的培养基上共获得了约12000株突变体,其中,甲醇营养缺陷的突变体119株,表现GUS活性的突变体1542株。然后,根据转座子已知序列,运用TAIL-PCR的方法克隆到了突变基因的部分序列,为进一步研究一碳代谢基因以及氨基酸和工业酶等的生产打下了基础。; 申佩弘晁红军宋修鹏武波唐咸来; 关键词：转座子突变体 TAIL-PCR

甲醇利用菌MB200丝氨酸乙醛酸氨基转移酶基因(sga)的克隆、突变及对产L-丝氨酸的影响被引量：2: 2008年; sga基因是大多数Methylobacteriumsp.中丝氨酸循环途径里的一个关键酶基因,与单碳化合物的同化及二碳化合物的代谢有着密切的关系。根据已报道的M.extorquensAM1的sga基因序列,合成寡核苷酸引物,用本实验室保存的甲醇利用菌M.sp.MB200的染色体DNA为模板,通过PCR方法扩增出sga基因,测序分析表明该基因与M.extorquensAM1的sga基因在核苷酸水平上有93%的同源性,氨基酸水平上具有85%的同源性。利用自杀质粒pK18mob构建含有sga基因部分片段的重组质粒,通过三亲本结合后导入原始菌株MB200中,经过进一步同源单交换,sga基因被pK18mob插入突变,利用PCR和Southern杂交进行验证,选择发生正向突变的突变株MB200sTB用于进一步研究分析。分析结果表明突变菌株的丝氨酸乙醛酸氨基转移酶(SGAT)的酶活性消失,同时失去了在以甲醇为唯一碳源的培养基上生长的能力,不能再合成L-丝氨酸,但仍能以二碳化合物和多碳化合物进行生长。; 申佩弘王亚莉武波; 关键词：MB200 L-丝氨酸突变菌株

甲基营养菌的研究进展被引量：15: 2009年; 甲基营养菌是一类能够利用一碳化合物作为唯一碳源和能源的微生物,它们在自然界分布广泛。研究表明,甲基营养菌能够直接利用一碳化合物,将其转化成自身代谢的一碳单位,并为生物体提供能源和碳骨架,这组成了一碳代谢的主要部分,它是一种新的代谢体系,可以作为一种新的代谢模式来研究生物代谢和生物进化。本文结合本实验室Methylobacterium sp.MB200的研究情况,主要从分类学、代谢途径、基因组学和应用等方面,论述了甲基营养菌的研究进展。; 晁红军宋修鹏孙继华申佩弘武波

产L-丝氨酸的甲醇利用菌MB119的筛选与鉴定被引量：1: 2007年; 经过富集培养，从沼气池残渣中筛选到一株可利用甲醇为唯一碳源生长的细菌（MB119），该菌革兰氏染色为阴性，短杆状。经过培养条件的优化发现，该菌的最佳培养温度为28-32℃，最佳生长的甲醇浓度为0.5％，最适pH值为7.0。16S rDNA序列比对分析发现，与Methylobacterium sp．的部分16S rDNA同源性达99％。结合其一些生理特性，将该菌初步鉴定为Methylobacterium属。利用不同碳源对MB119进行培养，发现，该菌同其他甲基菌一样，能利用甲醇以及一些多碳化合物进行生长，但MB119不能利用其他甲基化合物（如甲醛、甲酸等）作为唯一碳源。利用静息细胞反应，发现该菌能产2．6mg／mL的L一丝氨酸。; 欧倩王亚莉申佩弘武波; 关键词：METHYLOBACTERIUM L-丝氨酸

沼气池宏基因组文库中未培养微生物β-葡萄糖苷酶基因的克隆与鉴定被引量：5: 2008年; 以间接提取法提取了沼气池样品的微生物宏基因组DNA,用柯斯质粒载体pWEB:TNC构建了一个含三万个克隆的沼气池宏基因组文库,对文库中的克隆随机分析表明,该文库的外源片段平均长度为40 kb,文库的总容量为1 .2×106kb。对其中的一个在七叶苷平板上显色的阳性克隆pGXN100进行进一步亚克隆、测序和序列分析。结果表明,pGXN100上有一个全长为1 863bp的ORF,编码621个氨基酸组成的蛋白质。将该基因命名为Unglu100。与产气克雷伯菌属的一个β-葡萄糖苷酶基因AN292在核苷酸和氨基酸水平上分别有76%和85%的同源性,利用SMART软件进行预测表明,Unglu100可能是PTS中β-葡萄糖苷酶特异性的转运蛋白组件。; 唐咸来车志群李双喜蒋建林罗奉奉武波; 关键词：沼气池宏基因组文库 Β-葡萄糖苷酶

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