国家自然科学基金(30471946)
- 作品数：15 被引量：30H指数：4
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- 相关机构：军事医学科学院重庆医科大学兰州大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 基因芯片技术分析siRNA抑制多效生长因子表达后Pten^(-/-)MEF241细胞基因表达谱的变化被引量：2
- 2007年
- 目的:应用基因芯片技术,分析siRNA抑制Pleiotrophin基因表达后,Pten-/-MEF241细胞基因表达谱的变化。方法:选用Agilent公司的小鼠oligo芯片,分别提取siRNA抑制Pleiotrophin基因表达前后Pten-/-MEF241细胞的RNA,反转成cDNA,进一步荧光标记后进行芯片杂交,杂交结果经扫描及软件分析,最后Ration值为cy3/cy5(即实验组/对照组)。差异基因筛选标准为正标Ratio(Cy3/Cy5)≥2同时反标Ratio(Cy3/Cy5)≤0.5。部分上调及下调基因的表达水平用RT-PCR及Northern杂交进行了验证。结果:siRNA介导Pleiotrophin基因沉默后,表达上调2倍以上的基因有240个,下调0.5倍以上的基因有129个。其中,上调10倍以上的基因有与DDK综合征相关的Schlafen家族成员Slfn2、3、4,基质蛋白金属酶Mmp3、10、13,白介素IL-1a、IL-f6等;下调5倍以上的基因有钙结合蛋白S100a8、视黄醇结合蛋白Rbp4、二肽酶Dpep1等。RT-PCR及Northern杂交验证结果与芯片结果吻合。结论:应用基因表达谱芯片成功分析了RNAi抑制Pleiotrophin基因表达后Pten-/-MEF241细胞基因表达谱的变化,挑选并鉴定出一批有意义的基因,为后续的深入研究提供了基础。
- 胡迎春周乔丹张博杨柳宋博强李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：寡核苷酸序列分析基因表达逆转录聚合酶链反应
- 多效生长因子对基质金属蛋白酶3,10的负调控作用被引量：1
- 2008年
- 目的:研究多效生长因子对基质金属蛋白酶(MMP)3、10的负调控作用。方法:用RT-PCR、Northern印迹比较对照与多效生长因子沉默细胞中MMP3、MMP10的表达;在多效生长因子沉默细胞培养液中加入50 ng/mL多效生长因子,检测MMP3、MMP10的表达。结果:多效生长因子缺失细胞中MMP3、MMP10高表达;而在其中添加多效生长因子之后,MMP3、MMP10的表达基本被完全抑制。结论:多效生长因子对MMP3、MMP10有负调控作用。
- 张博胡迎春杨柳李刚李晓兵吴德昌霍艳英
- 关键词：多效生长因子基质金属蛋白酶负调控
- 过氧化氢以PTEN依赖方式介导细胞凋亡被引量：6
- 2007年
- PTEN是一个重要的抑癌基因.为了调查PTEN在H2O2对细胞凋亡诱导过程中的作用及机制,采用Western印迹方法,检测了在PTEN缺失细胞及对照细胞中H2O2对PI3K/AKT通路的影响;采用AnnexinⅤ-FITC标记结合流式检测H2O2对PTEN缺失细胞及对照细胞凋亡的诱导.结果表明,在PTEN功能正常的对照细胞中,H2O2短时间活化,长时间抑制PI3K/AKT通路,但PTEN缺失后,H2O2对PI3K/AKT通路的介导被阻断;0.1 mmol/L H2O2处理12 h及24 h可以诱导对照细胞的凋亡,但对PTEN缺失细胞没有明显影响.这一结果证明,PTEN通过参与H2O2对PI3K/AKT通路活性的调控影响H2O2介导的凋亡.
- 霍艳英付春玲苟巧胡迎春李刚吴德昌
- 关键词：PTENH2O2AKT凋亡
- 多效生长因子(Pleiotrophin)基因沉默后的基因表达谱初步分析被引量：9
- 2007年
- 多效生长因子(pleiotrophin,PTN指蛋白,Ptn指基因)是一种可同肝素结合的分泌性的生长/分化因子,具有刺激细胞粘附、迁移、存活、生长和分化等功能.我们前期研究发现,Ptn稳定沉默可以显著降低细胞的生长及成瘤能力.为进一步了解Ptn表达沉默后小鼠基因转录谱的变化,用小鼠表达谱芯片比较了对照及Ptn沉默细胞的基因表达差异.在检测的24000个基因中,Ptn沉默后上调2倍以上的基因有240个,下调2倍以上的基因有129个.值得引起注意的是,在Ptn沉默的MEFs细胞中,同DDK综合症相关的基因家族,schlafen(Slfn)家族的Slfn2、Slfn3、Slfn4以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)家族的Mmp3、Mmp10、Mmp13表达均显著上调;而可促进内皮细胞运动,参与血管发生的基因angiomotin(Amot)表达显著下调.通过研究,获得了一系列Ptn沉默后表达变化的基因信息.
- 霍艳英胡迎春周乔丹杨柳张博李刚吴德昌
- 关键词：多效生长因子基因沉默基质金属蛋白酶
- 白细胞介素-1通过JNK信号通路调控Schlafen2基因的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:在多效生长因子(Ptn)基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞Ptn-siRNA B/MEF241中,研究白细胞介素-1(IL-1)调控Schlafen2(Slfn2)基因表达的机制。方法:应用Northernblot检测Ptn沉默细胞Ptn-siRNAB/MEF241处于不同生长密度时Slfn2基因的表达变化,以确定Ptn沉默细胞中Slfn2基因的表达是否受到某种分泌性细胞因子的调控;用不同浓度的IL-1α中和抗体及IL-1受体拮抗剂处理Ptn沉默细胞,通过Northern blot检测细胞内Slfn2表达的抑制情况;用不同浓度的IL-1α中和抗体及IL-1受体拮抗剂处理Ptn沉默细胞不同时间,通过Western blot检测细胞中JNK磷酸化水平;Northern blot检测SP600125(JNK/MAPK通路抑制剂)对Ptn沉默细胞中Slfn2基因表达的影响。结果:Ptn沉默细胞中Slfn2基因的表达水平同细胞密度相关;用中和抗体和受体拮抗剂阻断IL-1通路,Slfn2表达受到显著抑制;IL-1受到抑制会影响JNK通路的活化;阻断JNK通路,Slfn2的表达受到显著抑制。结论:IL-1可以通过JNK通路诱导Slfn2的表达。
- 胡迎春方玲周乔丹陈忠民李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：多效生长因子白细胞介素-1JNK通路基因表达
- Pten基因敲除对过氧化物酶家族表达和活性氧水平的影响被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨Pten基因敲除后对过氧化物酶家族(Peroxiredoxins,Prdxs)水平和活性氧水平的影响。方法:采用Western印迹和化学/荧光发光分析法分别检测了在Pten+/+MEF和Pten-/-MEF细胞中PRDXs的表达和细胞内活性氧水平。结果:Western印迹结果显示,与Pten+/+MEF细胞相比,Pten-/-MEF细胞PRDXⅠ,Ⅱ,Ⅴ,Ⅵ蛋白水平下调,PRDXⅢ不变,PRDXⅣ上调。DCFH探针标记后流式结果显示Pten-/-MEF细胞活性氧荧光值显著高于对照Pten+/+MEF细胞(P<0.05)。结论:Pten基因敲除引起数种PRDXs表达下调,细胞内活性氧水平增高。
- 傅春玲霍艳英胡迎春李刚米粲吴德昌
- 关键词：PTEN活性氧H2O2
- 针对Pleiotrophin基因的siRNAs的设计及其稳定表达载体的构建
- 2005年
- 胡迎春刘敏丽霍艳英项晓琼李刚
- 关键词：基因表达
- 多效生长因子通过JNK信号通路负调控Schlafen2基因表达被引量：2
- 2008年
- 实验室前期研究发现,多效生长因子(pleiotrophin,PTN)基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞中Schlafen2(Slfn2)基因高表达.为了探讨Ptn沉默诱导Slfn2基因表达可能涉及的信号通路,应用Western印迹检测外源性PTN因子(终浓度50ng/μl)对Ptn沉默细胞JNK磷酸化水平的影响;应用Northern印迹分别检测JNK和p38通路特异性抑制剂对Ptn沉默细胞Slfn2基因转录水平的影响.结果发现,Ptn沉默细胞内JNK磷酸化水平高于对照细胞,外源性PTN处理后沉默细胞内JNK磷酸化水平下调;阻断JNK通路呈时间依赖性抑制Ptn沉默细胞中Slfn2基因转录,阻断p38通路对Ptn沉默细胞中Slfn2转录水平没有明显影响.结果提示,Ptn可能通过抑制其下游JNK/MAPK通路来负调控Slfn2的表达.
- 方玲胡迎春杨柳刘梦伊刘昕潘兴斌吴德昌霍艳英
- 关键词：多效生长因子基因沉默
- 多效生长因子相关基因的生物信息学分析被引量：2
- 2007年
- 目的:用生物信息学方法分析多效生长因子(PTN)潜在的分子功能。方法:利用由美国亚利桑那癌中心提供的生物信息学数据库,对前期用小鼠全基因组表达谱芯片检测到的Ptn相关基因进行生物信息学分析,通过GO Terms分析这些基因所属的功能群体,用Pathway Miner分析这些基因参与调控的信号通路。结果:370个由芯片检测得到的Ptn相关基因中,在GO Terms数据库中找到231个基因,其中参与细胞成分构成的基因占31.83%,具有分子功能的基因占35.34%,而参与生物学过程的基因占32.83%;在Pathway Miner数据库中找到105个基因。这些基因相关的信号通路有230条,分别属于细胞和调控过程通路以及代谢通路。结论:PTN是一个重要的细胞因子,可能参与机体的免疫与防御反应、炎症反应,以及细胞的增殖、凋亡调控等。
- 宋博强霍艳英胡迎春李刚吴德昌
- 关键词：多效生长因子CDNA微阵列生物信息学分析
- 针对多效蛋白基因的小干扰RNA的设计及其稳定表达载体的构建
- 2006年
- 目的:设计多效蛋白基因特异性的小干扰RNA(siRNA),并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些siRNA的表达质粒,以便为在体外研究多效蛋白基因的功能打下基础。方法:设计并合成具有多效蛋白基因特异性的一组寡核苷酸片段,并克隆到pSilencer3.1-H1hygro载体;用脂质体LipofectAMINE2000转染和潮霉素筛选等方法建立能稳定表达相应siRNA的一组Pten-/-细胞克隆;利用Northern印迹检测这些细胞内多效蛋白基因的表达情况。结果:设计并构建了3个针对多效蛋白基因的siRNA表达质粒,并证明其中的1种质粒能在Pten-/-细胞内稳定表达相应的siRNA,并显著地抑制了该细胞多效蛋白基因的表达。结论:设计并构建出的针对多效蛋白基因的siRNA表达载体所表达的siRNA具有较强的RNA干涉功能,为多效蛋白基因的功能研究奠定了实验基础。
- 胡迎春刘敏丽霍艳英项晓琼李刚
- 关键词：小干扰RNA基因表达
