云南省科技条件平台建设计划项目(2007DA006)
- 作品数：8 被引量：36H指数：3
- 相关作者：董坚洪敏高嫦娥刘为青张楠更多>>
- 相关机构：昆明医科大学昆明医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：云南省科技条件平台建设计划项目云南省应用基础研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响被引量：9
- 2013年
- 目的:探讨miRNA-210(miR-210)在人乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集2011年10月至2012年6月期间昆明医科大学第一附属医院20例乳腺癌患者组织标本,real-time PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10a中miR-210的表达。采用Lipofectami-neTM2000将miR-210 inhibitor转染至MDA-MB-231细胞中,通过荧光显微镜检测miR-210的转染效率,MTT和软琼脂克隆形成实验检测MDA-MB-231细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。结果:miR-210在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中的表达水平均显著高于癌旁组织和正常乳腺细胞(P<0.01)。miR-210 inhibitor成功转染MDA-MB-231细胞,转染效率为(88.29±2.98)%,转染miR-210 inhibitor后MDA-MB-231细胞的增殖和克隆形成能力明显减弱(P<0.05),被阻滞于G0/G1期的细胞数明显增多[(64.23±3.12)%vs(55.53±0.96)%,P<0.01],凋亡细胞比例也显著增加[(31.90±3.05)%vs(15.98±0.63)%,P<0.01],细胞的迁移[(291.00±43.12)vs(1137.38±83.49)个,P<0.01]、侵袭[(131.63±32.01)vs(647.88±31.20)个,P<0.01]均受到明显抑制。结论:miR-210在乳腺癌组织和细胞中过表达,转染miR-210 inhibitor后乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。
- 张楠李少遊巩雅宁任俊宇田晰晰董坚
- 关键词：乳腺癌MDA-MB-231MIRNA增殖
- 乳腺癌特异性多肽介导的HSV-TK/GCV系统的构建及其靶向杀伤效应被引量：2
- 2011年
- 目的:研究乳腺癌MDA-MB-231细胞特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统对乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外靶向杀伤作用。方法:以PCR从质粒pORF-HSV-TK中扩增目的基因PI-TK,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建pET-28a(+)-PI-TK载体,转化宿主菌,经IPTG诱导表达PI-TK融合蛋白,利用His-Tag对其进行纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白。将不同质量浓度的PI-TK融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,联合更昔洛韦(ganci-clovier,GCV)作用后,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,CCK-8法检测MDA-MB-231细胞的增殖。结果:成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-PI-TK,获得纯化的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE及Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白表达正确。单独PI-TK融合蛋白不影响MDA-MB-231细胞的形态和增殖,但PI-TK融合蛋白联合GCV能剂量依赖性靶向抑制MDA-MB-231细胞的增殖,200μg/ml PI-TK+10 mg/LGCV作用的抑制率达(68.9±7.57)%;PI-TK联合GCV抑制MDA-MB-231细胞的IC50值为152.64μg/ml。上述各作用对MDA-MB-435细胞均无影响(P<0.05)。结论:乳腺癌特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统可靶向杀伤MDA-MB-231细胞。
- 耿计伟董坚刘为青高嫦娥熊秋霞缪延栋周华华李秋恬李臣
- 关键词：MDA-MB-231细胞靶向性
- HSP70多肽复合物修饰DCs疫苗抗胰腺癌荷瘤小鼠的实验研究被引量：14
- 2009年
- 目的:探讨负载热休克蛋白70多肽复合物(HSP70-PC)抗原的树突状细胞(DCs)疫苗对胰腺癌荷瘤小鼠的免疫治疗作用。方法:采用低渗裂解、ConA-Sepharose亲和层析及ADP-Agarose亲和层析法,从小鼠胰腺癌(MPC83)肿瘤组织中纯化HSP70-PC,修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞(DCs),制备树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗,用MTT法检测混合淋巴细胞反应(MLR)中HSP70-PC致敏DC对CTL的增殖及活化效果;建立MPC83荷瘤小鼠模型,观察树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗对荷瘤小鼠治疗的效果和小鼠存活期。结果:经上述方法分离、纯化获得了较高纯度的HSP70-PC蛋白质;HSP70-PC在1.5～2.0μg/ml范围内可达到刺激树突状细胞最强效果,用HSP70-PC修饰的DCs能增强T细胞的增殖和活化能力;应用树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗治疗荷瘤小鼠能显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠存活期。结论:采用低压亲和层析柱可从胰腺癌瘤块中获得较高纯度HSP70多肽复合物,其修饰的DCs疫苗用于荷瘤小鼠免疫治疗有显著疗效,为临床胰腺癌生物免疫治疗奠定基础。
- 张晓娟董坚吴振林洪敏邢海霞
- 关键词：胰腺癌树突状细胞肿瘤免疫
- 体细胞治疗在肿瘤生物治疗中的意义和作用被引量：1
- 2012年
- 随着肿瘤生物治疗技术的发展,生物治疗已经成为继手术、放疗、化疗之后的第四种治疗方式,在肿瘤综合治疗中占有重要地位,其中体细胞治疗作为生物治疗中的重要技术与多种治疗手段相结合形成了多元化的治疗形式。本文就国内外体细胞治疗的发展及其与化疗、微创介入、肿瘤靶向药物结合的研究和应用现状做一评述。
- 洪敏刘为青董坚
- 关键词：体细胞治疗肿瘤生物治疗树突状细胞
- 天然植物药物IHA-01体外对微管聚合影响作用的研究
- 2012年
- 目的研究天然植物药物IHA-01对猪脑微管蛋白的影响,探讨其可能的抗肿瘤机制。方法通过在体外对温度进行两次循环调控,应用超速离心机从新鲜猪脑中提取纯化出微管蛋白,体外建立微管蛋白亚单位聚合-解聚平衡系统,在此平衡系统中通过测量其吸光度值的变化来检测药物对微管的作用。结果 IHA-01抑制微管蛋白亚单位聚合过程中吸光光度值升高。结论抑制微管蛋白聚合可能是天然植物药物IHA-01抗癌机制之一。
- 何玉琴董坚洪敏巩雅宁李少逰
- 关键词：肿瘤微管
- CXCR4-siRNA表达载体的构建及其对体外乳腺癌细胞侵袭能力的影响被引量：2
- 2009年
- 目的构建趋化因子受体(CXCR4)小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,研究其对体外乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法选择CXCR4高表达的乳腺癌MDA-MB-231细胞系,设计合成人CXCR4基因不同靶点的能编码siRNA的2条双链DNA序列,克隆到真核表达载体pGE-1-U6/kna中构建siRNA表达载体,体外脂质体介导转染MDA-MB-231细胞,用Western blot分析CXCR4蛋白表达,Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果成功构建了CXCR4-siRNA表达载体,瞬时转染乳腺癌细胞后能显著降低CXCR4的蛋白表达,可有效抑制人类乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力。结论CXCR4-siRNA表达载体通过降低CXCR4基因的蛋白表达能显著抑制人类乳腺癌细胞的侵袭能力,有望为乳腺癌转移的基因治疗开辟新途径。
- 冯俊飞董坚洪敏高嫦娥
- 关键词：乳腺癌CXCR4小干扰RNARNA干扰
- TACE联合CIK治疗原发性肝癌方案分析被引量：6
- 2012年
- 目的探讨对原发性肝癌患者进行肝动脉栓塞化疗(TACE)联合CIK细胞免疫治疗方案的临床价值。方法选取治疗效果明显的1例原发性肝癌病例进行分析,患者于TACE术后2周开始序贯完成3个疗程经肝动脉CIK细胞回输及3个疗程经外周静脉CIK细胞回输,同时对患者各项检查指标进行持续监测。结果 18个月后复查结果显示肝功能未见明显异常,AFP正常,HBV-DNA拷贝降低转阴,机体免疫水平提高,肝脏CT未见复发。结论 TACE联合CIK细胞免疫治疗是一种新型的原发性肝癌综合治疗方法,它在杀伤肿瘤细胞的同时还能明显降低乙肝病毒体内含量,提高机体免疫力,从而阻断致癌因素,对抑制肝癌的复发和转移具有重要意义。
- 陈晓何敏洁董坚高嫦娥熊秋霞
- 关键词：CIK治疗原发性肝癌
- 人乳腺癌组织中miR-34a的表达及其在乳腺癌细胞系中的功能研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨miR-34a在人乳腺癌组织和细胞中的表达情况及对乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖、迁移侵袭和凋亡等生物学行为的影响,为研究乳腺癌组织中miR-34a的作用及深入了解乳腺癌发生发展的分子机制奠定理论基础。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-34a在20例人乳腺癌组织和癌旁正常组织中表达量的差异并比较其在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和正常乳腺上皮细胞MCF-10A中的表达差异;体外利用脂质体转染技术,转染miR-34a的模拟物(miR-34a mimic)和标记FAM(绿色荧光)的阴性对照(negative control,miR-NC)进入MDA-MB-231细胞,研究miR-34a对细胞增殖活性、迁移和侵袭能力以及凋亡和周期分布的影响。结果 miR-34a在乳腺癌组织中的表达量较正常癌旁组织下调(P<0.01);在MDA-MB-231、MCF-7和MCF-10A中的表达呈依次增高的趋势(P<0.01);转染miR-34a mimic与转染miR-NC的MDA-MB-231相比,其增殖活力、迁移和侵袭能力均下降(P<0.01),凋亡增加(P<0.01),细胞周期被阻滞在G1/G0期(P<0.01)。结论 miR-34a在乳腺癌组织和细胞系MDA-MB-231及MCF-7中的表达较正常组织和MCF-10A中都明显下调;miR-34a能够抑制肿瘤细胞MDA-MB-231的增殖、侵袭迁移,增加细胞凋亡率,使细胞周期阻滞在G0/G1;miR-34a可能起到抑癌作用,其表达水平与乳腺癌的发生发展密切相关。
- 巩雅宁刘为青张楠何玉琴洪敏董坚
- 关键词：MIR-34A乳腺癌迁移抑癌基因
