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国家自然科学基金(30471963)

作品数:4 被引量:6H指数:2
相关作者:章杰闫媛杨渝珍黄涛高军更多>>
相关机构:华中科技大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 2篇生物学
  • 2篇医药卫生

主题

  • 2篇细胞
  • 2篇腺癌
  • 1篇亚克隆
  • 1篇胰腺
  • 1篇胰腺癌
  • 1篇胰腺癌细胞
  • 1篇胰腺肿瘤
  • 1篇增殖
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核表达载体
  • 1篇整合素
  • 1篇体外
  • 1篇体外增殖
  • 1篇肿瘤
  • 1篇重叠延伸PC...
  • 1篇重叠延伸PC...
  • 1篇重组体
  • 1篇转染
  • 1篇稳定转染

机构

  • 3篇华中科技大学

作者

  • 2篇杨渝珍
  • 2篇闫媛
  • 2篇章杰
  • 1篇李小欧
  • 1篇常青
  • 1篇李凌波
  • 1篇冯延平
  • 1篇裘法祖
  • 1篇秦仁义
  • 1篇黄巍
  • 1篇夏维
  • 1篇李禹琼
  • 1篇高军
  • 1篇黄涛
  • 1篇过健俐

传媒

  • 1篇中国肿瘤临床
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇华中科技大学...
  • 1篇The Ch...

年份

  • 1篇2008
  • 2篇2007
  • 1篇2006
4 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
重叠延伸PCR法构建人肿瘤坏死因子前体水解酶系列突变重组体及稳定转染HeLa细胞株的建立被引量:2
2008年
目的构建人肿瘤坏死因子前体水解酶(TACE)系列真核表达载体,转染HeLa细胞,建立稳定转染的HeLa细胞系。方法以THP1细胞cDNA为模板,PCR扩增人TACE基因的全长cDNA编码区序列,将其插入pMD18T载体中,构建出pMD18T-FL-TACE载体。在此基础上,应用重叠延伸PCR扩增出缺失解整合素区的TACE重组cDNA和缺失酶区的TACE重组cDNA,利用DNA重组技术将其分别定向插入真核表达载体pIRES2.0-EGFP中,同时TACE全长也构建入pIRES20.-EGFP。这3种真核表达载体经酶切和测序鉴定后,用脂质体法转染HeLa细胞,经过G418筛选,获得稳定转染的HeLa细胞株,采用RT-PCR、Westernblot及荧光法检测表达。结果成功构建了pIRES2.0-EG-FP/FL-TACE、pIRES20.-EGFP/disΔ-TACE、pIRES20.-EGFP/metΔ-TACE真核表达载体,并建立了稳定转染的HeLa细胞株,成功地表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染HeLa细胞株的建立为进一步研究TACE功能奠定了必要的实验基础。
闫媛章杰杨渝珍过健俐李禹琼
关键词:真核表达载体重叠延伸PCR转染
重组人TACE的解整合素域对人肺腺癌A549体外增殖、粘附和侵袭的抑制作用
2007年
为了解人TACE的解整合素域对肿瘤细胞粘附和侵袭的影响以及其独立于其他结构域发挥作用的能力,从单核细胞系THP1中提取RNA,RT-PCR扩增出TACE全长基因,构建了pMD18T-TACE载体。对pMD18T-TACE质粒进行PCR,分别扩增T300(300bp,编码解整合素域)、T800(800bp,编码酶催化域)及T1300(1300bp,编码胞外域)三个片段,将其分别亚克隆至表达载体pET28a(+)。把质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),表达产物均以不溶性包涵体形式存在。经过溶解包涵体、BBSTNTA树脂柱亲和层析并透析复性,获得高纯度的三种活性蛋白。MTT法、细胞粘附实验、Transwell小室侵袭实验分别显示TACE解整合素域、胞外域蛋白均能明显抑制A549细胞的增殖,且以剂量依赖性的方式抑制A549细胞与纤维粘连蛋白的粘附,并能抑制Transwell小室中A549细胞对Matrigel模拟的天然基底膜的侵袭,而酶催化域蛋白则无相应的抑制能力。表明重组TACE解整合素域蛋白可独立抑制肿瘤细胞的增殖、粘附和侵袭,为深入研究该区域的作用及TACE在肿瘤发病中的机制提供了新的认识。
闫媛李小欧章杰黄巍李凌波杨渝珍
关键词:TACE亚克隆
β_1整合素反义寡核苷酸对人胰腺癌细胞BXPC-3生长和化疗敏感性的影响被引量:3
2006年
目的:观察β1整合素反义寡核苷酸(ASODNs)对人胰腺癌细胞BXPC-3β1整合素mRNA表达及细胞生长和对化疗药物敏感性的影响。方法:采用脂质体将不同浓度β1整合素ASODNs转染到人胰腺癌细胞BXPC-3中,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞β1整合素mRNA表达水平,MTT法检测细胞相对存活率。转染β1整合素ASODNs24h后,给予梯度浓度5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素和健择,观察量效关系,计算IC50。结果:与对照组相比,32mg/L~128mg/LASODNs转染后可抑制胰腺癌细胞的生长,且呈量效依赖关系,64mg/L和128mg/L抑制作用最明显,其对应的β1整合素mRNA表达水平显著降低。转染β1整合素ASODNs能增加胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性,ASODNs+化疗组对各化疗药物的IC50均有显著下降。结论:靶向β1整合素的反义寡核苷酸可有效阻断其在人胰腺癌细胞中的表达,抑制胰腺癌细胞生长,增强对化疗药物敏感性。
黄涛常青高军冯延平夏维秦仁义裘法祖
关键词:反义寡核苷酸Β1整合素胰腺肿瘤化疗敏感性
Isolation of side population cells from gallbladder carcinoma of human being and the expression of ABCG2 gene被引量:1
2007年
Objective: To investigate whether the side population cells (SP cells) exist in human gallbladder carcinoma cell line and the differences of drug resistance gene ABCG2 expression in SP cells, non-SP cells and GBC-SD cell lines. Methods: Fluorescence activated cell sorter (FACS) was used to sort the SP and non-SP cells from GBC-SD cell line of gallbladder carcinoma of human being. Then, the sorting cells were cultured and detected the expression of ABCG2 gene among the SP cells, non-SP cells and GBC-SD cell lines by using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), immunofluo-rescence chemistry, western blot and flow cytometry techniques. Results: A very small fraction cells (0.64 ± 0.08%) were iso-lated through FACS analysis which had the potency of stem cells and highly expressed ABCG2 gene (89.56 ± 3.86%). On the contrary, there were nearly no expression in non-SP cells (1.32 ± 0.49%) and lower expression in GBC-SD cell line (12.37 ± 1.61%). Conclusion: The side population cells that had the potency of stem cells existed in human gallbladder carcinoma cell line and over-expressed the drug resistance gene ABCG2. They may be play an important role in drug resistance of tumor.
Jun HuJian LiMin WangZhiyong DuMin ChenRenyi Qin
关键词:ABCG2
共1页<1>
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