重庆市自然科学基金(CSTC2011BB0146)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 重组人死亡受体6胞外结构域的制备及与淀粉样前体蛋白N端片段相互作用鉴定
- 2016年
- 人淀粉样前体蛋白氨基端切割片段(a cleaved amino-terminal fragment of amyloid precursor protein,N-APP)结合死亡受体6(Death receptor-6,DR6),会触发神经元和轴突依赖天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶的自我毁灭过程,从而导致阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的发生。为了在分子水平上研究N-APP-DR6诱导神经元退化途径,制备大量纯化的重组DR6胞外结构域以及鉴定NAPP和DR6胞外结构域的结合位点是关键。从甲醇毕赤酵母中成功表达并纯化了重组DR6胞外域(aa42-349),得率高达90 mg/L。为了验证DR6和NAPP的相互作用关系,构建谷胱甘肽转移酶-死亡受体6(GST-DR6)(aa42-349)融合蛋白原核表达质粒,转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21,表达融合蛋白GST-DR6(aa42-349),同时纯化得到DR6的配体NAPP,GST pull-down结果显示DR6与NAPP能够在细胞外发生相互作用。
- 牛纯青高香罗金华李伟刘秋萍陈韵刘堰
- 关键词：淀粉样前体蛋白GSTPULL
- 稀有鮈鲫HMGR基因全长克隆及雄鱼经五氯酚暴露基因表达的分析
- 2014年
- 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)是甲羟戊酸(mevalonic acid,MVA)途径中的第一个关键限速酶.克隆稀有鮈鲫HMGR基因全长,分析该基因在不同组织及雄鱼经不同浓度五氯酚(pentachlorophenol,PCP)暴露的表达差异,探索PCP对类固醇激素前体(胆固醇)合成水平基因转录调控的内分泌干扰机制.采用同源克隆策略及cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends,RACE),从稀有鮈鲫肝脏中首次克隆得到3 101碱基(bp)的HMGR基因cDNA全长,基因命名为GrHMGR(GenBank accession No:KF885724).GrHMGR编码884个氨基酸,系统发育树分析表明,GrHMGR编码的蛋白与其他鱼类来源的HMGR氨基酸序列同源性较高.Real-time PCR分析表明GrHMGR的表达有组织特异性,在大脑,性腺和肝脏中均有表达,性腺中表达量最高.稀有鮈鲫雄鱼经不同浓度PCP暴露后,GrHMGR在大脑和性腺的表达随PCP浓度的增加显著下降,然而在肝脏组织中表达趋势有所不同.HMGR的表达下降会减少胆固醇的合成.说明PCP暴露会通过干扰稀有鮈鲫的胆固醇合成途径,进而对内分泌系统产生影响.
- 邓川毛思予熊力张晓峥李伟高香刘秋萍陈韵刘堰
- 关键词：基因克隆HMGR五氯酚
- 力生长因子、E肽重组腺病毒的构建及其在神经细胞中的表达
- 2013年
- 力生长因子(mechano-growth factor,MGF)是新近发现的一种诱导性表达的生长因子,由IGF-1基因选择性剪接产生,力生长因子E肽(MGF-24E)是MGF区别于其它IGF-1剪接体的特异性C端序列,其在预防组织修复等方面有重要作用.采用Ad-Easy法成功构建MGF,MGF-24E重组腺病毒,重组腺病毒分别感染神经胶质细胞N9和神经元细胞SH-SY5Y,MTT法检测其对两种细胞增殖的影响.结果表明,经腺病毒介导可实现MGF和MGF-24E在神经细胞中的高表达,与对照组相比,MGF和MGF-24E在时间和浓度上对促进N9和SH-SY5Y细胞的增殖均有显著性效应,且二者效果相当.由此认为,MGF和MGF-24E具有促进神经损伤修复的同等作用力,为力生长因子用于基因治疗提供更为切实的理论基础.
- 苏永良刘堰
- 关键词：力生长因子重组腺病毒神经修复细胞增殖基因治疗
