宁波市自然科学基金(2010A610064)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：徐冉行刘东海姚亚萍戎奇吉李宇宁更多>>
- 相关机构：宁波市第六医院慈溪市人民医院中国科学院上海生命科学研究院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 定量荧光PCR法验证流式细胞术测定人类白细胞抗原B27临界值标本的研究被引量：3
- 2013年
- 目的观察用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法来验证流式细胞术(FCM)检测人类白细胞抗原表达为临界值标本,评价其在强直性脊柱炎(AS)的临床诊治价值。方法分别对482例患者用流式细胞术检测人类白细胞抗原表达为阳性、临界值、阴性的样本及100名健康人群样本,以实时定量荧光PCR检测外周血HLA-B27DNA,确定样本的阳性率。结果 PCR法检测出阳性组调查282例阳性率100.00%、临界值组调查80例阳性率91.25%、阴性组调查120例阳性率为0.83%;健康对照组调查100名,阳性率3.00%。结论以定量荧光PCR检测>103为标准,FCM检测临界值组阳性率过高,差异有统计学意义,存在假阳性;阳性组和阴性组无明显差异,但阴性组有假阴性产生,定量PCR法对流式细胞术检测为临界值标本具有较高诊断价值,可防止假阳性和假阴性的产生,进一步提高AS诊断率和可靠性。
- 徐冉行李宇宁姚亚萍刘东海
- 关键词：聚合酶链反应强直性脊柱炎流式细胞术
- 强直性脊柱炎HLA-B27基因荧光定量诊断方法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的:建立一种强直性脊柱炎基因(HLA-B27)的荧光定量PCR(FQ-PCR)方法。方法:扩增强直性脊柱炎患者白细胞中的HLA-B27基因与质粒PGEM-TEasy Vector重组,转化大肠杆菌E.coli DH5α,获得克隆的HLA-B27基因标准模板。用DA7600 PCR仪检测FQ-PCR扩增产物制成标准曲线来定量检测标本中HLA-B27的浓度。结果:FQ-PCR扩增产物呈"S"形动力学曲线;ct(循环阈值)与PCR体系中起始模板拷贝数的对数值之间有较好的线性关系,显示了FQ-PCR定量的准确性。结论:FQ-PCR方法用于定量检测外周静脉血HLA-B27基因表达水平,具有较好的灵敏度、特异性,且操作简便、快速,易于普及,有良好的应用前景。
- 张建英徐冉行毛海红姚亚萍袁建树刘东海
- 关键词：HLA-B27基因
- HLA-B27基因荧光定量方法的确立与多种方法比较研究被引量：4
- 2015年
- 目的在原研究的基础上,重新合成Taqman探针,建立一种新的强直性脊柱炎基因HLA-B27荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,为临床治疗提供参考依据。方法 2012年1-11月收集的医院强直性脊柱炎282例,优化各种PCR条件,并与多种方法比较,检测强直性脊柱炎及相关的各类疾病,同期选择100名健康体检人群作为阴性对照,采用SYBR法和Taqman特异性探针荧光定量检测法。结果 FQ-PCR生成动力学有关的PCR扩增曲线由荧光信号强度周期数,HLA-B27的标准曲线是循环阈值之间线性关系(ct)和起始拷贝数;高度相关(0.999)揭示FQ-PCR的可靠性;确立的Taqman法有良好的线性和精度并与流式细胞和SYBR法比较,具有良好的相关性(P<0.05)。结论新确立的荧光定量PCR(Taqman)比其他方法更可靠准确,并有很好的应用价值。
- 戎奇吉孙讳浩徐冉行刘东海
- 关键词：HLA-B27基因荧光定量聚合酶链反应流式细胞
