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山桃醇腈酶基因PdHNL1的克隆、序列分析与原核表达: 2015年; 以山桃叶片为材料提取RNA,反转录后得到c DNA,通过PCR扩增得到1个山桃醇腈酶基因全长编码序列,并命名为Pd HNL1。Pd HNL1的开放阅读框为1 737 bp,预测编码蛋白包含539个氨基酸。氨基酸序列比对结果表明,Pd HNL1编码的蛋白具有葡萄糖甲醇胆碱氧化还原酶的序列特征,与黑樱桃醇腈酶Ps HNL4蛋白相似度为92%,与桃假定的HNL蛋白相似度为77%。通过将Pd HNL1基因连接到原核表达载体p ET28(a)上,并转化大肠杆菌BL21(DE3)后,成功构建了原核表达重组菌株。SDS-PAGE电泳结果显示,重组蛋白受IPTG诱导表达,分子量大小约为62.4 ku,与已报道的其他蔷薇科植物的醇腈酶蛋白大小基本一致。; 傅江燕徐晟夏冰汪仁; 关键词：山桃基因克隆原核表达

一个新的忽地笑O-甲基转移酶基因的克隆与原核表达被引量：3: 2014年; 采用RACE技术克隆得到一个新的忽地笑O-甲基转移酶(OMT)基因,命名为LaOMT。LaOMT的cDNA序列为1 379 bp,开放阅读框1 077 bp,预测编码蛋白包含358个氨基酸。序列比对分析发现,LaOMT编码的蛋白序列具有依赖于S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)的高度保守的结构域,与葡萄、大豆等其他植物OMTs蛋白的相似性为50%左右。将LaOMT基因连接到原核表达载体pET28a上,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)的SDS-PAGE电泳结果显示,重组蛋白受异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,分子量大小约为45 kDa,与已报导的其他植物的OMTs蛋白大小基本一致。此外,半定量RT-PCR分析结果表明,LaOMT在忽地笑的叶、鳞茎、根和花中均有表达,其中花中的表达量最低。; 别庆玲徐晟傅江燕夏冰汪仁; 关键词：忽地笑加兰他敏原核表达 O-METHYLTRANSFERASE

石蒜LrCMO基因的克隆及表达分析被引量：2: 2017年; 以石蒜(Lycoris radiata)为试材,采用同源克隆和RACE的试验方法,克隆得到LrCMO基因全长cDNA,并对其进行了基因表达分析。结果表明:LrCMO基因全长1 472 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 281 bp,编码427个氨基酸残基,预测编码蛋白质的分子量为47.92 kD,理论等电点为5.72;LrCMO是一个稳定的疏水蛋白,不具有跨膜结构,含有叶绿体导肽;LrCMO基因编码的氨基酸与植物其他CMO蛋白具有较高的一致性,且与海枣PdCMO、香蕉MaCMO及油棕EgCMO亲缘关系最高,聚为一类。实时荧光定量PCR分析表明,LrCMO在根、鳞茎和叶片中有表达,且在鳞茎中的表达量最高;LrCMO受聚乙二醇(PEG)处理的诱导表达,其基因相对表达量在处理后12 h达到最高。随着处理时间的延长,LrCMO基因相对表达量逐渐下调至对照水平。; 徐晟蒋明敏江宜龙夏冰汪仁; 关键词：石蒜甜菜碱

石蒜Mg^(2+)转运体基因LrMGT的克隆与分析被引量：4: 2014年; 从石蒜〔Lycoris radiata(L’Hér.)Herb.〕叶片全长cDNA文库中克隆获得Mg2+转运体(MGT)基因LrMGT。序列分析结果显示:LrMGT基因的cDNA序列全长1 726 bp,其中开放阅读框(ORF)长度921 bp,编码306个氨基酸。石蒜LrMGT基因编码的氨基酸序列的理论相对分子质量为33 635,理论等电点为pI 5.14,为疏水性膜蛋白,不具有信号肽。序列比对结果表明:石蒜LrMGT基因编码的氨基酸序列与小米〔Setaria italica(Linn.)Beauv.〕、水稻(Oryza sativa Linn.)和拟南芥〔Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.〕等植物的MGT基因编码的氨基酸序列的相似性较高,相似度达到72%~76%;石蒜LrMGT基因与其他植物MGT基因编码的氨基酸序列的保守区域较大,均具有较高的保守性。在NJ系统树上石蒜LrMGT基因编码的氨基酸序列与禾本科(Gramineae)植物二穗短柄草〔Brachypodium distachyum(Linn.)Beauv.〕、水稻、高粱〔Sorghum bicolor(Linn.)Moench〕和小米MGT基因编码的氨基酸序列聚为同一个分支,表明它们可能具有较近的进化关系。实时荧光定量PCR结果表明:石蒜LrMGT基因在根和鳞茎中的相对表达量较高,在叶片和花中的相对表达量较低,具有明显的组织特异性。; 汪仁蔡黎丽徐晟李晓丹夏冰; 关键词：石蒜基因克隆同源性

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国家自然科学基金(31301798)