国家自然科学基金(30671764)
- 作品数：10 被引量：29H指数：3
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- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学华中科技大学更多>>
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- 重组抗癫痫肽二串体的表达、纯化与鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的:利用基因工程方法表达抗癫痫肽(AEP)串联体蛋白,并进行纯化、鉴定。方法:PCR扩增AEP及AEP-His基因片段,并分别克隆至测序载体中;测序正确后,利用基因重组技术获得二串体基因,构建毕赤酵母表达载体pPIC9K-AEP2-His,甲醇诱导AEP2-His在毕赤酵母中表达,用Ni-chelating Sepharose FF柱纯化表达的融合蛋白,并用抗His单克隆抗体进行Western blot鉴定。结果:构建了AEP二串体酵母表达载体,获得了纯化的AEP2-His蛋白,其相对分子质量约20 000。结论:用基因串联思路表达小分子多肽是一种可行的方法;AEP2-His蛋白的成功表达为其功能研究奠定了基础。
- 王宗仁高碧峰袁有才李晶华张德安马静
- 关键词：串联体融合蛋白
- 蜂毒肽抗风湿作用及对大鼠脊髓后角Fos表达的影响被引量：2
- 2007年
- 运用蜂毒进行抗风湿治疗在传统的中医学上已有近千年的历史,然而对它的主要抗风湿活性成分及其机制还不十分清楚。蜂毒肽占蜂毒干重的50%,是蜂毒的主要活性成分。本研究以SD大鼠为研究对象,以完全弗氏佐剂注入右侧后足垫皮内诱导建立跖关节类风湿关节炎模型,然后分别用蜂毒、蜂毒肽和生理盐水对模型动物进行治疗研究。通过测量跖关节肿胀度、缩足逃避反射时间以及脊髓后角内Fos的表达变化来评价疗效。结果显示:模型动物接受蜂毒肽与蜂毒治疗后,关节肿胀缓解,缩足逃避反射时间显著延长,脊髓后角内Fos的表达明显下降。本结果提示蜂毒肽可能是蜂毒治疗类风湿性关节炎的主要成分。
- 李晶华王宗仁邵中军行利马静赵燕玲龙铟张德安
- 关键词：蜂毒蜂毒肽类风湿关节炎
- 抗癫痫肽/GST融合表达载体的构建及蛋白表达
- 2007年
- 目的构建抗癫痫肽(anti-epilepsy peptide,AEP)/GST融合表达载体,原核表达GST-AEP融合蛋白。方法从克隆载体质粒pGEM-T/AEP中双酶切,得到AEP片段;通过中间载体puc18,转换酶位点;最后将AEP基因克隆入表达载体pGEX-4T-1质粒中,构建融合表达载体pGEX-4T-1/AEP;转化感受态大肠杆菌DH5α,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-AEP融合蛋白;SDS-PAGE分析表达产物,确定蛋白质高表达条件;超声裂解法鉴定蛋白质可容性;凝胶薄层扫描确定蛋白质相对表达量。结果经酶切鉴定、测序证明,AEP基因已正确插入到pGEX-4T-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量约为36 000的融合蛋白,该融合蛋白以包涵体形式存在,约占总蛋白质的70%左右。结论pGEX-4T-1/AEP载体构建成功,融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达。
- 张德安王宗仁高碧峰邵中军李晶华马静
- 关键词：GST融合蛋白原核表达
- 抗癫痫肽/GST融合表达及包涵体蛋白复性纯化被引量：1
- 2007年
- [目的]获得高纯度的谷胱甘肽硫转移酶/抗癫痫肽(GST-AEP)融合蛋白。[方法]异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组大肠杆菌DH5α表达GST-AEP融合蛋白,融合蛋白包涵体经过洗涤、变性、复性后,通过12%SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,凝胶薄层扫描检测其纯度,透析管进一步纯化蛋白,BCA法定量。[结果]从融合蛋白包涵体中获得了纯度达90%以上的目的蛋白,定量约0.163μg/μl。[结论]建立了有效纯化融合蛋白包涵体GST-AEP的方法,为对AEP进一步的相关研究奠定了基础。
- 张德安王宗仁邵中军高碧峰李晶华马静
- 关键词：融合蛋白包涵体复性蛋白纯化
- 不同预处理消毒饮用水中非挥发性有机提取物对HepG2细胞的损伤作用被引量：3
- 2010年
- [目的]研究汉江水源水以及3种不同预处理方法(氯气、二氧化氯和臭氧)消毒水中的非挥发性有机提取物(non-volatility organic compounds,NOCs)对肝癌细胞(HepG2细胞)的损伤作用。[方法]设氯气(Cl2+Cl2)、二氧化氯(ClO2+Cl2)、臭氧(O3+Cl2)和水源水(raw water)4个处理组以及一个阴性对照组(1‰DMSO)和一个阳性对照组(Bap)。各实验组分别以0.2、1、5、25、125mL/mL培养基的浓度对体外HepG2细胞进行染毒。以单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)、细胞松弛素B阻断核质分裂微核法(cytokinesis-block micronucleus)和MTT试验分别检测其对细胞DNA断裂损伤、染色体损伤和细胞存活率的影响。[结果]①彗星试验显示,3种不同预处理方法消毒水中NOCs在5、25、125mL/mL培养基均可明显导致DNA单、双链断裂,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。相同浓度各处理组间的差异也具有统计学意义(P<0.05);碱性彗星试验显示致DNA损伤最明显的是二氧化氯组;中性彗星试验显示致DNA损伤最明显的为氯气组。②微核试验显示,3种不同预处理方法消毒水和水源水NOCs在5、25、125mL/mL培养基均可致细胞微核的形成,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);与同浓度的臭氧组相比,氯气组在1mL/mL培养基的细胞微核率升高(P<0.05),二氧化氯组在1mL/mL和5mL/mL培养基的细胞微核率均明显升高(P<0.05);水源水组在1mL/mL和25mL/mL培养基时的细胞微核率显著低于同浓度的二氧化氯、氯气和臭氧组(P<0.05),在125mL/mL培养基则显著高于二氧化氯、氯气和臭氧组(P<0.05)。③与对照组相比,3种不同预处理方法消毒水和水源水NOCs对体外HepG2细胞存活率有随浓度的增加而降低的趋势,在25、125mL/mL培养基差异均有统计学意义(P<0.05);④相关性研究表明,碱性OTM和中性OTM与微核率均呈正相关(r=0.697,P=0.001;r=0.575,P=0.012);细胞生存率与碱性OTM和微核率
- 曹贤文杜海荣张荣王欣梅杜宏汪亚洲吕斌
- 关键词：DNA损伤染色体损伤氯化消毒臭氧HEPG2细胞
- 长骨骨折术后迟发性感染致骨折不愈合的研究被引量：3
- 2014年
- 本研究旨在观察血清降钙素元（PCT）和白细胞介素-6（IL-6）在骨科感染诊断中的作用,探讨其作为细菌性感染的敏感标志物在感染导致的长骨骨折不愈合的早期预测作用.一、资料与方法1．研究对象：根据骨折不愈合诊断及排除标准和迟发性感染诊断标准，结合临床症状作出诊断；急性感染根据临床表现和实验室检查明确诊断。
- 刘燕婕吕斌范文
- 关键词：骨折不愈合迟发性感染骨折术后长骨白细胞介素血清降钙素
- 抗癫痫肽重组腺伴病毒载体的构建及鉴定被引量：6
- 2005年
- 目的为了研究蝎毒癫痫肽对癫痫模型的治疗作用,构建并产生重组腺伴病毒(AAV)载体。方法将AEP外源性核酸片段插入AAV-shufer质粒pSSHG-Neo的KpnI-BamH I位点构建AAV。用腺病毒辅助质粒pFG140、包装质粒pAAV/Ad及构建的pSSHG-AEP三质粒磷酸钙共沉淀法在肾胚胎293细胞系中同源重组包装rAAV。使用地高辛标记的斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果成功构建了重组病毒质粒pSSHG/AEP,经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分,梯度稀释测得滴度为1.46×1012PFU/mL。结论成功地制备了AEP重组腺伴随病毒(rAAV/AEP)载体,为癫痫基因治疗实验奠定了基础。
- 王宗仁邵中军李晶华行利马静龙铟张磊赵艳玲
- 蜂毒肽大鼠足三里微量注射的抗炎、镇痛作用研究被引量：12
- 2012年
- 目的探讨蜂毒肽抗风湿疼作用及其机制。方法取SD大鼠40只,随机分为空白对照组、蜂毒组、蜂毒肽组、模型对照组。蜂毒组、蜂毒肽组、模型对照组以完全弗氏佐剂诱导拓关节类风湿关节炎模型,空白对照组不诱导模型,为对照;空白对照组、蜂毒组、蜂毒肽组、模型对照组于足三里分别注射生理盐水、蜂毒、蜂毒肽和生理盐水;测量关节肿胀度、缩足逃避反射时间。结果造模时各组拓关节体积、缩足逃避反射时间基本一致。方差分析分析显示造模4 d后,蜂毒组、蜂毒肽组、模型对照组与空白对照组拓关节厚度差异均有显著性;8 d后模型组拓关节体积均有降低趋势,以蜂毒组、蜂毒肽组组更明显,与空白对照组、模型对照组差异均有显著性。蜂毒组、蜂毒肽组缩足逃避反射时间在各个时间点均长于空白对照组、模型对照组,且差异均有显著性;而蜂毒组、蜂毒肽组间差异无统计学意义。结论蜂毒肽可能是蜂毒治疗类风湿性关节炎的主要成分。
- 李晶华王晓华王宗仁行利马静
- 关键词：蜂毒蜂毒肽类风湿关节炎
- GST-AEP融合蛋白的表达、纯化和鉴定
- 2007年
- 目的利用GST融合基因表达系统表达GST-AEP融合蛋白,并进行纯化及鉴定。方法IPTG诱导重组质粒pGEX-4T-1/AEP在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,溶菌酶裂解后,采用GST蛋白纯化系统进行纯化,所得产物进行12%SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果大肠杆菌经诱导,高效表达出相对分子质量约34000的蛋白,与GST-AEP融合蛋白相符。Western blot结果显示该蛋白能够被兔抗GST多克隆抗体识别。结论已成功表达并纯化了融合蛋白,为更深入研究AEP的结构和功能奠定了基础。
- 高碧峰王宗仁卓鹏展张德安肖茜
- 关键词：谷胱甘肽融合蛋白纯化
- GST/AEP融合蛋白原核表达载体的构建、表达及鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的:为进一步研究抗癫痫肽(Anti-epilepsy peptide,AEP)的抗痫机制及筛选其相关作用蛋白,进行GST/AEP融合蛋白原核表达载体的构建及融合蛋白的表达。方法:通过PCR基因扩增对AEP基因进行扩增,并将其克隆于谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX-4T-1中,经酶切、序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌Bl21(DE3),经IPTG诱导获得表达,并采用Western Blot进行检测。结果:成功构建了AEP原核表达载体,并在大肠杆菌Bl21中获得表达。结论:成功构建了GST/AEP原核表达载体,并表达了GST/AEP融合蛋白。
- 高碧峰王宗仁张德安
- 关键词：原核表达基因扩增
