中国科学院知识创新工程重要方向项目(KSCX1-YW-R-15)
- 作品数：7 被引量：30H指数：4
- 相关作者：郑永唐张高红李明华况轶群汤霞更多>>
- 相关机构：中国科学院中国科学院研究生院国家食品药品监督管理局药品审评中心更多>>
- 发文基金：中国科学院知识创新工程重要方向项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- AIDS猕猴模型在HIV疫苗研究中的应用被引量：12
- 2007年
- 对HIV疫苗的研究一直是国际上艾滋病方面研究的热点和难点。动物模型则为疫苗研究必不可缺少的重要工具,缺乏合适的动物模型很大程度上制约了AIDS疫苗的研究。目前在国际上SIV或SHIV感染的猕猴模型为最常用的AIDS研究模型,受猕猴背景及病毒特性等多种因素的影响,使得以上两种模型在HIV疫苗研究中仍存在一定的局限性。为了更好地发挥猕猴模型在HIV疫苗研究中的巨大潜力,开发理想的AIDS猕猴模型已成为目前HIV疫苗研究的首要任务。本文简要介绍了AIDS疫苗的研发策略、研发概况以及SIV/SHIV猕猴模型在HIV疫苗中的应用,并对其中存在的问题及其应用前景进行了探讨。
- 张高红李明华郑永唐
- 关键词：艾滋病猴免疫缺陷病毒疫苗猕猴
- HIV-1核衣壳蛋白NCp7抑制剂体外筛选方法的建立被引量：1
- 2008年
- 目的表达HIV-1核衣壳蛋白(nucleocapside proteinp7,NCp7),并建立抑制剂筛选方法。方法从pBRU2/ADP202质粒经PCR得到HIV-1NCp7编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1NCp7表达载体。阳性克隆转染E.coliBL21DE3,以IPTG诱导,细胞裂解液经Q SepharoseH.P和SP Sepharose H.P纯化后纯度达到90%以上。将具有锌离子逐出活性的H2O2和2,2′-联硫基二吡啶(2,2′-di-thiodipyridine,AT-2)与NCp7作用,用锌离子特异的荧光染料检测。用该方法检测KIZ-CM系列化合物。结果可以检测H2O2和AT-2的锌离子逐出活性,经该方法筛选,KIZ-CM10,18,19等化合物具有一定的锌离子逐出活性。结论在国内首次建立了HIV-1NCp7锌离子逐出方法,该方法可以用于NCp7抑制剂的筛选。
- 王云华王睿睿杨柳萌李健峰徐维明郑永唐
- 关键词：HIV-1纯化抑制剂
- TRIM5α分子结构和限制HIV-1复制机制的研究进展被引量：7
- 2009年
- 汤霞况轶群郑永唐
- 关键词：CYPAHIV-1灵长类动物
- 重组腺病毒载体vAd-tat的构建及其在细胞中的表达被引量：7
- 2009年
- 目的构建含HIV-1tat基因重组腺病毒,观察在不同细胞中外源蛋白Tat的表达,作为DC抗HIV疫苗的基础。方法通过PCR扩增,获得HXB2tat的cDNA片段,定向克隆入腺病毒转移载体pTrack-CMV,线性化后转化含有腺病毒骨架pAd-easy-1的大肠杆菌BJ5183,获得同源重组的质粒prAd-tat,PacⅠ酶切纯化后转染293细胞,包装成具有感染力的复制缺陷型重组腺病毒vAd-tat。结果经PCR、酶切及DNA序列测定,插入片段大小、方向正确,获得具有感染力的含有HIV-1tat基因的重组腺病毒;通过Western blot方法检测,重组腺病毒在293细胞中表达出Mr为15000的蛋白。结论成功构建了含有HIV-1tat基因的腺病毒,并观察到该基因在细胞中的表达。
- 王路白雪刘红亮张高红郑永唐
- 关键词：HIV-1TAT293细胞腺病毒
- 恒河猴TRIM5α的组织分布及不同刺激促进PBMC中TRIM5α转录水平的上调被引量：1
- 2009年
- TRIM5α(tripartite motif protein 5-alpha)蛋白是恒河猴体内一种非常重要的限制因子,能抑制人免疫缺陷病毒(HIV-1, human immunodeficiency virus type 1)、马感染性贫血病毒(EIAV, equine infectious anemia virus)和猫免疫缺陷病毒 (FIV, feline immunodeficiencyvirus)等逆转录病毒的复制。恒河猴 TRIM5α的组织分布以及在受到外界刺激时 TRIM5α mRNA 表达量的变化研究还未见报道。本研究从中国恒河猴的各组织中提取总 RNA,以β-actin基因作为内参照,通过半定量 RT-PCR 检测各组织中 TRIM5α mRNA 的表达。选择 HIV-GFP-VSVG 假病毒感染外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),非特异性刺激剂——佛波脂(Phorbol myfismte acetate,PMA)+离子霉素(ionomycin,Ion)及 CD28 抗体+CD49d 抗体分别共刺激恒河猴 PBMC,研究不同刺激对恒河猴TRIM5α mRNA 表达水平的影响。结果表明:TRIM5α mRNA 表达于所研究的恒河猴 21 种组织中,免疫系统和泌尿生殖系统组织中表达量最高,而神经系统组织,如大脑、脊髓中表达较少,其他组织中未见明显的表达差异;HIV-GFP-VSVG 感染和用 PMA+Ion、CD28 抗体+CD49d 抗体分别共刺激 PBMC 能促进 PBMC 中 TRIM5α mRNA的转录水平的上调。
- 汤霞戴正喜夏厚军刘丰亮况轶群张高红郑永唐
- 关键词：恒河猴PBMC共刺激
- HIV-1 C亚型密码子优化gp120负载人DC疫苗的构建及体外功能
- 2010年
- 目的构建HIV-1C亚型gp120负载人树突状细胞(dentriti ccell,DC)疫苗,并对其体外功能进行初步检测。方法利用Amaxa细胞核转染技术将pcDNA3.1-gp120质粒转染至人成熟DC,以Western blot检测gp120的表达。通过流式细胞仪检测DC表面共刺激分子的变化、混合淋巴细胞反应、CD8+T细胞表面活化分子CD25的表达及其分泌IFN-γ的变化。结果通过Western blot检测,gp120在DC中得到了正确表达。经流式细胞仪检测,DC表面分子CD80表达率由刺激前的33.34%上升至43.20%,CD86表达率由刺激前的60.08%上升至90.34%;负载gp120DC刺激淋巴细胞增殖率为86.72%;CD8+T细胞表面分子CD25表达率由刺激前的5.27%上升至74.21%,IFN-γ的表达率达37%。结论负载了HIV-1gp120的人树突状细胞能够显著刺激淋巴细胞的增殖、增强CD8+T细胞表面活化分子CD25表达以及促进CD8+T细胞分泌IFN-γ,为下一步DC治疗性疫苗的体内研究奠定基础。
- 白雪夏厚军戴正喜马建平李少遊郑永唐
- 关键词：HIV-1C亚型密码子优化GP120
- 灵长类动物模型在抗艾滋病毒药物研究中的应用被引量：8
- 2007年
- 艾滋病(AIDS)灵长类动物模型广泛用于艾滋病毒(HIV)研究。较为常用的有猴免疫缺陷病毒(SIV)/猕猴模型和猴/人免疫缺陷嵌合病毒(SHIV)/猕猴模型,除了在发病机制和抗HIV疫苗研究中的重要作用外,这2种模型在抗HIV药物研究中同样显示出优越性和实用性,体现在药物疗效的研究、新药的开发、耐药性研究、机体免疫反应在药物治疗作用的研究中。通过这些体内抗病毒活性及机制的研究,可进一步揭示药物的抗HIV疗效,对AIDS的临床用药具有重要的指导作用,将使人们重新考虑抗HIV药物的用药原则和药效评价标准。
- 李明华张高红孙涛郑永唐
- 关键词：艾滋病毒艾滋病猴免疫缺陷病毒灵长类动物模型
