国家自然科学基金(30371483)
- 作品数：22 被引量：94H指数：5
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- HPV16E7 siRNA表达载体抑制宫颈癌SiHa细胞E7基因的研究被引量：2
- 2007年
- 目的:研究HPV16E7siRNA表达载体对宫颈癌SiHa细胞E7基因的抑制作用。方法:利用脂质体将HPV16E7 siRNA表达载体psiRNA-1、psiRNA-2、psiRNA-3及空载体psiRNA转染SiHa细胞,以荧光定量RT-PCR和流式细胞仪检测不同时间点E7 mRNA和蛋白的变化。结果:载体psiRNA-1、psiRNA-2和psiRNA-3均能抑制SiHa细胞E7基因 mRNA和蛋白的表达,其中载体psiRNA-1的抑制作用最强。在抗性克隆形成后1周和4周,对E7mR-NA和蛋白抑制率分别为92.15%、84.30%和65.69%、59.11%。而空载体对E7mR-NA和蛋白的表达均无明显抑制作用。结论:HPV16E7 siRNA表达载体能较长期地抑制宫颈癌SiHa细胞E7基因的表达。
- 王丹青彭芝兰周慧梅李大可
- 自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其对宫颈癌细胞HeLa生长的作用被引量：5
- 2007年
- 目的构建自噬基因Beclin 1小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,探讨Beclin 1抑制后对宫颈癌HeLa细胞生长的作用。方法根据人Beclin 1 mRNA编码序列,设计RNA干扰靶点,构建Beclin 1 shRNA表达质粒,脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响。MTT法分析其对细胞增殖、流式细胞仪检测其对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果构建的shRNA表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低。结论成功构建了针对自噬基因Beclin 1的shRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中Beclin 1的表达,并促进细胞生长,抑制凋亡。
- 王赞宏彭芝兰段振玲闫乃红
- 关键词：RNA干扰自噬BECLIN
- HPV16E6基因特异性RNA干扰表达载体的构建及对HPV16E6基因抑制作用的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:构建针对HPV16 E6基因的RNA干扰表达载体,并研究其对宫颈癌HPV16 E6基因的抑制作用。方法:针对HPV16 E6基因序列设计shRNA(short hairpin RNAs,shRNAs)片断,构建针对HPV16 E6基因的RNA干扰(RNA interference,RN Ai)质粒表达载体,脂质体法转染宫颈癌Caski细胞株,应用荧光定量PCR及流式细胞术检测其对HPV16 E6 mRNA及蛋白表达的影响。结果:经PCR及测序证实3种表达载体构建成功,细胞试验表明3种表达载体均抑制了HPV16 E6的mRNA及蛋白的表达,其中CaskiB细胞HPV16E6mRNA的抑制率为89.5%,蛋白抑制率达98.1%。结论:RNAi表达载体可以有效的抑制HPV16 E6基因的表达。
- 李大可彭芝兰尤志学
- 关键词：RNA干扰FQ-PCR
- G蛋白偶联受体4对人乳头瘤病毒感染宫颈癌组织新生血管建立的影响和诊断价值被引量：6
- 2018年
- 目的探究G蛋白偶联受体4（G-protein coupled receptor 4，LGR4）对人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染宫颈癌组织新生血管建立的影响和诊断价值。方法选取自2016年3月至2017年12月间来我院接受检查的HPV感染的宫颈癌患者、宫颈癌前病变者和宫颈健康者各30例作为研究对象，经研究对象本人同意后进行标本采集。免疫组化法观察三种组织标本的LGR4的阳性率，筛检试验观察LGR4在宫颈癌的分化、分期和分型中的诊断价值，观察LGR4阳性组织中相关促血管生成因子的表达。结果健康组织、癌前病变组织和宫颈癌组织中LGR4表达差异有统计学意义（χ2＝24.104，P＝0.000），且宫颈癌组织内LGR4的表达阳性率80.0%（24/30）显著高于健康组16.7%（5/30）和癌前病变组织50.0%（15/30），差异均有统计学意义（P均〈0.05）。LGR4的灵敏度80.00%，特异度83.33%，阳性预测值82.76%，阴性预测值80.65%，诊断准确率81.67%和Kappa值为0.63，一致性良好。不同年龄、不同分化程度和不同临床分期LGR4阳性率相比，差异均有统计学意义（P均〈0.05）。实验室结果显示，在宫颈癌前病变组织和宫颈癌LGR4阳性组织中超敏C反应蛋白、降钙素原、血管内皮因子和生长因子β均显著高于LGR4阴性组织，差异均有统计学意义（t值分别为9.247、2.925、39.669、15.348，P均〈0.05）。结论LGR4能够促进宫颈癌组织内新生血管的建立，对宫颈癌和宫颈癌前病变具有一定的诊断价值。
- 李付连索玉平王谋香王玉秀李丽花王鑫
- 关键词：HPV感染宫颈癌血管建立
- siRNA表达载体对宫颈癌Caski细胞凋亡和增殖的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:观察HPV16 E6 siRNA表达载体对宫颈癌Caski细胞凋亡和增殖的影响。方法:利用脂质体将HPV16 E6特异性siRNA表达载体转染Caski细胞,通过荧光定量RT-PCR检测E6 mRNA的变化,流式细胞仪检测E6蛋白和细胞凋亡率的变化,MTT法和细胞克隆法检测细胞增殖的变化。结果:HPV16 E6 siRNA表达载体可明显抑制Caski细胞E6 mRNA和E6蛋白的表达,抑制率分别为89.5%和98.1%;表达载体可明显增加细胞凋亡率,抑制细胞的增殖和克隆的形成。结论:HPV16 E6siRNA表达载体可以特异高效地抑制宫颈癌Caski细胞E6基因的表达,增加细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞增殖和克隆的形成。
- 李大可彭芝兰周斌兵
- 关键词：SIRNA表达载体宫颈癌细胞增殖凋亡
- 小发夹RNA介导的基因沉默及其应用被引量：2
- 2006年
- 王丹青彭芝兰
- 关键词：RNA干扰SHRNA基因功能分析基因治疗
- 短发夹状RNA抑制子宫颈癌Siha细胞HPV16 E6基因的表达
- 2009年
- 目的研究人乳头状瘤病毒(HPV)16 E6 siRNA表达载体对宫颈癌Siha细胞株HPV16 E6基因的抑制作用。方法利用脂质体将HPV16E6特异性si RNA表达载体转染宫颈癌Siha细胞株,应用荧光定量RT-PCR检测HPV16 E6 mRNA的变化,流式细胞术检测E6蛋白表达的变化。结果细胞试验表明HPV16 E6siRNA表达载体可明显抑制Siha细胞E6 mRNA和E6蛋白的表达,抑制率分别为92.65%和84.40%。且其抑制效果可维持4周以上。结论HPV16 E6 siRNA表达载体可以高效、特异、长期的抑制宫颈癌Siha细胞HPV16 E6基因的表达。
- 李大可彭芝兰尤志学周斌兵
- 关键词：SIRNA表达载体人乳头状瘤病毒16E6宫颈癌
- RNA干扰技术逆转卵巢上皮性癌细胞多药耐药的研究被引量：13
- 2006年
- 目的探讨应用RNA干扰(RNAi)技术逆转卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞多药耐药的可行性。方法将设计合成的针对多药耐药基因MDR1的特异性小分子干扰RNA(siRNA),用脂质体转染具有MDR1基因高表达的卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OVCAR8/TR。用荧光定量RT-PCR技术和流式细胞仪分别测定转染前后细胞MDR1mRNA及糖蛋白P-gp表达的变化;三磷酸腺苷(ATP)生物荧光法检测转染前后细胞对顺铂、氟尿嘧啶、阿霉素和紫杉醇药物敏感性(以ATP抑制率判断)的变化情况。结果转染后24、48、72、96和120h,OVCAR8/TR细胞MDR1mRNA的抑制率分别为26·42%、84·00%、78·43%、45·85%和0;转染后48h MDR1mRNA的抑制率达到最高峰。转染后24、48、72、96和120h,OVCAR8/TR细胞P-gp的抑制率分别为16·71%、49·64%、85·23%、65·98%和9·44%;转染后72h P-gp的抑制率达到最高。转染MDR1siRNA后,能够明显提高OVCAR8/TR细胞对紫杉醇和阿霉素的敏感性,在紫杉醇的作用下,转染前后OVCAR8/TR细胞的ATP抑制率分别为(25·8±3·1)%和(78·0±9·8)%,转染前后比较,差异有统计学意义(P<0·05)。结论在OVCAR8/TR细胞中,针对MDR1合成的siRNA能够有效地抑制MDR1mRNA和P-gp的表达,并能恢复其对紫杉醇和阿霉素的敏感性。应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的多药耐药。
- 楼江燕彭芝兰郑莹王和何斌王红静
- 关键词：小分子干扰MDR细胞系
- RNA干涉宫颈癌细胞抑制HPV16 E6基因表达对FHIT基因表达的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:研究HPV16 E6基因被RNA干涉抑制后FHIT基因表达的变化,探讨两者在宫颈癌组织中的相关性。方法:合成针对HPV16 E6基因的特异性si RNA,脂质体介导转染宫颈癌CaSki细胞,RT-PCR测定转染前后HPV16E6、FHIT基因mRNA表达;Western blot和流式细胞仪检测转染前后HPV16E6、FHIT蛋白表达情况。结果:将HPV16 E6 si RNA转染CaSki细胞后48h,HPV16E6mRNA表达水平较转染前降低了80.3%,P<0.01;FHIT mRNA的表达水平较转染前升高了41.7%,P<0.01。转染前后HPV16E6蛋白表达水平分别为26.7±3.3和8.2±1.1,t=14.224,P=0.005;FHIT蛋白表达水平分别为73.5±5.6和109.9±5.1,t=22.018,P=0.002。结论:抑制HPV16 E6基因的表达可使宫颈癌组织中FHIT基因的表达增加。
- 范余娟彭芝兰牛晓宇王和陈悦悦李文
- 关键词：基因表达
- RNA干涉宫颈癌HPV16 E6基因的体内实验研究
- 2005年
- 目的:采用RNA干涉技术干扰宫颈癌HPV16 E6基因转录,通过体内动物实验了解其抑制HPV16 E6基因的效率。方法:设计合成针对HPV16 E6的siRNA,借脂质体转染宫颈癌CaSki细胞,通过体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将E6 siRNA直接注入动物腹腔或瘤体,通过移植瘤体积、重量的变化,肿瘤切片HPV16 E6免疫组化,肿瘤细胞凋亡来了解RNA干涉的效果。结果:体内实验中无论腹腔还是瘤内注射HPV16 E6 siRNA,均明显抑制肿瘤的生长,HPV16 E6蛋白表达明显受抑,肿瘤细胞凋亡增加,重复给药较单次给药效果更好。结论:宫颈癌裸鼠移植瘤实验表明RNA干涉HPV16 E6基因的效果具有特异性和高效性。
- 牛晓宇彭芝兰段伟强陈杰
- 关键词：RNA干涉HPV16E6宫颈癌
