南京市医学科技发展项目(ZKX0303)
- 作品数：12 被引量：33H指数：4
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- 相关机构：东南大学医学院附属南京第二医院南京军区南京总医院江苏大学更多>>
- 发文基金：南京市医学科技发展项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 6项指标在肝纤维化评估中的临床应用被引量：9
- 2009年
- 目的探讨慢性肝炎患者6项指标用于肝纤维化评估的价值。方法185例慢性肝炎患者行常规肝穿刺、组织病理学诊断,用ELISA法检测血清中结缔组织生长因子(CTGF)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、转化生长因子-β1(TGF-β1),常规检测凝血酶原时间(PT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和血小板(PLT)及其计算指标APRI(AST/PLT),用ROC曲线评估这些指标在肝纤维化诊断中的价值。结果血清CTGF、PDGF-BB、TIMP-1、TGF-β1、APRI、PT的ROC曲线下面积(AUC)分别为:0.833,0.811,0.669,0.529,0.809,0.625。联合CTGF和APRI可以明显提高诊断的准确性。结论CTGF、PDGF-BB、APRI在肝纤维化评估中有较高的诊断价值,联合这些指标可以提高肝纤维化的诊断性能。
- 张岱王念跃史玉领房国祥
- 关键词：慢性肝炎肝纤维化结缔组织生长因子血小板衍生生长因子
- 两种pH值条件下CNBr活化Sepharose 4B偶联DSA方法的比较研究被引量：5
- 2005年
- 目的研究碱性、中性两种条件下CNBr活化Sepharose 4B偶联欧蔓陀罗凝集素(DSA)的效果。方法在两种偶联条件下,通过改变CNBr用量、活化时间以及温度等条件,观察DSA的偶联率指标。结果碱性条件下,活化15 min即使增加CNBr用量至300 mg/ml凝胶,固定化凝集素偶联率没有提高,DSA偶联率较低,在29.1%~50.9%之间;中性条件下,CNBr用量仅为碱性条件下的20%,活化温度控制在-10^-20℃可能获得较好的活化效果,DSA偶联率在78.8%~80.9%之间。结论中性条件下CNBr活化Sepharose 4B偶联DSA,实验易于控制,DSA偶联率比较稳定,实验重复性好于碱性条件下的结果,且可获较高偶联率的DSA-Sepharose 4B。
- 王念跃赵伟李勇黄宇峰端木浩
- 关键词：偶联糖蛋白
- 肝细胞癌患者外周血单个核细胞端粒酶的表达
- 2008年
- 目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)端粒酶活性在肝细胞癌(HCC)患者中的意义。方法采用PCR-TRAP-ELISA法检测HCC、慢性肝炎和健康人PBMC端粒酶活性。结果HCC患者PBMC端粒酶活性与肿瘤组织学分化程度、肿瘤直径、血清AFP水平无显著相关性。但与门静脉侵犯和术后1年内复发显著相关。结论PBMC端粒酶活性的高表达是HCC术后复发的指标。
- 马莹何晓松王念跃
- 关键词：端粒酶肝细胞癌单个核细胞
- 人肝癌组织特异性γ-谷氨酰转移酶分离纯化
- 2007年
- 目的:分离纯化人肝癌组织中特异性γ-谷氨酰转移酶(GGT),为进一步制备其抗血清提供抗原材料,以便对肝癌早期诊断进行研究。方法:人肝癌组织经匀浆、离心、溶解、透析、凝胶层析及凝集素亲和层析等步骤进行分离纯化;纯化过程用IFCC推荐方法监测GGT催化活性,紫外法监测蛋白质出峰图谱,Lowry法测定蛋白含量。结果:经过粗提、DEAE阴离子交换层析、凝胶过滤层析及凝集素亲和层析等纯化步骤得到电泳纯的GGT,其比活为10.58U/mg蛋白,纯化倍数为84.9,得率为1.60%。结论:该方法能够较好地分离纯化人肝癌组织中特异性GGT。
- 王念跃赵伟李勇端木浩黄宇峰
- 从人的肝癌组织中快速分离纯化γ-谷氨酰转移酶被引量：1
- 2006年
- 目的应用KTATMexplorer 100蛋白质快速色谱纯化系统从人肝癌组织中分离纯化特异性γ-谷氨酰转移酶(GGT),为制备其抗血清提供抗原材料,以便对肝癌早期诊断进行研究。方法人肝癌组织经匀浆、离心、溶解、透析和色谱等步骤进行纯化;纯化过程中用国际临床化学学会推荐方法测定GGT催化活性,用紫外法监测蛋白质出峰图谱,考马斯亮蓝法测定蛋白质含量。结果人肝癌组织经过粗提、疏水色谱、DEAE阴离子交换色谱等纯化步骤得到电泳纯的GGT,其比活为0.36 U/mg蛋白质,纯化倍数为24,回收率为5.0%。结论该纯化方法能较好且有效地分离纯化肝癌特异性GGT。
- 李勇王念跃赵伟孟泽史力宁宋熠春严明
- 关键词：Γ-谷氨酰转移酶人肝癌组织色谱纯化抗原
- DSA亲和色谱检测肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶的临床应用被引量：1
- 2006年
- 目的应用建立的凝集素亲和色谱技术,分离血清肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶(HS-GGT),并观察HS-GGT在正常人、良性肝病及原发性肝癌(PHC)患者中的变化,以期建立1种简便易行的PHC实验室诊断方法。方法PHC 64例、肝外肿瘤22例、良性肝病68例及正常对照血清21例,以神经胺酸酶(NMD)水解后直接用欧蔓陀罗凝集素(DSA)亲和色谱柱分离,首先用柱平衡液洗脱不结合组分,再用0.05 mol/L醋酸洗弱结合组分,最后用0.1 mol/L醋酸洗脱强结合组分,用连续监测法测定洗脱液的GGT活性,计算各组分所占比例,统计分析其临床应用价值。结果DSA强结合的GGTⅢ为PHC患者所特有,以其在总GGT所占比例大于2%为PHC诊断的Cutoff值,其诊断特异性为95.5%,灵敏度为85.8%,准确度为92.0%。结论该方法能较好地鉴别诊断PHC,较以往的其他检测方法更为简便,并有较高诊断灵敏度和特异性。
- 文剑王念跃吴引伟
- 关键词：Γ-谷氨酰转移酶甲胎蛋白
- 血清肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶ELISA检测方法的建立及临床应用被引量：1
- 2009年
- 目的应用抗人肝癌组织中蔓陀罗凝集素（DSA）强结合的γ-谷氨酰转移酶（GGT）单克隆抗体（McAb），建立其血清DSA—GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法，并探讨其在原发性肝癌（PHC）诊断的应用价值。方法通过McAb技术制备的抗DSA—GGT的McAb，采用蛋白G亲和层析柱色谱纯化；纯化的McAb经生物素标记后，构建血清DSA—GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法。用建立的方法对39例PHC患者和122例非PHC患者进行初步临床应用研究，用P—P概率图检验119例健康对照血清DSA—GGT分布状态，依据受试者工作曲线（ROC）确定DSA．GGT诊断PHC的cut-off值。结果获取5株分泌McAb杂交瘤细胞制备的腹腔积液，经纯化后McAb蛋白总量在2．12～6．70mg之间；McAb的生物素标记率为48．6％～72．2％。所构建的血清DSA—GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法的最低检出限为2μg／L；平均批内、批间变异分别为8．9％和11．5％。119份健康对照血清DSA—GGT水平呈正态分布，x±s为（1．50±0．51）μg/L；经ROC分析确定其诊断PHC的临界值为3．25μg／L。39例PHC患者26例DSA—GGT阳性，其诊断PHC敏感度为66．7％；122例非PHC患者10例DSA—GGT阳性，其诊断特异度为91．8％。结论所建立的血清DSA—GGT生物素一链霉亲和素ELISA检测方法具有良好的重复性和可靠性。临床初步应用表明其诊断PHC的敏感度、特异度良好，且方法操作简便，便于临床推广应用，为PHC实验室诊断提供了新方法。
- 王念跃赵伟刘晨文剑张永臣端木浩
- 关键词：Γ-谷氨酰转移酶单克隆酶联免疫吸附测定抗生物素蛋白
- 用欧蔓陀罗凝集素分离纯化人肝癌组织中强结合的γ-谷氨酰转移酶被引量：5
- 2006年
- 目的用欧蔓陀罗凝集素分离纯化人肝癌组织中强结合的γ-谷氨酰转移酶(γGT),为进一步制备其抗血清提供抗原,以期对肝癌早期诊断进行研究。方法人肝癌组织经匀浆、溶解、盐析、透析、层析等步骤进行分离纯化;纯化过程中用IFCC推荐方法测定洗脱物的γGT催化活性,用紫外法监测蛋白出峰图谱,用Lowry法测定蛋白含量。结果经过粗提、DEAE阴离子交换层析、凝胶过滤层析及凝集素亲和层析等纯化步骤得到电泳纯的γGT,其比活为10.56U/mg蛋白,纯化倍数为84.9,得率为1.60%。结论该分离纯化方法能够较好地分离纯化人肝癌组织中欧蔓陀罗凝集素强结合的γGT。
- 王念跃赵伟李勇端木浩黄宇峰
- 关键词：Γ-谷氨酰转移酶人肝癌组织凝集素层析
- 应用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附法检测原发性肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶被引量：8
- 2009年
- 目的观察生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附（ELISA）法检测原发性肝癌（PHC）特异性欧曼陀罗凝集素强结合的γ-谷氨酰转移酶（DSA-GGT）的临床应用价值。方法对45例正常对照者、58例PHC患者和203例非PHC患者（包括其他肿瘤患者36例，肝良性病变患者167例），应用生物素-链霉亲和素ELISA法检测受试者血清中DSA—GGT的水平，同时用ELISA法检测受试者血清中甲胎蛋白（AFP）的水平。结果58例PHC患者中，DSA—GGT阳性38例，检测DSA-GGT诊断PHC的灵敏度为65．5％；203例非PHC患者中，DSA—GGT阳性18例，检测DSA—GGT诊断PHC的特异度为91．1％。该方法的平均批内及批问变异分别为8．9％和11．5％。58例PHC患者中，AFP阳性40例，检测AFP诊断PHC的灵敏度为69．0％；203例非PHC患者中，AFP阳性19例，检测AFP诊断PHC的特异度为90．6％。DSA-GGT与AFP联合检测诊断PHC的灵敏度和特异度分别为93．1％和85．7％。结论生物素-链霉亲和素ELISA法检测DSA—GGT和ELISA法检测AFP对PHC诊断的灵敏度和特异度相近，且前者的重复性良好，可作为PHC诊断的较好检测方法；DSA—GGT与AFP联合检测可显著提高PHC诊断的灵敏度。
- 王念跃赵伟张岱张永臣端木浩
- 关键词：生物素-链霉亲和素Γ-谷氨酰转移酶肝肿瘤酶联免疫吸附试验
- 人肝癌组织中DSA强结合的γ-谷氨酰基转移酶单克隆抗体的制备被引量：4
- 2007年
- 目的制备与欧蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰基转移酶(γGT)的单克隆抗体(mAb),并对抗体进行鉴定。方法以纯化的人肝癌组织DSA强结合的γGT为抗原,免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤(SP2/0)细胞融合,经ELISA筛选和有限稀释法获得稳定分泌mAb的细胞株。结果获得5株分泌抗DSA强结合γGT的mAb细胞株,其中3株分泌的mAb具有较高的特异性;ELISA法测定小鼠腹水mAb的效价≥625000;亚类鉴定mAb为小鼠IgG1。结论成功制备了抗DSA强结合γGT的单克隆抗体,为进一步建立免疫学检测方法奠定了基础。
- 王念跃赵伟刘晨张永臣李勇端木浩黄宇峰
- 关键词：单克隆抗体凝集素色谱
