天津市科技攻关项目(06YFSZSF01300)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：刘晓智刘振林胡群亮孙洪涛孙世中更多>>
- 相关机构：武警医学院附属医院武警部队更多>>
- 发文基金：天津市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- hTERT介导脐带间充质干细胞实现永生化的研究被引量：2
- 2008年
- 目的通过转染人端粒酶逆转录酶催化亚单位（hTERT）建立永生化脐带间充质干细胞（UCMSCs），用以获得足够多的UCMSCs满足体外研究与临床需要。方法原代分离培养人UCMSCs。取第4代UCMSCs行流式细胞术检测UCMSCs表面特异标志物表达：利用脂质体介导pLXSN—hTERT正义表达质粒转染UCMSCs，建立永生化UCMSCs; RT-PCR检测转染前后hTERTmRNA表达水平，细胞免疫荧光方法检测hTERT蛋白表达，流式细胞术观察hTERT转染后细胞周期改变。结果流式细胞术结果显示UCMSCs强表达CD29、CD44、CD105，极低表达CD31、CD34、CD45，检测结果符合人UCMSCs特征；RT-PCR检测单纯UCMSCs低表达hTERTmRNA，pLXSN-hTERT正义表达质粒转染后hTERTmRNA表达明显增高；细胞免疫荧光显示hTERT全部表达于细胞核．转染后胞核荧光强度明显增强：细胞周期检测结果显示转染后处于S期UCMSCs数目明显增多，细胞可获得长期稳定传代（〉35代）。结论以hTERT转染UCMSCs在体外可获得长期稳定传代培养细胞，可基本满足体外研究与临床需要。
- 张赛刘振林胡群亮孙洪涛孙世中刘晓智
- 关键词：脐带间充质干细胞永生化
- hTERT永生化脐带间充质干细胞的致瘤性研究被引量：5
- 2008年
- 目的检测转染人端粒酶逆转录酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)后建立的永生化脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)是否存在潜在致瘤性。方法原代分离培养人UCMSCs,利用脂质体介导hTERT建立永生化UCMSCs,RT-PCR检测转染结果;分别取第8代UCMSCs及hTERT-UCMSCs行流式细胞周期术检测转染前后细胞周期变化;软琼脂克隆形成试验检测UCMSCs及hTERT-UCMSCs在半固体培养基中的克隆形成能力;并将其注入裸鼠腹侧皮下,60个观察日检测其成瘤性。全部实验以人U87胶质瘤细胞系为阳性成瘤试验对照。结果RT-PCR检测hTERT成功转染UCMSCs,流式细胞术结果显示第8代hTERT-UCMSCs处于分裂增殖期细胞数(38.4%)明显多于未转染组(19.0%),但均低于U87胶质瘤阳性对照组(43.1%);软琼脂克隆形成实验显示第8代hTERT-UCMSCs和UCMSCs均未表现出在阻力介质中的克隆生长能力;与迅速增长的裸鼠皮下U87胶质瘤模型相比较,hTERT-UCMSCs和UCMSCs均无体内肿瘤形成。结论以hTERT转染的UCMSCs在体外具有更长时间的生长活性,但其基因性状可维持长期稳定,尚不具有致瘤潜能,体内移植安全。
- 张赛刘振林刘晓智孙洪涛胡群亮孙世中
- 关键词：脐带间充质干细胞致瘤性永生化
