吴阶平医学基金(32067501319)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
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- 蛋白酶体抑制剂MG132联合顺铂诱导肺癌A549细胞凋亡的机制被引量：2
- 2014年
- 目的探讨蛋白酶体抑制剂(MG132)与顺铂(DDP)联合诱导肺癌A549细胞凋亡的机制及作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度MG132、DDP对肺癌A549细胞的最适作用时间以及抑制率;通过Hochest33342染色法检测细胞形态变化;应用流式细胞术(FCW)检测MG132、DDP及两药联合作用于肺癌A549细胞的凋亡率;采用Western印迹检测药物干预前后细胞中促凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶(caspase)9、核转录因子(NF-κB)的表达情况。结果 MTT结果显示MG132、DDP能有效抑制细胞的增殖,呈浓度及时间依赖性;FCW结果显示MG132与DDP联合用药组作用于肺癌A549细胞凋亡率为(68.27±0.31)%,与MG132(22.13±0.36)%、DDP(25.76±0.25)%单用药组相比,细胞凋亡率明显提高(P<0.05)。Western印迹结果显示,与单用药组相比较,联合用药组凋亡相关蛋白caspase9表达明显增强,NF-κB表达显著减少。结论 MG132与DDP联合应用可明显提高细胞凋亡率,其机制可能是通过提高促凋亡蛋白caspase9的表达,并降低细胞NF-κB的表达而实现的。
- 韩玉杰赵松杨洋刘东雷吴恺潘丽红朱砾
- 关键词：蛋白酶体抑制剂顺铂肺癌A549细胞细胞凋亡
- 自噬在蛋白酶体抑制剂诱导的食管鳞癌细胞死亡中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的 观察自噬在蛋白酶体抑制剂MG132诱导的食管鳞癌细胞死亡中的作用.方法 用20 μmol/L MG132和（或）5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤（3-MA）处理人食管鳞癌EC9706细胞,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）双染色流式细胞术检测细胞凋亡率；吖啶橙（AO）染色荧光显微镜观察细胞酸性自噬泡的变化；Western blot法检测自噬相关蛋白Beclin-1及凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-9的表达.结果 流式细胞仪检测示MG132、3-MA及MG132＋ 3-MA组细胞凋亡率为（57.37±0.81）％、（9.43±0.15）％、（79.40±0.92）％.MG132组经吖啶橙染色后,细胞内酸性自噬泡明显增加,呈明亮的红色荧光,而加入3-MA联合作用后,则上述现象被抑制.Western blot结果示对照组、MG132、3-MA及MG132＋ 3-MA组Beclin-1和Caspase-9相对灰度值分别为0.57 ±0.01、0.90 ±0.03、0.49 ±0.14、0.65±0.01和0.61±0.05、0.88±0.02、0.70 ±0.01、0.98±0.02.结论 MG132可以诱导食管鳞癌细胞凋亡,并可激活其自噬；3-MA可能通过上调Caspase-9的表达增强MG132对食管癌细胞的杀伤作用.
- 潘丽红赵松党丽峰杨洋刘东雷吴恺
- 关键词：MG132自噬食管鳞癌
- 自噬在胰岛素促进顺铂诱导EC9706细胞凋亡中的作用被引量：7
- 2013年
- 目的 观察自噬和凋亡在胰岛素对人食管鳞癌细胞化疗增敏中的作用.方法 以140 mg/L顺铂作用于食管鳞癌EC9706细胞,噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力,探寻活细胞数量达到平台期的时间T1（24 h）,加入10 mU/ml胰岛素继续培养,6h后活细胞数再次达到T2平台期.分别收集T1、T2平台期细胞,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）和单丹磺酰戊二胺（MDC）染色后,荧光显微镜下定性观察荧光;流式细胞术定量检测细胞凋亡、测定MDC荧光强度;Westernblot检测自噬相关蛋白Beclin-1的表达.结果 （1）T1平台期细胞凋亡率为（32.6±4.3）％,低于T2平台期的（47.5±5.6）％,差异有统计学意义（P＜0.05）,但T1平台期细胞MDC平均荧光强度为104.9±13.2,明显高于T2平台期的82.6±10.3,差异有统计学意义（P＜0.05）.（2）加入胰岛素后Beclin-1的表达显著下调,对照组、T1平台期、T2平台期的相对灰度值分别为0.151±0.053、0.657±0.050、0.453±0.032,任意两组之间差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 通过抑制自噬,增加细胞凋亡,胰岛素提高了食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性.
- 温丰标杨洋刘东雷吴恺齐宇赵佳赵松
- 关键词：食管鳞癌自噬脱噬作用胰岛素
- 负载k-ras抗原的树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞对肺癌细胞的体内杀伤作用被引量：1
- 2013年
- 目的 观察k-ras突变多肽致敏的树突状细胞（DC）诱导活化的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对肺癌细胞的体内杀伤作用.方法 联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）1000 mg/L和白细胞介素4（IL-4） 500 mg/L诱导外周血DC,分别使用表达k-ras突变体的肺癌细胞抗原、单纯k-ras突变体抗原表位肽和k-ras突变体抗原表位肽阳离子纳米颗粒致敏DC,进而通过诱导刺激T淋巴细胞得到特异性的CTL.分别使用肺癌A549、NCH-446细胞株建立荷瘤裸鼠模型,以评价CTL体内抗肿瘤活性.结果 负载全瘤抗原的DC诱导产生的CTL对表达k-ras阳性（A549）的肺癌细胞具有较好的抑制作用,而对k-ras表达阴性（NCH-446）的肺癌细胞抑制作用与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 负载肿瘤抗原的DC诱导CTL能够显著抑制肿瘤的生长速度,进而提高荷瘤裸鼠的生存时间,表明其可增加特异性抗肿瘤作用.
- 朱登彦党丽峰杨洋刘东雷吴恺赵松
- 关键词：肺癌树突状细胞细胞毒性T细胞
- 自噬在厄洛替尼诱导的肺腺癌细胞A549凋亡中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的探讨自噬对厄洛替尼(Erlotinib,特罗凯)诱导的肺腺癌细胞A549凋亡中的影响。方法用厄洛替尼和(或)自噬抑制剂3甲级腺嘌呤(3-MA)处理人肺腺癌A549细胞系,AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率;吖啶橙(AO)染色荧光显微镜观察细胞酸性自噬泡的变化;Western印迹法检测自噬相关蛋白Beclin1及凋亡相关蛋白Caspase9的表达。结果流式细胞仪检测示厄洛替尼组、3-MA组、厄洛替尼+3-MA组细胞凋亡率为(56.35±0.71)%、(9.47±0.15)%、(78.40±0.52)%。厄洛替尼组经吖啶橙染色后,细胞内酸性自噬泡明显增加,呈明亮的红色荧光,而加入3-MA联合作用后,则上述现象被抑制。Western印迹结果示对照组、厄洛替尼组、3-MA组、厄洛替尼+3-MA组Beclin1和Caspase9相对灰度值分别为0.54±0.03、0.86±0.03、0.37±0.02、0.70±0.04和0.43±0.03、0.77±0.03、0.57±0.04、0.90±0.02。结论厄洛替尼可以诱导肺腺癌细胞A549细胞系凋亡,并可激活其自噬;3-MA可能通过抑制自噬且上调Caspase9的表达增强厄洛替尼对肺腺癌细胞的杀伤作用。
- 徐磊赵松党丽峰齐宇杨洋刘东雷吴恺王啸林鲍培龙
- 关键词：厄洛替尼自噬肺腺癌A549细胞
- 蛋白酶体抑制剂MG132与顺铂联合应用对肺癌A549细胞凋亡的影响被引量：3
- 2014年
- 目的 观察蛋白酶体抑制剂MG132联合顺铂（DDP）应用对肺癌A549细胞凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-9和核转录因子-κB （NF-κB）表达的变化.方法 采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测30 μmol/L MG132和/或20 mg/L DDP对肺癌A549细胞抑制率的影响;Hoehest 33342染色观察细胞的形态变化;流式细胞术（FCW）检测细胞凋亡率;采用Western blot法检测细胞中NF-κB、Caspase-9蛋白的表达.结果 CCK-8检测结果显示MG132与DDP能有效抑制细胞的增殖,呈浓度及时间依赖性.流式细胞术检测显示,MG132＋DDP联合用药组凋亡率为（65.43±1.09）％,与MG132组的（23.23±0.96）％和DDP组的（24.86 ±0.40）％比较,细胞凋亡率明显提高（P＜0.05）.Western blot法结果显示联合用药组较单用药组细胞凋亡相关蛋白Caspase-9表达明显增强,核转录因子NF-κB表达显著减少.结论 MG132与DDP联合应用可明显提高细胞凋亡率,其机制可能是通过降低细胞NF-κB的表达,并提高Caspase-9的表达而实现的.
- 韩玉杰赵松杨洋刘东雷吴恺
- 关键词：肺癌A549细胞MG132顺铂核转录因子-ΚB
