国家自然科学基金(30671787)
- 作品数：8 被引量：10H指数：2
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- 三氯乙烯对裸鼠皮肤中NO含量的影响及银杏叶提取物和维生素E的作用
- 2009年
- 目的研究三氯乙烯（TCE）刺激对BALB／c裸鼠皮肤一氧化氮（NO）含量的影响，并观察银杏叶提取物（GbE）和维生素E（VE）的保护作用。方法将132只BALB／e裸鼠随机分成空白对照组、溶剂对照组（橄榄油）、TCE组（20％TCE、40％TCE、80％TCE和100％TCE）、GbE保护组（0．1％GbE、1％GbE和10％GbE）和VE保护组（5％VE、10％VE和20％VE），每组11只，其中5只用于急性刺激试验，6只用于累积性刺激试验，观察皮肤刺激反应，并检测背部皮肤组织中NO的含量。结果（1）各浓度TCE处理后裸鼠背部皮肤均产生不同程度的红斑和水肿，随着TCE浓度的升高以及染毒时间延长，皮肤的炎症反应程度逐渐加重。10％GbE组和20％VE组皮肤基本保持完好状态。（2）在急性刺激试验中，80％、100％TCE组NO含量分别为（69．89±59．605）和（77．273±9．290）μmol／mg蛋白，与空白对照组和溶剂对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；各浓度GbE和VE预处理均能降低NO含量，与100％TCE组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。（3）在累积性刺激试验中，80％、100％TCE组NO含量分别为（60．362±9．817）和（68．027±9．354）μmol／mg蛋白，与空白对照和溶剂对照组相比，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；1％GbE和10％GbE组以及10％VE和20％VE组NO含量明显降低，与100％TCE组比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论TCE对BALB／c裸鼠皮肤产生刺激作用，并诱导皮肤中NO含量升高；GbE和VE对TCE所引起的皮肤损伤有一定的保护作用。
- 汪亮沈彤周承藩于均峰朱启星
- 关键词：三氯乙烯皮肤一氧化氮维生素E
- 三氯乙烯诱导人表皮角质形成细胞凋亡中依赖Caspase-9的Caspase-3激活被引量：4
- 2009年
- 目的探讨有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡过程中可能的信号通路。方法用0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mmol/L的TCE处理NHEK4h,并培养4、8、12、24h,分光光度法测上清中Caspase-9和Caspase-3活性,Annexin-V/PI双染后流式细胞仪(FCM)测细胞凋亡;Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK和Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理组,用100μmol/LZ-DEVD-FMK或Z-LEHD-FMK预处理NHEK1h,再用2.0mmol/LTCE染毒4h后培养至12h。结果不同浓度TCE处理NHEK4h后培养不同时间,可诱导Caspase-3和Caspase-9活性升高,培养12、24h时,各TCE处理组Caspase-3和Caspase-9活性与溶剂对照比差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度TCE处理NHEK4h后培养12h,凋亡细胞(Annexin-V+/PI-)所占百分比随TCE剂量增加而升高,除0.125mmol/LTCE组外,其它各处理组Annexin-V+/PI-细胞所占百分比与对照组比差异均有统计学意义(P<0.05)。相关分析显示Annexin-V+/PI-细胞所占百分比与Caspase-3和Caspase-9活性都呈正相关(P<0.05)。100μmol/LZ-DEVD-FMK预处理明显抑制2.0mmol/LTCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加(P<0.05),对Caspase-9活性影响不明显(P>0.05)。100μmol/LZ-LEHD-FMK预处理不仅抑制2.0mmol/LTCE诱导的Caspase-3活性上升和Annexin-V+/PI-细胞所占百分比的增加,还抑制Caspase-9活性上升(P<0.01)。结论TCE诱导NHEK凋亡中,内部凋亡途径中上游关键酶Caspase-9和下游效应分子Caspase-3均激活,且Caspase-3的激活依赖Casapase-9的活化。
- 沈彤叶良平汪立杰张学军朱启星
- 关键词：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9细胞凋亡
- 三氯乙烯诱导入表皮角质形成细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨有机溶剂三氯乙烯（TCE）诱导正常人表皮角质形成细胞（NHEK）凋亡的可能机制。方法TCE处理NHEK后，分光光度法测细胞上清中半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3、8和9的活性，膜联蛋白V／碘化丙啶（PI）双染后流式细胞仪（FCM）测细胞凋亡，Rhl23／PI双染后FCM测线粒体膜电位（△mm）；用Caspase-3抑制剂或Caspase-9抑制剂预处理NHEK1h，验证Caspase的活化。结果不同浓度TCE处理NHEK4h后培养不同时间，Caspase-3和9活性呈剂量和时间依赖的升高，培养12、24h，各TCE处理组Caspase-3和9活性与溶剂对照比差异均有统计学意义（均P〈0．05），而Caspase-8活性变化不明显。0．125、0．25、0．5、1．0和2．0mmol／LTCE处理NHEK4h后培养12h，膜联蛋白V＋／PI-为（20．1±4．1）％、（30．0±7．5）％、（42．1±8．2）％、（56．0±6．1）％和（79．1±4．3）％，除0．125mmol／L组外，其余组与溶剂对照组（9．4±3．0）％比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。膜联蛋白V＋／PI-与Caspase-3和9活性都呈正相关（r=0．786、0．736，均P〈0．05），Caspase-3活性与Caspase-9活性也呈正相关（r=0．845，P〈0．05），膜联蛋白V＋／PI-和Caspase-3活性均与Caspase-8活性无相关。100txmol／Lz-DEVD—FMK预处理使2．0mmol／LTCE处理的NHEK中Caspase-3活性从（0．963±0．043）nmo]pNA·min-1·ml-1。下降为（0．349±0．045）nmolpNA·min-1·ml-1膜联蛋白V＋／PI～从（80．0±5．5）％下降为（16．3±3．2）％（P〈0．01），Caspase-9活性变化不大（P〉0．05）。100μmol／L的Z．LEHD-FMK预处理不仅使得2．0mmol／LTCE处理的NHEK中Caspase-3活性下降为（0．338±0．011）nmolpNA·min-1·ml-1，膜联蛋白V＋／PI-下降为（16．1±1．7）％，而且Caspase-9活性也从（0．821±0．031）nmo]pNA-rain～·ml。下降为（0．240±0．043）nmo｜pNA·rain～·ml～，差异有统计学意义（P〈0．01
- 沈彤马泰叶良平汪立杰朱启星
- 关键词：三氯乙烯线粒体膜细胞凋亡角质形成细胞
- 细胞凋亡在三氯乙烯致皮肤刺激性损伤中的作用被引量：1
- 2009年
- 目的研究细胞凋亡在三氯乙烯（TCE）引起BALB／c裸鼠皮肤损伤小的作用并探讨其机制。方法将30只BALB/c裸鼠随机分为溶剂对照组、10％的TCE剂量组、20％TCE组、40％TCE组、80％TCE组、100％TCE组，应用TUNEL法检测TCE染毒的30只BALB／c裸鼠皮肤组织的细胞凋亡指数，应用免疫组化S-P法检测皮肤组织中caspase-8和cyt-c的表达。结果电镜结果显示高剂量组出现细胞调亡。40％、80％、100％TCE剂量组凋亡指数与对照组的差异有统计学意义（P〈0．01）；20％、40％、80％、100％TCE剂量组cyt c的表达水平分别为（2．60±0．54）、（3．42±0．56）、（5.81±1．30）、（6．00±0．70）明显高于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．01），各组caspase-8表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论TCE引起的早期皮肤组织损伤与细胞凋亡有关，而细胞凋亡可能与线粒体损伤有关。
- 于均峰朱启星
- 关键词：三氯乙烯细胞色素C
- 三氯乙烯诱导人角质形成细胞凋亡中Caspase-3活力的研究被引量：5
- 2009年
- 目的观察三氯乙烯(TCE)诱导离体培养的人角质形成细胞(KC)Caspase-3活力变化及细胞凋亡情况,探讨TCE诱导KC凋亡的可能信号通路。方法以不同浓度(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mmol/L)TCE对离体分离培养的KC分别染毒至4、8、12、24 h;Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-FMK)预处理组,先用100μmol/L Z-DEVD-FMK预处理细胞1 h,然后再用2.000 mmol/L TCE染毒12 h。用分光光度法检测细胞Caspase-3活力变化,借助Annexin-V/PI双染和流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与空白对照相比,TCE染毒4 h,各TCE剂量组Caspase-3活力无明显变化(P>0.05);染毒8 h,1.000 mmol/L TCE组Caspase-3活力和2.000 mmol/L TCE组Caspase-3活力,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);TCE染毒12 h和24 h,各TCE剂量组Caspase-3活力明显升高,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且呈剂量-效应关系。各TCE剂量组,在TCE浓度达到0.250 mmol/L以后,细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且明显呈剂量-效应关系。Z-DEVD-FMK预处理组,与2.000 mmol/L TCE组比较,Caspase-3活力和细胞凋亡率明显得到抑制(P<0.01),而与空白对照相比差异无显著性(P>0.01)。结论在TCE诱导离体培养的KC凋亡中,Caspase-3的活化可能发挥了重要的作用。
- 汪立杰叶良平沈彤朱启星
- 关键词：三氯乙烯角质形成细胞CASPASE-3
- 三氯乙烯诱导人角质形成细胞凋亡过程中caspase-8及caspase-9活力的变化
- 2009年
- 目的观察三氯乙烯（TCE）致人原代角质形成细胞（KC）损伤过程中caspase-8、caspase-9活力及细胞凋亡率的变化，探讨TCE引起KC凋亡的可能机制。方法体外培养的KC分别给予0．125、0．250、0．500、1．000和2．000mmol／L的TCE染毒4、8、12、24h，以100μmol／L的caspase-9特异抑制剂Z—LEHD—FMK预处理细胞1h，再用2．000mmol／LTCE染毒12h，MTT法检测细胞活力变化，分光光度法检测caspase-8及caspase-9活力变化，流式细胞仪检测细胞凋亡率变化。结果与空白对照相比，2．000和1．000mmol／LTCE染毒组作用8h后细胞活力降低，染毒超过12h，各剂量组细胞活力均降低，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。在不同的时间段，各剂量组的caspase-8活力与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。染毒8h时，2．000mmol／LTCE组caspase-9活力明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；12和24h时，各剂量组caspase-9活力与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。不同剂量的TCE染毒12h后，2．000mmol／LTCE染毒组细胞凋亡率升高至（80．43±4．21）％，空白对照组为（9．40±2．98）％，除0．125mmol／LTCE组外，其他各染毒组的细胞凋亡率与对照组相比，差异均有统计学意义（P〈0．05），剂量一效应关系明显。Caspase-9抑制剂预处理组caspase-9活力及细胞凋产率较2．000mmol／LTCE染毒组明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论Caspase-9的活化在TCE诱导的体外培养的人KC的凋亡过程中发挥重要作用。
- 朱启星叶良平汪立杰沈彤
- 关键词：CASPASE类
- 三氯乙烯致敏豚鼠单核淋巴细胞中β-arrestin蛋白表达和核转录因子及激活蛋白-1活性的研究
- 2010年
- 目的 测定三氯乙烯（TCE）致敏豚鼠外周血单核淋巴细胞（PBMC）中β-arrestin蛋白表达水平,核转录因子（NF-κB）和激活蛋白-1（AP-1）活性以及血清中肿瘤坏死因子（TNF-α）水平,探讨TCE致敏中免疫反应调节机制.方法 根据豚鼠最大值试验方法,用TCE对豚鼠进行处理（TCE处理组,14只）,同时设立空白对照（5只）和DNCB阳性对照（7只）,对受试动物进行皮肤反应评分,据此判断致敏与否,并把TCE处理组分为TCE致敏组和TCE未致敏组.提取豚鼠外周血单核细胞（PBMC）,用免疫蛋白印迹（Western bloting）法检测β-arrestin蛋白表达水平,用电泳迁移率试验（EMSA）方法检测NF-κB和AP-1活性.酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒检测血清中TNF-α水平.结果 空白对照组豚鼠未见红斑或水肿,TCE组的部分豚鼠皮肤出现红斑和水肿,致敏率为71.4%,DNCB处理组所有动物皮肤出现明显红斑或水肿,致敏率为100%.空白对照、TCE未致敏组、TCE致敏组和DNCB处理组豚鼠PBMC中β-arrestin蛋白表达水平比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.与空白对照组和TCE未致敏组相比,TCE致敏组NF-κB活性明显升高,且差异有统计学意义（P〈0.05）;而各组豚鼠AP-1活性比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.TCE致敏组血清中TNF-α水平[（55.485＋8.732）pg/ml]较空白对照组[（32.118±12.550）pg/ml]明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 以TCE致敏豚鼠β-arrestin和AP-1可能没被激活,而NF-κB被明显激活且在TCE致敏免疫反应中发挥着调节作用.
- 汪立杰郭瑞娟沈彤朱启星
- 关键词：三氯乙烯NF-ΚB
- TCE致皮肤角质形成细胞凋亡机制及银杏叶提取物的保护作用被引量：1
- 2008年
- 目的研究有机溶剂三氯乙烯(TCE)致角质形成细胞凋亡作用及其与凋亡诱导因子(AIF)的关系。方法将45只BALB/c裸鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组(橄榄油)、20%TCE、40%TCE、80%TCE、100%TCE组、0.1%银杏叶提取物(GbE)保护组、1%GbE保护组和10%GbE保护组;皮肤染毒,保护组为先用GbE涂皮后1h再涂抹TCE。小鼠均于涂抹TCE24h后处死,无菌条件下取皮,制成蜡块后切片,应用原位末端标记免疫化学法(TUNEL)检测细胞凋亡,应用免疫组化法检测皮肤组织AIF的表达。结果40%TCE、80%TCE和100%TCE组凋亡指数和AIF活性与空白组和溶剂对照组差异有统计学意义(P<0.01),TCE浓度越高,凋亡指数越高,AIF的表达水平也越高;1%GbE和10%GbE保护组凋亡指数和AIF活性与100%TCE组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论AIF可能参与了TCE诱导的裸鼠皮肤角质形成细胞凋亡,而GbE则对此显示出一定的保护作用。
- 戴丹沈彤于均峰俞韵朱启星
- 关键词：三氯乙烯银杏叶提取物凋亡诱导因子
