北京市自然科学基金(7092110)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
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- 整合素连接激酶对视网膜色素上皮细胞生长、凋亡和分泌功能的影响被引量：3
- 2013年
- 背景 玻璃体视网膜手术后视网膜色素上皮（RPE）细胞的增生和移行是增生性玻璃体视网膜病变（PVR）发生的主要病理机制,干预RPE细胞的生物学行为对于PVR的靶向治疗有重要意义. 目的 观察整合素连接激酶（ILK）对RPE细胞生长、凋亡及分泌血管内皮生长因子（VEGF）的影响. 方法 用低糖DMEM培养基常规培养和传代人RPE D407细胞系,选择50代以内的细胞进行实验.应用特异性敲减ILK的小干扰RNA（siRNA） （ILK-siRNA）与100μl无血清培养基和RPE细胞共培养的方式转染RPE细胞作为实验组,应用非特异性siRNA转染RPE细胞作为对照组,分别将24孔板置于37℃、体积分数5％ CO2孵箱中孵育.转染48 h后,应用MTT比色法检测各组RPE细胞活力；应用流式细胞仪检测RPE细胞的生长周期及细胞凋亡情况；采用Western blot法检测并比较各组RPE细胞中cyclin D1和caspase-3表达水平的变化；应用ELISA法检测并比较各组RPE细胞分泌VEGF水平的变化. 结果 转染siRNA 48 h后,MTT法检测见实验组和对照组RPE细胞活力分别为（43.69±0.89）％和（73.95±1.20）％,实验组比对照组降低了40.92％,差异有统计学意义（t=49.524,P=0.000）.流式细胞术检测发现,实验组处于G1期的细胞数为（83.30±1.26）％,对照组为（47.10±0.93）％；实验组S期细胞数量显著减少,为（12.63±0.92）％,对照组为（36.25±1.21）％；实验组G2期细胞数量显著减少,为（4.07±1.40）％,对照组为（16.65±1.53）％,两组间G1、S、G2期细胞比例的差异均有统计学意义（t=56.624、-38.130、-14.860,均P=0.000）.实验组的细胞凋亡率为（15.18±1.22）％,对照组为（2.20±0.15）％,二者间差异有统计学意义（t=25.742,P=0.000）.Western blot 检测结果示,实验组cyclin D1的表达量明显降低,而caspase-3的表达量则明显增高.ELISA法检测结果示,实验组RPE细胞的VEGF分泌量为（1314.49±147.23） ng/L,比对照组的（3
- 郭丽莉于文贞黎晓新周玮琰谢万坤赵敏陈欢何培英
- 关键词：整合素连接激酶视网膜色素上皮细胞小干扰RNA增生性玻璃体视网膜病变
