云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目(2005PY01-12)
- 作品数：15 被引量：44H指数：5
- 相关作者：张文东张富强张应国范泉水宋建领更多>>
- 相关机构：成都军区疾病预防控制中心云南省动物疫病预防控制中心云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>
- 发文基金：云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目云南省科技攻关计划军队“十一五”科技攻关课题更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 云南边境禽流感H5N1亚型病毒血凝素基因进化特征分析被引量：4
- 2009年
- 目的：认识2003年～2008年期间云南边境禽流感H5N1亚型病毒血凝素（HA）基因的进化特征。方法：2003年～2008年期间在云南边境采集境外禽类样品380份,经H5/N1亚型特异性多重RT-PCR检测,对阳性样品中H5N1病毒HA基因进行RT-PCR扩增,克隆至pMD18-T载体测序,并与国内外已知参考毒株序列进行比对及系统发育分析。结果：多重RT-PCR检出18份阳性样品,阳性率4.74%;14份代表性病毒样品HA基因核苷酸和氨基酸序列同源性介于93.1%～99.3%、90.5%～99.1%;HA裂解位点序列存在4种不同排列方式,均具有高致病性禽流感病毒分子结构特征;系统发育分析表明阳性样品可划分为5个不同进化分枝（1、2.4、2.3.2、2.3.4、7）。结论：2003年～2008年期间云南边境境外H5N1亚型病毒间具有遗传差异,进化分枝2.3.4毒株已成为当地流行的优势毒株。
- 叶丛华张文东宋建领李静田建国吕粤岳亮邱薇李刚山冯子良郑颖张思东范泉水张应国王双印张富强
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型血凝素进化特征
- 云南地区马流感病毒检测及其HA基因序列分析被引量：7
- 2009年
- 马流感能引起马属动物的高度接触性呼吸道传染病。该病毒已知仅存在H7N7（马流感病毒1型）、H3N8（马流感病毒2型）两个亚型，目前仅H3N8亚型毒株在全球范围内引起马流感流行和暴发。采用A型及H3亚型特异性RT-PCR技术，检测云南疑似马流感病例鼻腔棉拭子样品；HA基因PCR扩增产物经纯化后，克隆至pMD18-T载体进行测序，并与已知代表性毒株对应序列进行比对及系统发育分析。研究发现云南马流感病毒与已知代表毒株血凝素基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别介于91．2％-99．2％和89．5％-98．4％，属于美洲谱系（American lineage）佛罗里达亚谱系（Florida sub-lineage）毒株。
- 田建国叶丛华张文东宋建领吕粤岳亮邱薇冯子良张思东范泉水张应国张富强
- 关键词：马流感病毒血凝素基因测序
- H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与表达被引量：5
- 2007年
- 根据已知H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因序列设计、合成克隆引物.自灭活的云南地方H5N1亚型病毒阳性临床组织样品中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTMDNA Poly-merase)扩增HA基因,采用Invitrogen定向表达系统(ChampionTMpET directional TOPO expression system)进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组HA,分子质量约78 ku.采用阳性血清经免疫印迹及ELISA分析重组HA的免疫反应性,结果表明重组HA能与H5N1亚型病毒抗血清发生特异性结合,具有良好的免疫反应性.
- 王金萍宋建领张文东李作生冯子良胡媛媛郭松辉张应国范泉水宋学林邱薇张富强
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型血凝素
- 禽流感病毒H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的研究被引量：1
- 2007年
- 在获得禽流感病毒多克隆抗体及H5亚型特异性单克隆抗体的基础上,研究建立H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5亚型禽流感病毒.优化反应条件,确定包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与RT-PCR方法比较.同时使用该方法对野外样品进行检测.结果表明:该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H5亚型禽流感病毒.
- 张文东宋建领王金萍李作生冯子良胡媛媛郭松辉张应国范泉水宋学林邱薇张富强
- 关键词：禽流感病毒
- 云南边境O型口蹄疫监测及病毒VP1基因序列分析
- 2008年
- 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的主要侵袭偶蹄动物的一种急性热性高度接触性传染病。口蹄疫病毒为微RNA病毒科口蹄疫病毒属成员,存在7个不同血清型,病毒VP1蛋白抗原性差异是病毒血清型划分依据,而其编码基因(1D)核苷酸序列差异是同型病毒拓扑型(Topotype)或基因型鉴别依据。采用O/A/C/Asia-1多重RT-PCR技术,对2006年自云南边境地区采集的120份动物组织样品,进行口蹄疫病原监测,检出O型口蹄疫病毒阳性样品15份。对阳性样品中病毒VP1基因全序列进行扩增、纯化后,克隆至pMD18-T载体测序,并与已知代表性毒株进行比对及系统发育分析。结果发现:云南边境O型口蹄疫病毒阳性样品VP1基因核苷酸序列同源性介于77.3%~98.7%,可划分为3个不同的拓扑型或基因型:中东-南亚型(ME-SA)或泛亚型(PAN-Asia)、古典中国型(Cathay)、东南亚型(SEA)。部分样品VP1蛋白表位43位、154位关键性氨基酸位点存在变异。
- 胡媛媛张文东宋建领赵焕云吕粤岳亮张应国李作生范泉水张富强
- 关键词：口蹄疫病毒VP1测序
- 云南边境禽流感H5N1亚型病毒血凝素基因分子结构特征分析被引量：8
- 2010年
- 目的分析2003-2008年云南边境禽流感H5N1亚型病毒血凝素(HA)基因分子结构特征。方法对2003-2008年在云南边境采集境外禽类样品420份,做H5/N1亚型特异性RT-PCR及多重RT-PCR检测,对阳性样品中H5N1病毒HA基因进行RT-PCR扩增,克隆至pMD18-T载体测序,并与国内外已知参考毒株序列进行比对及系统发育分析。结果21份代表性病毒样品HA裂解位点序列存在4种不同排列方式,均具有高致病性禽流感病毒分子结构特征;HA受体结合位点、糖基化位点及表位关键性氨基酸位点存在变异;系统发育分析表明可划分为5个不同进化分枝(1、2.4、2.3.2、2.3.4、7)。结论2003-2008年云南边境外H5N1病毒间具有遗传差异,进化分枝2.3.4毒株为当地流行的优势毒株,不同进化分枝或同一进化分枝不同毒株HA基因存在变异。
- 叶丛华张文东宋建领范泉水张应国张富强
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型血凝素分子特征
- 禽流感病毒型及亚型特异性免疫酶染色技术的研究
- 2008年
- 在获得禽流感病毒型及亚型特异性单克隆抗体的基础上,研究建立型及亚型特异性免疫酶染色技术,用于检测或鉴定禽流感病毒.优化反应条件,确定单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记二抗的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与病毒分离鉴定比较.结果表明该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床组织样品、鸡胚及细胞培养物中的禽流感病毒.
- 金卫华宋建领张文东赵毅王金萍李作生冯子良胡媛媛郭松辉张应国范泉水宋学林邱薇张富强
- 关键词：禽流感病毒免疫酶染色
- 禽流感病毒M1蛋白表(拟)位分析
- 禽流感病毒属于正粘病毒科流感病毒属 A 型流感病毒成员。禽流感病毒基因组由8个分节段的单股负链 RNA 组成,编码10种病毒功能蛋白。病毒第7节段 RNA 转录过程中,经剪接、编辑合成两条不同
- 宋建领张富强王金萍郭松辉
- 文献传递
- 云南高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因变异分析被引量：3
- 2008年
- 采用RT-PCR技术对云南2007年采集的48份猪组织样品中病毒Nsp2基因进行检测,获得阳性样品14份,选择5份代表性样品将其PCR产物纯化后,克隆至pMD18-T载体测序,并与已知代表性毒株进行比较及系统发育分析。结果发现云南病毒样品Nsp2基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为95.8%～99.0%和92.3%～98.6%。5份样品病毒Nsp2蛋白482位、534位～562位氨基酸均存在缺失,其中1份样品(YNMG)486位～489位氨基酸也发生了缺失。云南病毒样品在系统发育树上可划分为4个亚组群,分别与广东、广西、贵州、浙江、江苏、山东毒株遗传关系密切。
- 庞海洋赵焕云张文东张思东吕粤岳亮范泉水张应国张富强
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性NSP2基因
- 禽流感病毒型及亚型特异性免疫荧光技术的研究被引量：1
- 2007年
- 在获得禽流感病毒型及亚型特异性单克隆抗体的基础上,建立型及亚型特异性免疫荧光技术,用于检测或鉴定禽流感病毒.优化反应条件,确定单克隆抗体及异硫氰酸荧光黄标记二抗的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与病毒分离鉴定比较.结果表明:该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床组织样品、鸡胚及细胞培养物中的禽流感病毒.
- 宋建领张文东王金萍李作生冯子良胡媛媛郭松辉张应国范泉水宋学林邱薇张富强
- 关键词：禽流感病毒免疫荧光
