上海市浦江人才计划项目(05PJ14085)
- 作品数：4 被引量：17H指数：3
- 相关作者：罗利军刘灶长周立国刘运华刘鸿艳更多>>
- 相关机构：上海市农业生物基因中心华中农业大学更多>>
- 发文基金：上海市浦江人才计划项目上海市科学技术委员会基础研究重点项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- OsI2基因的克隆及其植物表达载体的构建被引量：1
- 2007年
- 在旱稻IRAT109干旱胁迫下cDNA芯片分析结果的基础上,通过RT-PCR,5'-RACE及3'-RACE方法,从IRAT109总RNA中扩增得到了干旱胁迫下芯片表达谱中上升表达强度第二的基因全长序列,命名为OsI2,全长有523bp,并对基因序列结构进行了分析。该基因与全长cDNA文库中的CT836140.1有99%同源。OsI2基因编码产物对应1个包含57个氨基酸的开放阅读框(ORF),为一功能未知蛋白。其编码产物也可能对应两个中间相隔19bp的较小ORFs(43个氨基酸和42个氨基酸),都是功能未知的蛋白。在pBI121载体的基础上,将OsI2基因与CaMV35S连接成功构建了pBI121-OsI2植物表达载体,为进一步研究其功能创造了条件。
- 刘三雄刘灶长周立国余舜武刘鸿艳朱天生罗利军
- 关键词：SATIVA
- 高效、新T-DNA侧翼序列分离技术--Actail-PCR被引量：4
- 2009年
- 【目的】建立一种有效分离T-DNA插入突变体侧翼基因组序列的方法。【方法】分离侧翼的目标基因组序列是利用T-DNA标签法研究植物功能基因组学的一个关键步骤,笔者发展稳定高效的Actail-PCR分离技术。该技术一侧引物来自于T-DNA载体,另一侧引物为一个复性控制引物。复性控制引物在3'端为一个14bp的随机简并引物,在5'端非目标尾部序列接上一个通用引物,中间由5个多聚脱氧次黄嘌呤核苷(poly(dI))连接。【结果】Actail-PCR技术将随机简并引物重新编辑成复性控制引物,在40℃的低严谨条件下,3'端的随机简并引物可以与T-DNA插入突变体的侧翼目标区段随机的结合,扩增得到目标片段,随后利用5'端的通用引物与T-DNA载体上的巢式引物依次组合,在65℃(10个循环后逐步降温至58℃)的高严谨条件下逐步扩增特异片段,同时抑制非特异性扩增,可以显著提高目标片段的扩增效率,减少假阳性。【结论】相对传统的TAIL-PCR,Actail-PCR技术可以更高效地分离T-DNA插入突变体的侧翼基因组序列。
- 杨立勇刘灶长周立国罗华程罗利军
- 关键词：T-DNA侧翼序列TAIL-PCR
- 植物miRNA及其在植物发育进程和环境胁迫响应中的潜在功能被引量：7
- 2007年
- 文章介绍植物miRNA的产生、作用和miRNA的靶基因发掘以及miRNA在植物发育进程和环境胁迫响应中的潜在功能研究进展。
- 刘运华刘灶长罗利军
- 关键词：植物MIRNA发育进程胁迫响应
- 干旱胁迫下耐旱稻中旱3号全长cDNA文库的构建被引量：5
- 2007年
- 干旱胁迫导致很多基因的表达发生变化。以干旱胁迫下的耐旱稻品种中旱3号为材料,我们用SMART技术（RNA转录5′末端模板转换技术）成功构建一个高质量的干旱胁迫诱导的节水抗旱稻中旱3号全长cDNA文库。体外包装后感染大肠杆菌XL1-Blue宿主菌,未扩展文库的滴度为1.94×10^6pfu/mL,重组率为85.15%。扩展后文库的滴度为1.45×10^11pfu/mL。将λ噬菌体臂转入pTriplEx2质粒,从中随机挑选100个克隆,PCR扩增检测插入片段长度,结果显示文库插入片段在500～2000bp之间。
- 刘运华刘灶长周立国余舜武刘鸿艳罗利军
- 关键词：SMART技术干旱胁迫全长CDNA文库抗旱相关基因
