教育部“新世纪优秀人才支持计划”(05-0722)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 相关机构：中山大学广州市疾病预防控制中心华南师范大学更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 代谢活化系统在人细胞转化模型中的应用被引量：2
- 2009年
- 【目的】探讨不同的代谢活化系统在人细胞转化模型中潜在的应用价值。【方法】在永生化人肝细胞L02中导入第12密码子突变的H-RAS癌基因(L02-R细胞),使其处于恶性转化前的易感状态。选择具有代表性的间接致癌物黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)作用于永生化和转化前期细胞株,采用三种代谢系统:高表达代谢酶P450 CYP1A2,低剂量底物诱导和加入经典的大鼠S9代谢辅助系统,通过软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验来比较在不同的代谢活化系统下,间接致癌物诱导细胞转化的效能。【结果】蛋白印迹验证H-Ras稳定高表达的转基因细胞株构建成功。通过Ames试验,蛋白印记和CYP1A2酶活性等方法比较三种代谢系统酶活性。在未加代谢系统的条件下,经AFB1染毒后第17周L02-R细胞发生转化,而对照组细胞L02-V在染毒20周未能发生转化。而加入S9代谢系统时,AFB1诱导L02-R细胞在第8周发生转化,比未加代谢系统缩短了9周;经低剂量0.1μmol/LAFB1诱导和高表达CYP1A2均使L02-R的转化间期缩短6周,于第11周发生转化。【结论】三种代谢系统都能够促进间接致癌物AFB1的代谢活化,缩短细胞转化的时间,提高细胞转化效率。与传统的S9代谢活化系统相比,低剂量诱导作为新的代谢活化的方法在细胞转化试验中有着良好的应用前景。
- 李文学陈丽萍肖勇梅黄耀南庞雅琴李道传魏青陈雯
- 关键词：代谢活化黄曲霉毒素B1细胞转化
- 代谢活化增强苯并(a)芘诱导人上皮细胞转化效应
- 目的探讨不同的代谢活化系统在苯并(a)芘[Benzo(a)pyrene,B(a)P]诱导人细胞转化模型中的应用。方法选择人支气管上皮细胞HBETR,采用3种不同的代谢活化方式:分别为加入大鼠S9组分(S9-Mix)、高表...
- 庞雅琴赖延东李道传杨萍杨燕李文学马儒林肖勇梅王庆魏青唐石伏陈丽萍林育纯陈雯
- 关键词：细胞转化代谢活化苯并(A)芘
- 文献传递
- 不同代谢活化系统增强苯并(a)芘诱导人支气管上皮细胞转化效应被引量：1
- 2009年
- 目的探讨不同的代谢活化系统在苯并(a)芘[B(a)P]诱导人细胞转化模型中的应用。方法选择人支气管上皮细胞HBETR,采用3种不同的代谢活化方式:分别为加入大鼠S9组分(S9-Mix)、高表达代谢关键酶P450CYP1A1(HBETR-1A1细胞)和染毒前48小时用低剂量B(a)P诱导(HBETR-IN细胞)。通过软琼脂克隆形成试验和裸鼠皮下成瘤试验来比较在不同的代谢活化系统下,间接致癌物B(a)P诱导细胞转化的效能。结果通过蛋白印迹和酶活性检测结果验证HBETR-1A1细胞构建成功。细胞的生物学特性没有明显的改变。20μmol/LB(a)P染毒作用下HBETR-1A1、HBETR-IN细胞出现转化时间均为11周,而未加入活化系统时,HBETR细胞需14周才能获得恶性转化。HBETR细胞在加入和不加入S9-Mix的条件下,转化时间分别是14周、20周。上述转化的效果与CYP1A1酶活性以及蛋白表达水平相一致。结论三种代谢系统都能够促进间接致癌物B(a)P的代谢活化,缩短细胞的转化间期,提高细胞转化效率。从试验操作难度、试验的重复性及结果的可靠性等几个方面比较三种代谢系统应用的可行性,低剂量诱导作为新的代谢活化的方法在细胞转化试验中有着潜在的应用前景。
- 庞雅琴赖延东肖勇梅李文学马儒林王庆魏青林育纯李道传唐石伏陈丽萍杨萍李志芳吴大伟林忠宁陈雯
- 关键词：苯并(A)芘细胞转化代谢活化
- 癌基因高表达人上皮细胞转化模型的构建及应用被引量：5
- 2008年
- 目的构建癌基因高表达人支气管上皮细胞模型并应用于致癌物诱导细胞恶性转化活性的检测。方法在永生化人支气管上皮细胞株16HBE中依次导入人端粒酶催化亚基（hTERT）、癌基因H—Ras^V12。或c—Myc或空白载体，构建细胞株16HBETR、16HBETM和16HBETV。检测所构建细胞株的生物学特性如细胞形态、细胞生长、染色体畸变等指标。用已知致癌物硫酸镍（NiSO4）和二氢二醇环氧苯并（a）芘（BPDE）多次染毒，利用软琼脂试验及荷瘤试验检测化学物诱导细胞转化的活性。结果经过端粒酶活性测定以及蛋白印迹验证上述转基因16HBE细胞株均构建成功。癌基因H—Ras和c—Myc的表达分别使细胞的增殖加速30．3％和10．4％，但是细胞染色体的畸变率没有发生改变。癌基因高表达细胞株只在软琼脂中形成少数背景克隆，但不能在裸鼠皮下形成肿瘤。BPDE诱导16HBETR、16HBETM细胞发生恶性转化的间期分别为5周、11周，比对照组细胞16HBETV的加周分别提前了15周和9周；而硫酸镍诱导16HBETR、16HBETM细胞转化的间期分别为11周、14周，比对照组细胞的32周分别提前了21周和18周。结论癌基因高表达的细胞转化模型可大大缩短试验间期，有望应用于环境致癌物的筛查及化学致癌机制的研究。
- 马儒林庞雅琴李文学肖勇梅魏青李道传赖延东林育纯王庆杨萍陈丽萍唐石伏林忠宁陈雯
- 关键词：上皮细胞
