国家自然科学基金(30471921)
- 作品数：20 被引量：25H指数：3
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- 胰岛素对人单核/巨噬细胞ACAT1基因P1和P7启动子活性的影响
- 目的:研究胰岛素对人单核/巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(acyl coenzyme A:cholesterolacyltransferase 1,ACAT1)基因P1和P7启动子的活性及其转录产物表达的影响,从...
- 葛晶成蓓何平戚本玲柯丽
- 关键词：胰岛素启动子转录活性
- 文献传递
- 胰岛素抵抗对巨噬细胞ACAT-1表达的影响及罗格列酮的干预作用被引量：2
- 2008年
- 目的进一步探讨动脉粥样硬化的发生机制及罗格列酮的干预作用。及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)高亲和性配体罗格列酮的干预作用。方法体外培养人单核细胞系THP-1细胞,诱导分化为巨噬细胞,分别采用高浓度胰岛素、葡萄糖和不同浓度罗格列酮进行干预,实时定量PCR法检测巨噬细胞人巨噬细胞酰基辅酶A胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白表达。结果在高浓度胰岛素和葡萄糖状态下巨噬细胞ACAT-1m RNA和蛋白表达明显增加(P<0.01);罗格列酮可明显下调其表达且呈浓度依赖性。结论胰岛素抵抗状态下巨噬细胞ACAT-1表达水平升高,罗格列酮可明显下调其表达;此可能为其发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一。
- 陈心成蓓王洪星何平葛晶
- 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体-Γ胰岛素抵抗
- 人ACAT1基因P1启动子的克隆及意义
- 2007年
- 目的克隆人酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT 1)基因P 1启动子。方法应用PCR方法从人单核细胞系THP-1扩增分离出ACAT 1基因P 1启动子全长片段,将PCR产物克隆入T载体,并对所获得的序列进行生物信息学分析。结果经琼脂糖凝胶电泳及直接测序鉴定,克隆的ACAT 1基因P 1启动子片段碱基序列与G enB ank数据库一致,未发现突变。结论人ACAT 1基因P 1启动子克隆成功,此为动脉粥样硬化(A S)过程中ACAT 1基因转录调控机制的研究奠定了基础。
- 葛晶成蓓文晖何平柯丽余其振
- 关键词：基因克隆
- 人ACAT1基因P7启动子的克隆及序列分析
- 2007年
- 克隆并测定人酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)基因P7启动子的序列,进一步探讨ACAT1基因表达的转录调控特点并分析其特异性转录位点。根据GenBank数据库提供的人A- CAT1基因P7启动子核苷酸序列,应用PCR方法从人单核细胞系THP-1扩增分离出ACAT1基因P7启动子全长片段,将PCR产物克隆入T载体,并对所获得的序列进行生物学信息分析。经琼脂糖凝胶电泳及直接测序鉴定,克隆的ACAT1基因P7启动子片段碱基序列与Gen Bank数据库一致。成功克隆了ACAT1基因P7启动子,为研究在动脉粥样硬化过程中AcAT1基因的转录调控机制奠定基础。
- 葛晶成蓓何平戚本玲文晖白莉娟
- 关键词：酰基辅酶A克隆
- 脑肠肽Ghrelin通过生长激素促分泌素受体下调人源单核细胞株THP-1源性泡沫细胞酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1表达的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨脑肠肽Ghrelin对人源单核细胞株THP-1源性泡沫细胞酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1（ACAT-1）表达的调控作用及其调控途径。方法体外培养人源单核细胞株THP-1，由佛波酯（PMA）作用使其分化为巨噬细胞，继而在氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）存在条件下进一步转变为泡沫细胞，油红O染色法鉴定泡沫细胞形成。运用PT—PCR法和Western blot法分别检测Ghrelin干预后及拮抗生长激素促分泌素受体（GHS—R）后ACAT-1 mRNA水平与ACAT-1蛋白表达，采用酶法，通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量并计算胆固醇酯含量。结果Ghrelin可明显减少细胞内胆固醇酯的含量，并能显著降低单核／巨噬细胞泡沫化过程中ACAT-1 mRNA水平和蛋白表达（P均〈0．01）。拮抗GHS—R后，Ghrelin抑制泡沫细胞形成的效应被阻断，且GHS-R特异性拮抗剂浓度越高，该阻断作用越明显。浓度为10^-5、5×10^-5、10^-4mol／L的GHS—R特异性拮抗剂组ACAT-1 mRNA水平与蛋白表达分别为1．14±0．04、1．58±0．03、2．40±0．16和1．25±0．09、1．77±0．11、2．30±0．09，明显高于Ghrelin组0．89±0．05和0．86±0．08（P均〈0．05）。结论Ghrelin可能通过ACAT-1转录翻译水平的下调抑制泡沫细胞的形成，从而延缓动脉粥样硬化的发生，且该效应通过GHS—R途径发挥作用。
- 万晶晶成蓓王彦富梅春丽刘玮柯丽何平
- 关键词：泡沫细胞GHRELIN
- 胰岛素对人单核/巨噬细胞ACAT1基因P1和P7启动子活性的影响
- 2012年
- 目的:研究胰岛素对人单核/巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(acyl coenzyme A:choles-terol acyltransferase 1,ACAT1)基因P1和P7启动子的活性及其转录产物表达的影响,从而探讨它们在胰岛素调控ACAT1基因表达中的作用。方法:将人ACAT1基因P1和P7启动子调控的报告基因载体pGL3E-P1和pGL3E-P7瞬时转染入体外培养人THP-1单核细胞系,给予不同剂量的胰岛素处理,通过双萤光素酶报告系统检测P1和P7启动子的活性。体外培养THP-1细胞和由佛波脂诱导分化的巨噬细胞,同样用不同剂量的胰岛素干预24 h,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测THP-1细胞ACAT1基因P1和P7启动子转录产物表达,用SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR方法检测THP-1细胞和诱导分化的巨噬细胞ACAT1 mRNA的表达。结果:不同剂量胰岛素处理的人THP-1细胞,与对照组相比,ACAT1基因P1启动子的活性及其转录产物量均显著增强,并随胰岛素剂量的增加而升高。应用实时定量RT-PCR方法检测ACAT1 mRNA的表达与上述结果相一致。结论:胰岛素可通过激活人单核/巨噬细胞ACAT1基因P1启动子上调ACAT1 mRNA的表达,其作用呈剂量依赖性。
- 葛晶成蓓何平戚本玲柯丽
- 关键词：胰岛素启动子转录活性
- 渥曼青霉素阻断罗格列酮对人巨噬细胞酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶-1表达的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:研究过氧化体增殖物激活型受体-γ(peroxisome proliferator activated receptors-γ,PPAR-γ)配体罗格列酮对巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase-1,ACAT-1)表达的影响及可能机制。方法:在RPMI 1640培养基中培养人单核细胞株(THP-1),加入佛波酯培养48h,细胞贴壁呈巨噬细胞样分化。将细胞分为空白对照组、不同浓度罗格列酮组和罗格列酮+渥曼青霉素(wortmannin)组,运用实时定量PCR和Western blot,观察巨噬细胞ACAT-1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:罗格列酮可明显抑制ACAT-1 mRNA和蛋白的表达,且呈浓度依赖性;加入磷酯酰肌醇三磷酸激酶(phosphate dylinositol 3-kinase,PI3K)信号途径抑制剂渥曼青霉素后ACAT-1表达较罗格列酮组高,较空白对照组低。结论:PPAR-γ配体罗格列酮通过PI3K途径抑制ACAT-1表达发挥其抗动脉粥样硬化的作用。
- 陈心成蓓王洪星何平葛晶
- 关键词：噻唑烷二酮类青霉素类PPARΓ1-磷脂酰肌醇3-激酶
- 内脂素对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:观察内脂素(visfatin)对人单核细胞株THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(AB-CA1)表达的影响,探讨visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制。方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,予不同浓度和时间的visfatin进行干预,分别运用油红O染色观察细胞浆脂滴变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测各组细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果:与对照组比较,visfatin干预组细胞浆脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加(均P<0.05)。Visfatin呈浓度和时间依赖性地下调ABCA1mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:Visfatin下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1的表达,使细胞内FC流出减少,CE合成增加,从而诱导泡沫细胞的形成。
- 康静成蓓姜蕾
- 关键词：ATP结合盒转运体A1泡沫细胞
- Ghrelin对THP-1细胞泡沫化过程中酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:研究单核/巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中ghrelin对人酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)表达以及细胞内胆固醇酯的影响。方法:体外培养人源单核细胞系(THP-1),由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者可在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)存在条件下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的ghrelin预孵2 h后再加入ox-LDL,油红O染色法观察细胞内脂滴含量,运用RT-PCR法检测ACAT-1 mRNA水平,Western blotting法检测ACAT-1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇酯含量。结果:Ghrelin可明显减少THP-1源性泡沫细胞内脂滴的形成,显著降低细胞内胆固醇酯含量,并能显著降低单核/巨噬细胞泡沫化过程中ACAT-1 mRNA水平和蛋白表达,且此干预作用呈浓度依赖性。结论:Ghrelin可能通过ACAT-1转录翻译水平的下调延缓动脉粥样硬化的发生。
- 王彦富成蓓万晶晶梅春丽刘玮柯丽何平
- 关键词：GHRELIN酰基辅酶A泡沫细胞动脉硬化
- 葡萄糖对THP-1源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达的影响
- 2007年
- 研究葡萄糖对人THP-1单核分化巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)表达的影响。发现高糖作用下,巨噬细胞ACAT-1的mRNA及蛋白表达增加。
- 陆菡成蓓何平王彦富陆隆友
- 关键词：酰基辅酶A葡萄糖
